intellectuelle
Résumé de l'arrière-plan
mutans streptocoques (Streptococcus mutans
et S. de
) sont considérés comme majeurs agents étiologiques de la carie dentaire. En utilisant une méthode de réaction en chaîne par polymérase, nous avons détecté ces bactéries à partir de 145 patients ambulatoires (âgés de 6-30 ans) ayant une déficience intellectuelle (DI) et leur présence a été comparée à l'incidence de la carie dentaire.
Méthodes
ont été recueillis des échantillons de plaque de tous éclaté sites des dents chez les sujets avec une brosse à dents stérile. Un examen dentaire a été effectuée pour déterminer le nombre de dents cariées et obturées (score DFT) en dentition permanente à l'aide de l'OMS caries critères diagnostiques. Un U-test de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer les caries scores entre les combinaisons des bactéries, et avec un test de Wilcoxon utilisé pour comparer les caries scores entre la ligne de base et après 1 an.: Résultats
Parmi tous les sujets, S. mutans
et les
de S. ont été possédés par 78,7 et 83,5%, respectivement, alors que 13,1% étaient positifs pour S. mutans
seul, 17,9% pour S. de
seul, et 65,6 % pour les deux organismes, avec 3,4% étaient négatifs pour les deux. Le score DFT moyen des sujets positifs à la fois pour S. mutans
et S. de
à après 1 an était significativement plus élevé que celui de ceux positifs pour S. mutans
seul (P
& lt; 0,01 ). L'augmentation de l'augmentation de la carie a également été significativement plus élevée chez les sujets avec les deux bactéries détectées (P
& lt; 0,001).
Conclusion
Nos résultats indiquent que les patients avec ID hébergeant les deux S. mutans
et S. sobrinus
avoir une incidence significativement plus élevée de caries dentaires que ceux avec S. mutans
seul.
fond
mutans streptocoques (Streptococcus mutans
et S. de
) sont considérés comme principaux agents étiologiques de la carie dentaire chez l'homme [1-3]. Ces bactéries sont les agents pathogènes les plus courants putatifs isolés à partir de la plaque dentaire humaine et leur prévalence a été rapporté dans les études épidémiologiques [4-7]. Diverses méthodes ont été utilisées pour la détection d'agents pathogènes, y compris putatifs microscopie directe, la culture, les essais enzymatiques, des analyses et des espèces spécifiques des sondes d'ADN immuno-enzymatique. Plusieurs chercheurs ont également développé des réactions en chaîne (PCR) de polymerase et rapportées à être plus sensible pour la détection par rapport aux techniques classiques de culture [8, 9], car ils se sont révélés être capables de détecter un faible nombre (5-100) des cellules bactériennes [9, 10], alors qu'ils sont aussi rapides et relativement simple à réaliser. En outre, des tests de PCR ont été trouvés appropriés pour la détection et l'identification spécifique des bactéries cariogènes humaines, y compris S. mutans
et S. de
[10, 11].
Dans les études transversales et longitudinales précédentes, nous avons signalé que les enfants d'âge préscolaire avec dentition primaire hébergeant à la fois S. mutans
et S. de
avait une incidence significativement plus élevée de caries dentaires que ceux avec S. mutans
seul [6, 12]. Récemment, nous avons également constaté que les écoliers hébergeant les deux S. mutans
et S. de
avait significativement plus grande expérience de la carie dentaire dans les deux dents permanentes et primaires par rapport à ceux avec S. mutans
seul [13] . Ainsi, l'identification et la détermination de la prévalence de ces agents pathogènes sont d'une importance fondamentale pour la compréhension de l'initiation et le développement des caries dentaires, et pour déterminer de meilleures formes de traitement et de prévention. Cependant, peu d'études longitudinales de la relation entre ces deux espèces et les activités de caries chez les enfants [12, 14] ou des personnes ayant une déficience intellectuelle (DI) [15] et le syndrome de Down [16] ont été réalisées.
Personnes à l'ID qui sont pris en charge à la maison par les membres de la famille peuvent aussi souffrir d'une mauvaise hygiène buccale, comme le nombre de bactéries plus élevés ont été trouvés dans les sujets avec ID par rapport à ceux sans handicap [17]. Les méthodes disponibles pour traiter et prévenir la carie dentaire, et d'améliorer les individus d'hygiène buccale ayant un handicap grave sont limitées. Cependant, il est important pour les cliniciens à choisir parmi les différentes techniques disponibles pour la prévention de la carie dentaire chez leurs patients avec ID en fonction du risque. Dans la présente étude, nous avons détecté S. mutans
et S. de
chez des patients japonais avec ID en utilisant une méthode PCR, puis comparé leur présence à l'incidence des caries dentaires sur une période de 1 an.
