Résumé de l'arrière-plan
patients atteints de diabète de type 2 (DT2) ont augmenté la sévérité de la parodontite. récepteur Toll-like (TLR) 4, ses co-récepteurs CD14 et MD-2, et MyD88 adaptateur jouent un rôle essentiel dans le lipopolysaccharide (LPS) -triggered inflammation des tissus et de la parodontite. Cette étude a examiné les effets de DT2 et parodontite sur TLR4, CD14, MD-2 et l'expression MyD88 ARNm dans les tissus parodontaux enlevés chirurgicalement.
Méthodes
échantillons de tissus parodontaux ont été prélevés sur 14 patients sans parodontite et DT2 (Groupe 1) , 15 patients atteints de parodontite seul (groupe 2), et 7 patients à la fois avec la parodontite et le DT2 (Groupe 3). L'ARNm de TLR4, CD14, MD-2 et MyD88 a été quantifiée par PCR en temps réel et comparé entre les groupes.
L'analyse statistique des résultats a montré que l'expression de CD14 parodontale ARNm a été significativement réduite dans les groupes 1, 2 et 3 (p = 0,02
), tandis que l'expression de l'ARNm de TLR4, MD-2 et MyD88 ne différait pas significativement entre les groupes. En outre, lorsque les patients des groupes 1 et 2 ont été combinées (n = 22), l'expression de l'ARNm CD14 était significativement plus faible que chez les patients du groupe 1 (p
= 0,04). De Conclusions
expression CD14 ARNm a été régulée à la baisse dans les patients atteints de parodontite ni ni DT2, les patients atteints de parodontite seuls et les patients atteints de ces deux maladies, ce qui suggère que l'expression de l'ARNm CD14 est associée à une réponse de l'hôte favorable ou soumis à une régulation négative de la rétroaction.
Mots-clés
parodontite CD14 TLR4 l'expression génétique du diabète de fond
bactéries Gram-négatives sont les principaux agents pathogènes intervenant dans la parodontite, qui se caractérise par la destruction des tissus inflammatoires des structures en forme de dents de support [1]. Des études ont établi que l'hôte réponse immunitaire-inflammatoire à Gram négatif bactéries dérivées lipopolysaccharide (LPS) joue un rôle central dans l'initiation et la progression de la parodontite [2]. Comme une percée majeure dans la recherche parodontale, Beutler et ses collègues ont découvert en 1998 que le récepteur Toll-like (TLR) 4 est le récepteur LPS et médiatise LPS-déclenchés transduction de signalisation [3]. LPS déclenché par l'activation TLR4 conduit à une augmentation de la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires, des médiateurs et des métalloprotéinases de matrice (MMP) à partir d'une variété de cellules, y compris les monocytes, les macrophages, les neutrophiles, les lymphocytes et les fibroblastes gingivaux qui contribuent à l'inflammation et la destruction des tissus parodontaux [4]. En plus de TLR4, des études ont documenté que TLR4 co-récepteurs CD14 et MD-2, ainsi que des protéines adaptatrices TLR4 tels que le gène de réponse myéloïde différenciation primaire 88 (MyD88) sont également extrêmement impliqués dans le LPS déclenche une signalisation inflammatoire [8/5 ].
Il a été bien établi que la parodontite est plus fréquente et sévère chez les patients ayant mal contrôlé diabète de type 2 (DT2) que les individus non diabétiques [9-11]. Les résultats des études mécanistes indiquent que le DT2 mal contrôlé conduit à une réponse de l'hôte hyperinflammatoire à microbiote parodontale et altère également la résolution de l'inflammation et de réparation, ce qui conduit à la destruction parodontale accélérée [10]. Conformément à ces notions, une expression accrue parodontale de l'interleukine (IL) -6 et MMP-8 pour les patients atteints de parodontite ni ni DT2, les patients atteints de parodontite seuls et les patients atteints de ces deux maladies a été rapporté par notre groupe [12-14]. En outre, nous avons également démontré par nos in vitro
des études dans ce taux élevé de glucose améliore LPS déclenché l'expression des gènes pro-inflammatoires dans les macrophages et les fibroblastes gingivaux [15-19], ce qui indique que les facteurs DT2 associés tels que l'hyperglycémie améliorent l'inflammation parodontale et de tissus la destruction et donc exacerber la parodontite.
