cytochrome oxydase et NADH activités réductase du cytochrome c ont été analysées biochimiquement dans gingiv.il hiops & gt; échantillons obtenus à partir de 22 patients de sexe masculin (23-72 âge) subissant un traitement parodontal. Histologiquement. 13 spécimens présentaient une légère inflammation, tandis que 9 ont montré des réponses inflammatoires plus sévères. l'activité de la cytochrome oxydase était significativement plus élevée dans le légèrement enflammée que dans des échantillons de tissus fortement enflammées. NADH cytochrome C réductase activité d'autre part, n'a pas été significativement modifiée par le degré croissant de l'inflammation. L'implication possible de l'effet de l'inflammation sur les enzymes oxydatives est discutée en relation avec les changements dégénératifs et prolifératifs qui se produisent dans les deux types de tissus.
Introduction
cytochrome oxydase (E.C1.9.3.1 .) et de NADH cytochrome C réductase (IPE 6. 2. I.) ont été déterminées dans gingival humain essentiellement normale (Eichel & amp; Sharhrik 1964), cependant ces paramètres ne sont pas analysées précédemment en relation avec les effets imposés par l'inflammation gingivale. études de respiration endogène ont révélé que le QOj est stimulée dans l'inflammation gingivale légère, et déprimé en gingivale très enflammée (Glickman el al 1949, Manhold & amp;. Volpe 196,1). Sur les études de polarographie récentes autre main (Zajieck & amp; Kindlova 1972) ont révélé que QO_ initial. Les valeurs sont restées constantes dans gingival humain et ne sont pas significativement altérées par le degré d'inflammation. Compte tenu de ces divergences de vues, nous tenons à rendre compte de l'effet de l'inflammation sur les activités réductase cytochrome oxydase et NADH cytochrome c dans les homogénats totales de gingival humain.
Méthodes et matériaux
Préparation des tissus
biopsies gingivales humaines ont été obtenues irom 22 patients de sexe masculin (23-72 ans), subissant un traitement parodontal. Bloc anesthésie loco-régionale a été administrée afin d'éviter l'infiltration des tissus. Le tissu a été enlevé chirurgicalement et coupé en deux parties dont l'une a été préparé pour l'étude histologique. L'autre a été lavé dans le froid 0,075 M tampon phosphate pH 7,0. pour éliminer le sang adhérant et rapidement congelé à - 70 & deg; C sur glace sèche. Le fro /en échantillons gingivaux ont été analysés pour leur activité enzymatique dans un jour après leur retrait. homogénats gingivaux ont été préparés par une modification des méthodes (Hoober & amp; Bernstein, 1966) utilisés tor l'homogénéisation de la peau de rat. Le tissu gingival congelé (poids humide 25 -5U mg.) A été immergé dans de l'azote liquide (-270'C) pendant 3 minutes, et on pulvérise pour petits fragments granulaires. Les fragments gingivaux ont été homogénéisés dans un tampon froid dans Ten Broeck homogénéisateurs de verre au sol qui ont été broyés pour être compatibles avec une tolérance de jeu o ((1,1 à 0,15 mm. Les activités enzymatiques ont été déterminées immédiatement après homogénéisation des tissus.
Enzyme Analyse
cytochrome oxydase (EC 1. 9. 3. 1.) (Wainio et al 1951.) a été déterminée par spectrophotométrie hy suite à l'oxydation du dithionite réduit le cytochrome c * à I al 25 & deg; C dans un Gilford modèle 2400 spectrophotomètre. dans des expériences nul, le taux d'auto-oxydation de lerrocytoehrome C avant l'addition de l'enzyme était négligeable. le E.VHI "", les valeurs d'absorbance pour homogénat sédimentation étaient la plupart du temps négligeable (0,0% en 16 échantillons), et en cas de détection variaient entre 0, (12 à 13,0. '; de la valeur enzymatique, la valeur moyenne de décantation était de 2,5 et plusmn;. 0,9 CI pour les 22 échantillons qui ont été analysés de décantation valeurs ont été déterminées par la re-réduction de la réaction médias avec un excès de dithionite, remettre en suspension le broyat dans le milieu réactionnel, et après le changement d'absorbance optique à temps Ejaonni de graphique. Les valeurs de sédimentation ont été soustraites de la valeur totale observée de l'absorbance obtenue dans les essais enzymatiques affectés et les activités spécifiques ont été déterminées à partir des valeurs corrigées. Le mélange réactionnel contenait: 75 mM KH..PO | -Na, .HPO4 tampon pH 6,75. 5,6 yM et le cytochrome c (25-150), la protéine de gabarit (homogenale) dans un volume final de 300 u. concentration Cytochrome c a été déterminée à partir du coefficient d'extinction millimolaire du cytochrome c H - ,, -,;, t] ll = 18,5 mm 'cm' pour la cvtoehrome réduite, moins oxydée c
NADH cytochrome c réductase.. NADH cytochrome c réductase (E. C. 1. 6. 2. 1.) (Jeng et al. 1968) a été déterminé par la suite de la réduction du cytochrome c à Er ,, Tnm à 25 ° C. Le coefficient d'extinction millimolaire utilisé pour le cytochrome c dans le dosage de la cytochrome oxydase a été utilisé pour cet essai. Le système d'essai contenait: 33 mM KHiPOi-NaoHPO, pH 7,75 tampon, S.2 FTM cytochrome c, 3,0 mM de KCN, 85 /MFR ** NADH et (25-150) ^ g de protéine (homogénat) dans un volume final de.. 300 II.