Méthodes
cent quarante-cinq patients ambulatoires avec ID (un quotient intellectuel (QI) ≤ 70) âgés de 6 à 30 ans et chacun avec denture mixte ou permanente, qui a visité l'hôpital universitaire de Hiroshima, la ville d'Hiroshima ont été inclus. Les données démographiques des patients externes participants et des données sur leur statut d'invalidité, le QI, les maladies systémiques et l'histoire des médicaments réguliers (le cas échéant) ont été recueillies à partir des dossiers médicaux. Les sujets ont été constitués de 135 avec ID et 10 avec le syndrome de Down, et un total de 106 (73,1%) des hommes et 39 (26,9%) femmes ont été examinées (tableau 1). Le consentement à la participation a été obtenue à partir d'au moins un de leurs parents avant l'étude selon les directives éthiques de la Déclaration d'Helsinki (1975) et la clairance éthique a été obtenue du Comité d'éthique de l'Université de Hiroshima (. Epidémiologie-No 34). Chaque sujet a subi un examen dentaire effectué dans la clinique dentaire de soins spéciaux par un seul dentiste bien formé (MO) en position assise dans un fauteuil dentaire dans une position couchée, en utilisant l'OMS caries critères de diagnostic pour déterminer les dents cariées et obturées (DFT) index [18]. Ceux qui avaient reçu des antibiotiques au cours des 3 mois précédents ou avec des maladies systémiques étaient excluded.Table population 1 Étude selon l'âge et le sexe
Age
Male
Female
Total
(years)
No.
%
No.
%
6–10
12
92.3
1
7.7
13
11–15
19
86.4
3
13.6
22
16–20
21
77.8
6
22.2
27
21–25
32
69.6
14
30.4
46
26–30
24
64.9
13
35.1
37
La plaque dentaire a été recueillie à partir de toutes les dents ont éclaté par brossage avec une brosse à dents stérile pendant 1 min à l'aide d'un procédé décrit précédemment [19]. Pendant le brossage des dents, la plaque adhérant à la brosse à dents a été éliminé par plusieurs lavages dans un tube d'eau distillée stérile. Les échantillons de plaque dentaire dans le tube ont été immédiatement transportés au laboratoire de recherche et stockés à -20 ° C, avant l'extraction de l'ADN génomique.
Streptococcus mutans
JCM5175 et S. sobrinus
ATCC27607 ont été utilisés comme espèces témoins . la détection par PCR de l'espèce cible a été réalisée en utilisant des amorces décrites par Igarashi et al. [8, 10]. Les amorces oligonucléotidiques ont été conçues pour la dex de la séquence d'ADN de S. mutans de (GenBank accession no. de D49430) et
(GenBank accession no. M96978) de S.. Pour S. mutans
, l'amorce sens, 5 'TAT GCT GCT ATT GGA GGT TC 3', est complémentaire de la séquence 973-992, et l'amorce inverse, 5 'AAG GTT GAG CAA TTG AAT CG 3', est complémentaire de la séquence 2225-2244. Pour S. de
, l'amorce sens, 5 'TGC TAT CTT TCC CTA GCA TG 3', est complémentaire de la séquence 134-153, et l'amorce inverse, 5 'GGT ATT CGG TTT GAC TGC 3', est complémentaire de la séquence 1726-1743.
les amorces pour 16S eubactéries séquence d'ARN ribosomique (GenBank numéro d'accession M75035) ont été utilisés pour confirmer la présence de bactéries dans des échantillons de plaque de contrôle positif [20]. L'amorce sens, 5 'CAG GAT TAG ATA CCC TGG TAG TCC ACG C 3', est complémentaire de la séquence 783-810, et l'amorce inverse, 5 'GAC GGG CGG TGT GTA CAA GGC GCC GGA ACG 3', est complémentaire à la séquence 1378-1407. La taille du produit de PCR attendu était de 625 pb
. Échantillons plaque ont été d'abord soumis à une centrifugation à 1600 × g
pendant 20 min. Ensuite, le surnageant a été éliminé et les culots cellulaires individuels ont été conservés à -20 ° C jusqu'à l'isolement de l'ADN, pour lequel les pastilles ont été remises en suspension dans 180 ul de tampon de lyse enzymatique (20 mM de Tris-HCl, pH 8,0; 2 mM d'EDTA, 1,2% Triton X-100, 20 mg /ml de lysozyme). Une préparation d'ADN génomique de chaque échantillon de plaque a été obtenue en utilisant un sang DNeasy® et Kit Tissue (Qiagen, Austin, TX, USA) pour l'extraction de l'ADN des bactéries Gram-positives, à laquelle nous avons ajouté un traitement RNase [21]. Les concentrations d'ADN dans les échantillons de plaque dentaire ont été déterminées par la mesure de A
260, tandis que la qualité a été estimée à l'aide 260 /A
280 ratio de A [22].