dans les études pour comprendre comment DT2 augmente la réactivité au LPS hôte, il a été démontré que DT2 augmente l'expression de TLR4 dans des cellules hôtes telles que les monocytes [20, 21]. Étant donné que TLR4 est le récepteur de LPS, il est plausible que la régulation positive de l'expression TLR4 sur la surface cellulaire rend les sites plus contraignants pour LPS et augmente ainsi la réponse des cellules à LPS. Par conséquent, il est important de déterminer si le DT2 augmente la réactivité de l'hôte de LPS en améliorant l'expression de protéines TLR4 et TLR4-associés dans les tissus parodontaux. Cependant, l'effet de DT2 sur l'expression parodontale de TLR4 et de protéines TLR4-associée chez les patients atteints de parodontite n'a pas été bien établie.
Dans cette étude, nous avons supposé que des molécules telles que CD14, MD l'expression de TLR4 ou TLR4-associé -2 et MyD88 sont réglementés par la parodontite et le DT2. Pour tester notre hypothèse, nous avons recueilli les tissus parodontaux de patients avec ou sans parodontite et DT2 au moment des interventions chirurgicales nécessaires et déterminé l'expression de l'ARNm de TLR4, CD14, MD-2 et MyD88 utilisant en temps réel la réaction en chaîne par polymérase (PCR) quantitative.
Méthodes
Trente-six patients de patients ont été sélectionnés à partir d'une population visée au programme parodontie post-doctoral dans le Collège de médecine dentaire à l'Université médicale de Caroline du Sud, Charleston, Caroline du Sud. Les patients recrutés comprenaient 14 personnes qui ne disposent pas de la parodontite et le DT2 (groupe 1), 15 patients atteints de parodontite seulement (groupe 2), et 7 patients atteints de ces deux maladies (groupe 3). Les patients du groupe 1 qui ont besoin d'interventions chirurgicales liées à la maladie non-parodontales, telles que l'allongement de la couronne et les extractions ont servi de témoins. Tous les tissus prélevés étaient les tissus parodontaux pris comme des colliers de la marge gingivale inclure à la fois l'épithélium et du tissu conjonctif
Les patients du groupe 2 et le groupe 3 a rencontré les critères diagnostiques suivants pour parodontite [12-14]. Une profondeur de sondage parodontal (PD) ≥ 5 mm au niveau de deux ou plusieurs dents, ou au niveau clinique de fixation (AL) ≥ à 5 mm au niveau de deux ou plusieurs dents. Les critères d'exclusion étaient les suivants: Les patients qui étaient enceintes ou incertain au sujet de l'état de grossesse, créatinine sérique ≥ 1,6 mg /dL, fonction hépatique anormale, hémoglobinopathie (trait drépanocytaire /anémie hémolytique) interférant avec l'hémoglobine A1c (HbA1c) surveillance, parodontite agressive, plaquettes et troubles de la coagulation, et /ou le refus de signer le formulaire de consentement éclairé ou entrent dans l'étude. Un examen oral, y compris PD parodontale et AL clinique a été effectuée. Six sites (mésio-buccales, buccale, disto-buccale, disto-linguales, linguales et linguales mésio-) ont été examinées pour chaque dent, à l'exception des troisièmes molaires. la profondeur de sondage a été définie comme étant la distance entre le bord de la gencive libre jusqu'au fond du sillon tandis que la récession gingivale a été définie comme étant la distance de la jonction émail-cément à la marge gingivale libre. Clinique AL a été calculé comme la somme des PD et la récession gingivale. Les patients des groupes 2 et 3 ont subi une chirurgie périodontique pour le traitement de la périodontite et de leurs tissus parodontaux, y compris l'épithélium et du tissu conjonctif ont été retirés à partir de sites sur la base du plus grand PD et /ou Al. Le PD et AL rapporté dans cette étude étaient liés aux sites de chirurgie. Le test HbA1c a été réalisée sur l'ensemble des patients pour documenter leur statut glycémique. DT2 a été diagnostiqué précédemment pour tous les patients dans le groupe 3. Tous les patients ont fourni un consentement éclairé pour la collecte des échantillons. Le protocole et le consentement des formes d'étude ont été approuvés par l'Université médicale de Institutional Review Board de la Caroline du Sud (numéro d'agrément: Pro00010000).