activités spécifiques
des activités spécifiques sont exprimés en nanomoies du cytochrome c oxydé (cytochrome oxydase) ou réduite (NADH cytochrome c réductase) par mg de protéine par minute.
Détermination des protéines
homogénats de tissus (10-20 /A) ont été digérées dans NaOH 0,05 N (concentration finale) pendant une heure à 25 ° et en C et analysés pour les protéines par la méthode de Lowry et coll .. ( 1951). albumine Crystalline *** a été utilisé comme une norme
.
Statistiques
La moyenne, l'écart type et l'erreur standard ont été déterminées pour chaque groupe. Les valeurs dépassant les limites et plusmn; 1,96 SD ont été rejetées. La différence entre chaque groupe a été analysé par le "student t" test et toutes les valeurs p. pulvérisation de la (question, décongélation et homogénéisation subséquente semble perturber de manière adéquate les cellules. La preuve de cette interprétation réside dans l'observation que la distribution du NADH cytochrome c réductase dans les deux gingivale légèrement enflammée et nettement enflammée ne variait pas de façon significative. Si la baisse de la cytochrome oxydase a été influencée par nos techniques de préparation des tissus, des résultats similaires devraient être observés dans les NADH cytochrome distributions c réductase. la quantité de décantation dans notre système d'essai a été jugée négligeable pour la plupart et il ne pouvait pas tenir compte de la baisse marquée l'activité du cytochrome oxydase observée dans la gencive nettement enflammée.
L'activité cylochiomc oxydase élevée observée dans notre étude coïncide avec les observations faites par Manhold et Volpj (1963) dans leurs endogènes études QCK de respiration de gencive humaine légèrement enflammée et de proliférer. L'augmentation de la QV & gt; et la cytochrome oxydase dans la gencive peut reflètent l'augmentation mitochondrial liaison à haute énergie (ATP) la synthèse, qui est nécessaire pour soutenir les processus hautement synthelic associés à la synthèse de l'ADN, la mitose, ainsi que la prolifération cellulaire. D'autres preuves d'exigences accrues bioencrgelic dans le pré-proliférant et les étapes prolifératifs du développement des cellules est l'observation que l'augmentation de la qualité de vie. (Respiration endogène) (Glickman el al. 1949), et la cytochrome oxydase (Fine 197 (1) atteint des pics d'activité à un moment où les principales hausses de l'indice mitolic et la prolifération (epitheiialization) se produisent dans la régénération de la gencive et de la peau des blessures. Sur la d'autre part IHE forte baisse de la cytochrome oxydase et endogène Qoo observée chez nettement enflammée (Manhold & amp;. Volpe 1963, Giickman et al 1949) gtngiva semblent être des réflexions de changements qui se produisent dans les mitochondries, ainsi que d'autres composants intracellulaires pendant la destruction des tissus gingivaux significative . Nous avons été incapables de DELECT une augmentation de la cytochrome oxydase dans gingivale nettement inflammation et la prolifération. bien que l'augmentation du QO endogène. a été détectée par Giickman et al. (1949) dans ce type de pathologie gingivale. Cependant, il est lhal concevable que l'inflammation affaisse une phase préproliférative (phase S de la mitose) se produit dans les cellules qui migrent au niveau du bord de la plaie qui nécessite la synthèse d'ATP accrue. par la suite une augmentation de la qualité de vie endogène. est également observée. Nos données cytochrome oxydase, et des données déclarées pour la respiration endogène QOj ne coïncident pas avec la QO polarographique. observations faites par Zajieek et Kindlova (1972), qui a rapporté thai initial QO_ & gt; les valeurs sont restées constantes dans la gencive humaine, et ne sont pas significativement modifiés par le degré d'inflammation.
NADH cytochrome c réductase activité n'a pas été sensiblement modifiée par le degré d'inflammation dans la gencive humaine. Nos données pour la gencive humaine parallèles l'observation faite par Eichel et Shahrik (1964), pour gingivale non enflammée humaine. NADH cylochrome c reductase l'activité a été jugée nettement supérieure à cytohrome oxydase dans nos études qui est en corrélation avec l'observation faite par Eiehcl et Shahrik