polymerase chain reaction amplification a été réalisée dans un mélange réactionnel (25 pi) constitué de billes de PCR (GE Healthcare UK Limited, Little Chalfont, Buckinghamshire, Royaume-Uni) qui contiennent une enzyme (deux unités de Taq
ADN polymérase) et de la tenue réactifs, ainsi que 25 pmol de chaque amorce, et 20 à 50 ng de la solution d'ADN matrice dans un cycleur thermique (DNA Engine PTC-220 DYAD TM, MJ Research, Hatoboro, PA, USA). Chaque ensemble de PCR analyses comprenait un contrôle négatif (blanc de l'eau) en plus du contrôle positif. Le mélange réactionnel a été dénaturé à 95 ° C pendant 3 min, suivie par 26 cycles de dénaturation à 95 ° C pendant 1 min, un annelage à 55 ° C pendant 1 min et extension à 72 ° C pendant 1 min, avec un cycle final de 94 ° C pendant 1 min, 55 ° C pendant 1 min et 72 ° C pendant 5 min [8]. Après amplification, 15 ul des produits de PCR ont été analysés par électrophorèse sur un gel d'agarose à 1,0% et, après coloration au bromure d'éthidium, les fragments d'ADN nouvellement synthétisés ont été visualisées sous une lumière ultraviolette à 302 nm. Les tailles des produits de PCR ont été estimés à partir de la migration électrophorétique des produits par rapport à un marqueur d'échelle de 100 de base (Amersham Pharmacia Biotech, AB, Uppsala, Suède). La sensibilité de la méthode de PCR a été testée en utilisant des quantités connues de S. mutans purifiés
Le plus ATCC27607 de S. JCM5175 et comme matrice. L'ADN a été dilué en série également utilisé comme matrice, et la limite de détection était de 1 pg d'ADN de S. mutans
(12 cellules) et 100 fg d'ADN matrice pour la S.
(9 cellules) (données non montré).
statistiques descriptives et des analyses statistiques ont été effectuées en utilisant un progiciel statistique du logiciel (SPSS 14.0, Inc., Chicago, IL, USA). Un U-test de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer les caries scores entre les sujets possédant les diverses combinaisons de bactéries, et un test de Wilcoxon rank pour comparer les caries scores entre la ligne de base et à 1 an plus tard
. Tableau 2 spectacles de résultats prévalence des caries chez les sujets avec ID possédant S. mutans
seul ou en combinaison avec
S. au départ et après 1 an. S. mutans
et les
de S. ont été trouvés dans 78,7 et 83,5%, respectivement, de nos sujets avec ID. En outre, 13,1% étaient positifs pour S. mutans
seul, 17,9% pour S. de
seul, et 65,6% pour les deux, tandis que 3,4% étaient négatifs pour les deux S. mutans
et S. sobrinus
. Le score DFT chez ceux positifs pour les deux organismes à 1 an était significativement plus élevé que celui de ceux positifs pour S. mutans
seul (P
& lt; 0,01). En outre, ce score chez les sujets positifs pour les deux après 1 an était significativement plus élevée que dans la ligne de base (P
& lt; 0,001) et l'augmentation de la note DFT chez ceux positifs pour les deux était significativement plus élevée que chez les sujets positifs pour S. mutans
seul (P
& lt; 0,01)
le tableau 3 présente les sujets présentant des caries précédentes expériences à l'inclusion et la carie des augmentations progressives après 1 an, ainsi que la combinaison de streptocoques mutans détectée.. Dix-sept (89,5%) avec S. mutans
seul, et 86 (90,5%) avec les deux S. mutans
et S. de