Isolement de l'ARN et de l'ARN transcription inverse (RT)
ARN total a été isolé à partir d'échantillons de tissus parodontaux utilisant Minikit RNeasy (Qiagen, Santa Clarita, CA). L'ADN complémentaire du premier brin (ADNc) a été synthétisé avec le kit de synthèse d'ADNc iScript ™ (Bio-Rad, Hercules, CA) en suivant les instructions fournies par le fabricant. La réaction a été actionnée pendant 5 min à 25 ° C, 30 min à 42 ° C et 5 min à 85 ° C en utilisant un ADN moteur PTC-200 (MJ Research, Waltham, MA).
PCR quantitative en temps réel
Le mélange de réaction RT à partir des expériences ci-dessus a ensuite été soumis à une amplification par PCR en temps réel. Le logiciel Designer Beacon (PREMIER Biosoft International, Palo Alto, CA) a été utilisée pour concevoir des amorces (tableau 1). Des amorces ont été synthétisés par Integrated DNA Technologies, Inc. (Coralville, IA). La PCR a été réalisée en double à l'aide d'un mélange réactionnel de 25 ul contenant le mélange réactionnel RT 1,5 ul, 0,2 uM de deux amorces et 12,5 pi d'iQ ™ SYBR Green Supermix (Bio-Rad). La réaction de PCR a été réalisée avec le système de détection en temps réel iCycler ™ (Bio-Rad). Quarante cycles consistant en une dénaturation (95 ° C pendant 10 s) et de recuit /extension (56 ° C pendant 45 s) ont été exécutés. Une expérience à l'état fondu de la courbe a été réalisée par la suite (à 55 ° C pendant 1 min, puis la température est augmentée de 0,5 ° C toutes les 10 s) pour détecter des dimères d'amorces. Les données ont été analysées avec le logiciel SmartCycler II. Le cycle de seuil moyen (Ct
) d'unités fluorescentes a été utilisé pour l'analyse. signal de quantification a été calculée en utilisant la
Ct du signal cible par rapport à celui de la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase (GAPDH) dans les mêmes ARN sample.Table 1 Les séquences d'amorces pour les gènes de PCR en temps réel
5 'séquence d'Primer
3' Primer sequence
CD14
CCGCTGCCTCTGGAAG
GGCGAGTGTGCTTGGG
TLR4
GTCCTCAGTGTGCTTGTAG
ATCCTGGCTTGAGTAGATAAC
MD-2
CACCATGAATCTTCCAAAGC
CTTGAAGGAGAATGATATTGTTG
MyD88
CGGATGGTGGTGGTTGTCTC
CGCTTCTGATGGGCACCT
GAPDH
CTGAGTACGTCGTGGAGTC
AAATGAGCCCCAGCCTTC
L'analyse statistique
L'âge, le sexe et la race des participants à l'étude sont présentés comme chefs d'accusation et les variables continues sont présentées sous forme de médianes. Le logiciel GraphPad Instat 3 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) a été utilisé pour l'analyse statistique. Nonparamétrique analyse des tests pour toutes les différences dans les variables continues entre les groupes de plus de deux ont été réalisées en utilisant la procédure de Kruskal-Wallis. tests d'analyse non paramétrique pour toute différence dans les variables entre deux groupes a été réalisée en utilisant la procédure de Mann-Whitney. Une valeur de p
& lt; 0,05 a été considérée comme significative. L'analyse de corrélation de la relation entre l'expression de l'ARNm de CD14 et PD, Al ou HbA1c a été évaluée par la méthode de Pearson. Nos études antérieures ont montré que la taille de l'échantillon de 7 ou plus à condition que suffisamment de puissance pour détecter la différence d'expression de l'ARNm du parodonte de l'IL-6 et de MMP-8 à travers des individus témoins qui ne dispose pas d'une parodontite et DT2, les patients atteints de parodontite seuls et les patients souffrant à la fois la parodontite et le diabète [13, 14] la population de l'étude de de. Résultats
Les données cliniques pour l'âge du patient, le sexe, la race, le tabagisme, l'HbA1c, PD parodontale et AL ont été présentés dans le tableau 2.Table 2 les patients et la maladie parodontale en trois groupes
Groupe 1: les patients sans diabète et la parodontite
Groupe 2: les patients atteints de parodontite seul
Groupe 3: les patients avec les deux parodontite et le diabète
numéro du patient
14
15
7
Age
58 ± 11
56 ± 11
63 ± 6
Sexe (homme /femme)
11/3
10 /5
7/0
Race et l'ethnicité
Caucasiens /Afro-Américains (nonHispaniques)
6.0 (12/2)
2.8 (11/4)
0,17 (1/6) *
état fumeurs (fumeurs /non-fumeurs )
0,4 (4/10) +
1.5 (9/6)
2.5 (5/2)
HbA1c (% )
5,81 ± 0,55
5,60 ± 0,56
8,19 ± 1,24 *
PD (mm)
2,45 ± 0,86 +
4,20 ± 2,00
4,80 ± 2,32
AL (mm)
2,48 ± 0,89 + 5,03
± 2,48
5.24 ± 2.39
Les données sont la moyenne ± SD. * P
& lt; 0,05 vs groupe 1 ou du groupe 2; + P
& lt; 0,05 vs groupe 2 ou groupe 3. PD
Probing profondeur, le niveau d'attachement de AL
Âge - L'âge des sujets des groupes 1, 2 et 3 ont varié de 42 à 79, de 40 à 79, et 52 à 71 avec une moyenne ± écart-type de 58 ± 11, 56 ± 11 et 63 ± 6, respectivement. Aucune différence significative entre les groupes a été trouvé
Sexe -. Les ratios de sexe masculin /sexe féminin dans les groupes 1, 2 et 3 étaient 3,7 (11/3), 2 (10/5), et 7 (7/0) , respectivement. Aucune différence significative n'a été observée entre les groupes
Race -. Les ratios de Caucasiens contre les Afro-Américains dans les groupes 1, 2 et 3 étaient 6,0 (12/2), 2,8 (11/4), et et 0,17 (1 /6), respectivement. L'analyse statistique a indiqué que les Afro-Américains dans le groupe 3 étaient significativement plus que ceux du groupe 1 ou du groupe 2, qui est compatible avec les précédents rapports que les Afro-Américains ont un risque élevé de développer le DT2 et la parodontite [22, 23].
fumeurs état - Les ratios fumeur /non fumeur dans les groupes 1, 2 et 3 ont été de 0,4 (4/10), 1,5 (9/6) et 2,5 (5/2), respectivement. L'analyse statistique a indiqué que les fumeurs dans le groupe 2 et le groupe 3 étaient significativement plus que ceux dans le groupe 1, qui est compatible avec les précédents rapports que le tabagisme est associé à un risque élevé de parodontite [24]
parodontite -. Le PD dans les groupes 1, 2 et 3 était de 2,45 ± 0,86, 4,20 ± 2,00 et 4,80 ± 2,32 mm, respectivement. Le AL dans les groupes 1, 2 et 3 était de 2,48 ± 0,89, 5,03 ± 2,48 et 5,24 ± 2,39 mm, respectivement. Une différence significative de PD et AL a été trouvée entre le groupe 1 et le groupe 2 ou du groupe 3, mais aucune différence significative de PD et AL a été trouvé entre le groupe 2 et du groupe 3.