eu des caries expériences passées. Quatre (21,1%) des sujets avec S. mutans
seul, 9 (34,6%) avec S. de
seul, et 54 (55,7%) à la fois eu augmentation des caries incrémenter, alors qu'aucun des sujets ne possédant ni organisme a montré une augmentation de l'incrément. En outre, environ 60% des sujets avec les deux ont eu une augmentation de la carie d'accroissement au cours de la période d'étude de 1 an, alors qu'environ 20% de ceux avec S. mutans
seule a démontré une telle Caries prévalence increase.Table 2 chez les patients atteints S. mutans
seul ou en combinaison avec S. de
au départ et après 1 an
Oraganism présente
moyen (SD) DFT
Augmentation de DFT
Range
S. mutans
S. sobrinus
No. des sujets (%)
Baseline
Après 1 an
moyen (SD)
+
-
19 (13.1)
6,47 (4,64)
6,95 (4,61) *
0,47 (1,22) *
0 -5
-
+
26 (17,9)
5,96 (5,03)
6,42 (5,33)
0,46 (0,71)
0-2
+
+
95 (65,6)
8,65 (7,60) †
10.31 (8.13) * †
1,65 (2,04) *
0-9
-
-
5 (3.4)
0,60 (1,34)
0,60 (1,34)
0.00 (0.00)
0
signification statistique entre les groupes: * P
& lt; 0,01, Mann-Whitney U-test; † P
& lt;. 0,001, test de rang de Wilcoxon de données pour les scores DFT sont présentés sous forme de moyenne (SD)
Tableau 3 Les patients ayant une expérience de la carie au départ et des augmentations progressives après 1 an, et la combinaison de streptocoques mutans détecté
Organism présent
caries expérience antérieure
caries augmentation progressive
S. mutans
S. sobrinus
No.
%
No.
%
+
-
17
89.5
4
21.1
-
+
22
84.6
9
34.6
+
+
86
90.5
54
55.7
-
-
1
20.0
0
0.0
analyse PCR avec des amorces d'ARNr 16S a confirmé la présence de l'ADN bactérien dans tous les échantillons de plaque (données non présentées) Rapport
Les personnes ayant une déficience intellectuelle et soignés à domicile par des membres de la famille souffrent souvent d'une mauvaise hygiène buccale de., comme ils ont été rapportés pour avoir le nombre de bactéries supérieures par rapport aux personnes non handicapées [17]. Les méthodes disponibles pour traiter et prévenir la carie dentaire, et aussi d'améliorer l'hygiène bucco-dentaire pour les patients souffrant de handicaps graves sont limitées, mais il est important pour les cliniciens à choisir une technique appropriée pour la prévention des caries dentaires sur la base du risque de leur développement dans leurs patients ID.
Nous avons effectué l'étude longitudinale présente pour comparer la présence de streptocoques mutans à l'incidence de la carie dentaire chez les patients japonais avec ID sur une période de 1 an en utilisant une méthode PCR. La concentration moyenne de l'ADN récupéré de brossage des échantillons de plaque a été d'environ 700 pg /ml, qui a été jugée suffisante pour effectuer cette enquête basée sur la PCR. Pour assurer la présence d'un échantillon représentatif de bactéries dans tous les cas et en l'absence de substances inhibitrices de PCR, on a effectué une des tests de PCR à large spectre d'application des amorces basées sur l'ARNr 16S d'eubactéries et on soumet tous les échantillons obtenus par la méthode de brossage des dents. Ceci a confirmé la présence de bactéries et d'ADN bactérien dans tous les échantillons de plaque (données non présentées). Cette méthode a été présentée comme un moyen plus sensible de détection de micro-organismes cariogènes par rapport aux techniques classiques de culture [8-11].