Diabète - Tous les patients du groupe 3 ont déclaré avoir DT2. Le HbA1c moyen des groupes 3 variait de 7,0% à 10,7% avec un écart moyenne ± écart type de 8,19 ± 1,24% qui est significativement plus élevé que 5,81 ± 0,55% et 5,60 ± 0,56%, respectivement, dans le groupe 1 et groupe 2. Quatre les sept patients ont été prescrits metformine seule ou en combinaison avec Glucotrol (glipizide, Pfizer) ou l'insuline NPH (Humulin, Eli Lily and Company). Un patient était insuline prescrite glargine (Lantus, Sanofi-Aventis) l'insuline, un patient a été prescrit Aspart (NovoLog, Novo Nordisk), et un patient n'a pas signalé de prendre des médicaments pour le diabète. Expression
parodontale de CD14, TLR4, MD -2 et MyD88 en trois groupes
L'expression de CD14, TLR4, MD-2, et MyD88 dans les tissus parodontaux enlevés chirurgicalement a été avec succès quantifiés par PCR en temps réel. Comme on le voit dans le tableau 3, l'expression de CD14 est la plus élevée parmi les quatre gènes chez les patients sans parodontite et DT2 (groupe 1). Notre analyse statistique en utilisant nonparametric test de Kruskal-Wallis a montré que l'expression parodontale de TLR4, MD-2 et MyD88 avait aucune différence significative entre les 3 groupes. Fait intéressant, l'expression CD14 a été jugée significative entre les groupes régulés à la baisse 1, 2 et 3 (p = 0,020
). Nous avons également comparé l'expression de CD14 entre les deux groupes. Les résultats ont montré que, bien que l'expression de CD14 dans le groupe 2 (patients atteints de parodontite seul) est inférieure à celle dans le groupe 1 (patients sans que les deux parodontite et DT2), la différence est statistiquement non significatif. Cependant, lorsque les patients du groupe 2 ont été combinés avec le groupe 3 (deux patients atteints de parodontite et DT2), l'expression de CD14 était significativement inférieur à celui du groupe 1 (p
= 0,04) (Tableau 4). En outre, nous avons constaté que l'expression de CD14 dans le Groupe 3 est significativement inférieur à celui du groupe 1 (p
= 0,003), ce qui indique que l'expression de CD14 parodontales chez les patients présentant à la fois une parodontite et DT2 est significativement inférieur à celui des patients sans parodontite et DT2 .Tableau 3 expression parodontale de CD14, TLR4, MD-2 et MyD88 en trois groupes
Groupe 1 (n = 14
)
Groupe 2 (n = 15
)
Groupe 3 (n = 7
)
analyses non paramétriques (test de Kruskal-Wallis) pour toutes les différences dans les groupes
sans les deux parodontite et le diabète
Avec parodontite, sans diabète de
Avec les deux parodontite et
statistique de test du diabète
P
-value
CD14
1.92
1.39
0.68
7.81
0.02
(0.78, 11,88)
(0.30, 17.80)
(0,17, 1,66)
TLR4
0,74
0,58
0,74
0,97
0,62
(0,28, 5,25)
(0.15, 18.31)
(0,14, 1,25)
MD-2
0,46
0,35
0,50
1,49
0,48
(0,21, 2,96)
(0,04, 5,76)
(0,19, 1,66)
MyD88
0,81
0,61
0,71
3,32
0,19
(0.50, 1.21)
(0,22, 2,19)
(0.45, 1.01)
Les données présentées sont médianes (minimum, maximum)
Tableau 4 La différence d'expression de CD14 entre les patients Groupe 1 et combinés patients du groupe 2 et le groupe 3
Groupe 1 (patients sans parodontite)
combinaison du groupe 2 (patients atteints de parodontite seul) et le groupe 3 (patients avec les deux parodontite et le diabète )
deux queues
P
valeur
nombre des patients
14
22
0,04
médian (minimum, maximum)
1,92 (0,78, 11,88)
1,22 (0,17, 17,80)
données
présentées sont médianes (minimum, maximum)
La relation entre l'expression CD14 ARNm et PD, AL ou HbA1c
La relation entre l'expression CD14 ARNm et PD, AL ou HbA1c a été statistiquement analysées et aucune corrélation significative ont été trouvées entre l'expression CD14 ARNm et ces paramètres cliniques (tableau 5) .Table 5 La relation entre l'expression CD14 ARNm et PD, AL ou HbA1c
PD
AL
HbA1c
CD14 ARNm expression
n
36
36
36
r
-0.1271
-0.1862
-0.1967
p
0,4602
0,2770
0,2500
PD
profondeur Probing, niveau d'attachement
AL Discussion
Notre étude a démontré que le niveau CD14 ARNm a été significativement réduite dans les patients ni avec la parodontite, ni DT2, les patients atteints de parodontite seuls, et les patients avec les deux parodontite et DT2, ce qui suggère que la parodontite et DT2 régule négativement l'expression du gène CD14 dans le tissu parodontal. Nos résultats sont cohérents avec ceux de Jin et al., Qui ont rapporté que le taux de protéine CD14 dans les tissus de biopsies gingivales provenant de patients atteints de parodontite était significativement inférieure à celle des sujets sans parodontite [25]. Ils ont également signalé que le niveau de CD14 sécrétée dans le liquide gingival (GCF) était plus faible chez les patients avec des poches plus profondes que celle des patients avec des poches profondes moins [26]. Depuis leurs études ont porté sur CD14 niveau de protéines dans les tissus parodontaux, on ne sait pas si le niveau de la protéine CD14 diminution est le résultat d'une régulation négative de l'expression de CD14 ARNm qui peut suggérer l'implication de la régulation transcriptionnelle de l'expression de CD14. Notre étude a fourni le nouvel éclairage sur les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression de CD14.
Dans l'étude actuelle, nous avons utilisé en temps réel technique PCR pour quantifier le niveau de TLR4, CD14, MD-2 et MyD88 expression de l'ARNm dans le parodonte. Il est bien connu que la régulation de l'expression des cytokines au niveau d'ARNm via le facteur nucléaire kappa B (NFkB) médiée activation de la transcription joue un rôle crucial dans la parodontite [27]. Par conséquent, les études portant sur l'expression des gènes au niveau d'ARNm sont importants pour la compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la pathogenèse de la parodontite. En outre, étant donné que la PCR en temps réel est une méthode entièrement quantitative et bien contrôlée par la normalisation du gène de ménage, les données sont précieuses pour l'évaluation de l'expression génique. En plus de la quantification en temps réel par PCR de l'expression des gènes au niveau de l'ARNm, immunohistochimie et immunofluorescence sont également couramment utilisés dans les études d'expression génique au niveau de la protéine. Bien que ces méthodes ont des avantages dans la caractérisation du tissu ou de l'expression de gènes spécifiques de cellules au niveau des protéines, ils ont aussi inconvénient comme une approche semi-quantitative [28] qui peuvent conduire à des inter-étude de la variabilité. Par exemple, en utilisant une immunohistochimie, une étude a montré que la parodontite ont diminué TLR4 [29], mais une autre étude a démontré que l'augmentation du niveau de la parodontite TLR4 dans l'épithélium gingival [30].