Les résultats de l'étude actuelle indiquent que la prévalence des streptocoques mutans chez les patients âgés avec l'ID 6-30 ans est de 96,6%, ce qui est en accord avec des études similaires menées avec les enfants des écoles dans d'autres parties du monde [23-26], alors que la prévalence des streptocoques mutans chez les adultes a été signalé comme étant supérieure à 60% [27] et 82,7% chez les sujets atteints du syndrome de Down âgés de 1-48 ans [16]. La prévalence de S. de
seul dans la présente étude était plus élevée que dans ces études. Cependant, ces études employées méthodes culturales et les résultats antérieurs ont montré que la bacitracine gélose mitis-salivarius inhibe la croissance de S. de
à un degré plus élevé que celui de S. mutans
[28, 29]. Ainsi, les résultats contrastés peuvent avoir été en raison de la méthode d'isolement et de détection plus sensible utilisé pour S. de
dans notre étude par rapport à celles utilisées dans le passé, ainsi que des différences dans le type et le stade des lésions carieuses dans le sujets. Néanmoins, étant donné que la cohorte actuelle est limitée, des études supplémentaires sont nécessaires. Le score
DFT chez ceux positifs pour les deux organismes à après 1 an était significativement plus élevé que celui de ceux positifs pour S. mutans
seul. En outre, ce score chez les sujets positifs pour les deux après 1 an était significativement plus élevée que dans la ligne de base et l'augmentation de la note DFT chez ceux positifs pour les deux était significativement plus élevée que chez les sujets positifs pour S. mutans
seul. L'augmentation progressive des caries chez les sujets possédant à la fois des organismes était de 3,5 fois plus élevé que pour ceux avec S. mutans Le plus seule, ce qui indique que les individus ayant l'ID possédant à la fois des caries ont des activités plus élevées que celles avec seulement S. mutans.
Dans notre étude précédente, l'augmentation du score DFT pour les dents primaires chez les enfants d'âge préscolaire possédant à la fois était quatre fois plus élevé que pour ceux qui possèdent S. mutans
seul [12]. Les résultats actuels de PCR ont montré que les sujets avec ID possédant les deux S. mutans
et S. de
eu une augmentation d'augmentation significativement plus élevée caries incidence et par rapport à ceux avec seulement S. mutans
à après 1 an, qui est également d'accord avec les résultats d'études antérieures d'écoliers âgés de 11-12 ans [30, 31], ainsi que des études sur les enfants d'âge préscolaire âgés de 3-5 ans [6, 12, 32]. En revanche, il n'y avait pas de différence significative dans le score de base pour DFT entre les sujets positifs pour les deux S. mutans
et S.
et ceux avec S. mutans
seul, même si le score DFT de ceux positifs pour tant S. mutans
et S. de
ont montré une tendance à être plus élevé que celui de ceux avec S. mutans
seul.
Les présents sujets ont été traités en ambulatoire et ont été référés par dentaire locale cliniques en raison de leur coopération dentaire pauvre et déjà avaient des dents cariées non traitées. Toutes les dents cariées ont été immédiatement traités dans la clinique dentaire de soins spéciaux, donc les caries augmentation progressive des sujets positifs avec les deux S. mutans
et S. La
était significativement plus élevée que chez ceux avec S. mutans
seul . Dans des études antérieures, les sujets qui possédaient les deux bactéries ont eu une augmentation des caries incrémenter sur une période de 1 an [14, 33]. Les résultats de cette première étude ont suggéré que la prévalence de S. de
était plus étroitement associé à l'activité des caries futures, en particulier avec une augmentation des caries à surface lisse minimum, que la prévalence de S. mutans
. Cependant, la population de sujet dans la présente étude a été limitée, donc d'autres études sont nécessaires. En outre, on ne sait pas comment la colonisation mixte augmente le cariogène des bactéries, alors que les études quantitatives en utilisant une PCR en temps réel quantitative sont nécessaires pour comprendre les mécanismes de la carie risque accru pour les études futures
. Dix-sept (89,5%) avec S. mutans
seul, et 86 (90,5%) avec les deux S. mutans
et S. de
eu des caries expériences passées. Quatre (21,1%) des sujets avec S. mutans
seul, 9 (34,6%) avec S. de
seul, et 54 (55,7%) à la fois eu augmentation des caries incrémenter, alors qu'aucun des sujets ne possédant ni organisme a montré une augmentation de l'incrément. En outre, environ 60% des sujets avec les deux avaient une augmentation progressive de la carie sur la période d'étude de 1 an, alors qu'environ 20% de ceux avec S. mutans
seule a démontré une telle augmentation. Conclusions de
Dans conclusion, les résultats actuels d'études longitudinales indiquent que les individus avec un ID hébergeant les deux S. mutans
et les
de S. ont une incidence significativement plus élevée de caries dentaires que ceux positifs pour S. mutans
seul.
Déclarations
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concurrence. intérêts
les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. la YO de contributions des auteurs
, FH et MO desighned l'étude. MO a effectué l'examen dentaire. YO et MO ont recueilli des échantillons de plaque. YO et FH effectué le test PCR classique. YO et MO étaient responsables de l'analyse des données. Tous les auteurs ont participé au traitement du manuscrit et ont approuvé la version finale.