CD14 a été caractérisé en tant que récepteur de LPS en 1990 [31], presque une décennie avant la découverte de TLR4. Alors que le TLR4 possède un domaine transmembranaire par le LPS déclenché par la transduction de signal, CD14 dépourvue du domaine transmembranaire et est incapable de transmettre la signalisation de LPS. CD14 est ancrée avec le glycosylphosphatidylinositol (GPI) sur la surface de la cellule et exprimé sous la forme d'une glycoprotéine de 55 kDa [32]. En plus de la forme liée à la membrane (mCD14), CD14 est également exprimé sous une forme soluble (sCD14) par la sécrétion de CD14 sans couplage à l'ancre GPI ou de verser ou de clivage de mCD14 [33]. La principale fonction de CD14 est de servir en tant que récepteur initial pour LPS et faciliter la liaison du LPS à TLR4 /MD-2 complexe [34]. En outre, CD14 reconnaît également d'autres motifs moléculaires associés à des pathogènes tels que l'acide lipotéichoïque [35].
Des études antérieures ont montré que CD14 a un double rôle en réponse à bactéries Gram-négatives [36]. Pour des exemples, une étude a montré que la neutralisation de CD14 empêché induite par le LPS réponse pro-inflammatoire incontrôlée et la mort d'accueil ultérieure [37], révélant un effet pro-inflammatoire de CD14. Une autre étude a cependant indiqué que, lorsque le CD14 a été bloquée, les animaux infectés par Shigella, un agent pathogène diarrhéique, ont montré une augmentation de 50 fois dans l'invasion bactérienne et une lésion tissulaire plus sévère par rapport aux animaux sans CD14 bloquant [38], ce qui indique un effet anti-inflammatoire effet de CD14. Ces études suggèrent que, bien que la régulation négative de l'expression de CD14 parodontale réduit l'effet stimulateur de LPS sur la signalisation proinflammatoire, il peut également porter atteinte à l'immunité innée contre les pathogènes LPS-indépendants et augmente ainsi l'inflammation des tissus.
Des études antérieures ont également montré le double rôle de CD14 dans le DT2. D'une part, il a été signalé que l'expression CD14 était significativement associée à DT2 et en corrélation avec les concentrations sériques de protéine C-réactive [39]; D'autre part, il a été signalé que l'injection de CD14 soluble recombinant humain à des souris diabétiques a augmenté action de l'insuline [40] et de la souris avec des cellules CD14 carence affiche une intolérance au glucose significative [41], ce qui suggère un rôle bénéfique de CD14 dans la signalisation de l'insuline et du glucose homeostatsis.
La constatation que CD14 a été downregulated chez les patients atteints de parodontite peut aussi révéler un mécanisme de rétroaction négative par laquelle le tissu parodontal des patients atteints de parodontite prévenir d'autres dommages causés par les attaques répétées des bactéries dérivées LPS. Fait intéressant, Nemoto et al. a rapporté que l'expression de CD14 sur les fibroblastes gingivaux humains (hgfs) a été nettement réduite par le phorbol 12-myristate 13-acétate (PMA) activés par les leucocytes polynucléaires (PMN), dans un système de coculture de HGF et PMN [42]. La poursuite de leur étude a montré qu'en raison de la réduction CD14, la production de cytokines inflammatoires induite par le LPS comme l'IL-8 a été supprimée par hgfs. Ces résultats suggère que, bien que les PMN activés jouent un rôle crucial dans l'inflammation des tissus, hgfs ont un mécanisme de rétroaction négative potentielle pour contrôler l'inflammation par régulation négative de l'expression de CD14.
En plus de CD14, notre étude a également examiné l'expression parodontale de TLR4, MD-2 et MyD88. Les résultats ont montré que l'expression d'ARNm de parodontales TLR4, MD-2 et MyD88 ont eu aucune différence significative entre les 3 groupes. Bien que notre étude est la première se concentrant sur l'expression TLR4 ARNm, Promsudthi et al. et Rojo-Botello et al. ont rapporté l'effet de DT2 et la parodontite chronique sur TLR4 expression de la protéine [29, 30]. Promsudthi et al. ont montré que les patients atteints de parodontite avaient réduit la protéine TLR4 dans l'épithélium gingival, mais les patients à la fois avec la parodontite et le diabète ont un pourcentage plus élevé de cellules TLR4-positifs statistiquement significatifs par rapport aux sujets parodonte sain [29]. Rojo-Botello et al. démontré que les patients atteints de parodontite et le diabète ont une protéine TLR4 plus élevée dans l'épithélium gingival que les patients atteints de parodontite seuls. De toute évidence, ces études ont porté sur la protéine TLR4 expression parodontale, mais notre étude visant à l'expression TLR4 ARNm.
Il a été bien documenté que l'expression CD14 est régulée positivement par le LPS et les cytokines inflammatoires in vitro
[43-45] . Cependant, les mécanismes impliqués dans la régulation négative de l'expression de CD14 n'a pas été bien établie. En plus de l'inhibition de l'expression de CD14 par les PMN, comme décrit ci-dessus, Imai et al. ont rapporté que le facteur de croissance transformant bêta (TGFß) 1 est capable d'inhiber stimulée par LPS dans des macrophages CD14 expression en réduisant le facteur de transcription de la protéine d'activation (AP) -1 [46]. Fait intéressant, notre étude récente a montré que l'expression parodontale TGFβ1 est augmentée chez les patients atteints de parodontite [47]. Par conséquent, il est probable que TGFβ1 joue un rôle dans la régulation négative de l'expression de CD14 parodontales chez les patients atteints de parodontite. Néanmoins, on ne sait pas comment l'expression CD14 est encore downregulated par DT2 et d'autres études sont nécessaires pour élucider les mécanismes par lesquels l'expression de CD14 parodontale est downregulated par parodontite et DT2.
CD14 expression de conclusions a été régulée à la baisse sur les patients atteints de parodontite ne ni DT2, les patients atteints de parodontite seul, et les patients avec les deux parodontite et DT2. Cette constatation indique que l'expression de CD14 est associée à une réponse de l'hôte favorable ou soumis à une régulation négative de rétroaction
abréviations
TLR:.
Toll like receptor
LPS:
lipopolysaccharide
MyD88:
gène myéloïde différenciation primaire de réponse 88, MD-2, facteur de différenciation myéloïde 2
PD:
profondeur Probing
AL:
niveau d'attachement
Déclarations Remerciements
Ce travail a été soutenu par le national Institut de recherche dentaire et craniofaciale (NIDCR) /National Institutes of Health (NIH) __gVirt_NP_NN_NNPS<__ DE016353 de subvention et le ministère des Anciens Combattants, Veterans Health administration, Bureau de la recherche et le développement, la recherche biomédicale en laboratoire et développement accorde 5I01BX000854 (à YH).
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concurrence. intérêts
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts des contributions des
auteurs
DCH:. Dr. Hedgpeth est un parodontiste qui a recruté des patients, a recueilli les tissus parodontaux après les interventions chirurgicales et ont fourni des données cliniques. XZ: Xiaoming est un spécialiste de la recherche qui a effectué l'isolement de l'ARN et l'expression des gènes en utilisant une analyse PCR en temps réel. JJ: Dr. Jin est un scientifique du personnel qui a effectué l'analyse de l'expression génique par PCR et analyse des données en temps réel. RSL: Dr. Leite est un parodontiste qui a recruté des patients, a recueilli les tissus parodontaux après la chirurgie, ont fourni des données cliniques, et a contribué à la préparation du manuscrit. JWK: Dr Krayer est un parodontiste qui ont contribué à la préparation du manuscrit. YH: Dr. Huang est un chercheur principal qui supervise le projet, y compris l'obtention de l'approbation éthique, la conception expérimentale, l'analyse des données et la préparation du manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
