épidermoïde oral
Résumé de l'arrière-plan
carcinome épidermoïde oral (CCCO) est associée à un taux de survie à 5 ans pauvres. En général, les patients diagnostiqués avec de petites tumeurs ont un assez bon pronostic, mais certaines petites tumeurs ont un comportement agressif conduisant à une mort précoce. Il n'y a pas actuellement de biomarqueurs pronostiques fiables pour les cancers oraux. Ainsi, pour optimiser le traitement pour le patient, il est nécessaire de biomarqueurs permettant de prédire le comportement de la tumeur
. Méthode
Dans la présente étude, la valeur pronostique potentielle de plectine a été évaluée par un microréseau tissulaire (TMA) immunohistochimique base l'analyse du tissu tumoral primaire obtenu à partir d'une cohorte norvégienne du Nord de 115 patients diagnostiqués avec CCCO. L'expression de plectine a été comparée avec des variables clinicopathologiques et survie à 5 ans.
Résultats
L'analyse statistique a révélé que la faible expression de plectine dans les cellules tumorales prédit une issue favorable pour les patients atteints d'une maladie non métastatique (p
= 0,008). En outre, l'expression de plectine a été trouvé pour corréler (p
= 0,01) avec l'expression de uPAR, dont nous avons déjà trouvé pour être un marqueur pronostique potentiel pour les tumeurs T1N0. Conclusions de
Nos résultats indiquent que une faible expression de plectine prédit une issue favorable pour les patients atteints de CCCO non-métastatique et le niveau de plectine d'expression peut donc être utilisé dans la stratification de traitement pour les patients atteints de la maladie à un stade précoce.
Contexte
carcinome spinocellulaire (SCC) comptes pour plus de 90% des tumeurs malignes de la tête et la région du cou [1, 2]. Tête et cou SCC (CETC) ont un taux de survie à 5 ans d'environ 50%, [3, 4] et sont classés comme la huitième cause de décès par cancer dans le monde [5].
CCCO comprend les tumeurs situées dans le mobile langue, plancher de la bouche, de la muqueuse buccale, rebord gingival et le palais dur et mou. La classification système de CCCO le plus largement utilisé est le TNM-système par l'Union internationale contre le cancer [6]. Ce système est utilisé pour décrire l'étendue anatomique de la maladie au moment du diagnostic basé sur la taille de la tumeur primaire et de l'étendue de la croissance tumorale (T), les ganglions lymphatiques régionaux métastases (N) et de métastases à distance (M), et constitue la base pour l'étape de regroupement ceux-ci patients [7, 8]. Par l'évaluation morphologique, les tumeurs sont classées aussi bien, modéré et mal différenciés [1]. Le TNM-classification, et dans une moindre mesure, le degré de différenciation, sont souvent utilisés comme prédicteurs de résultat. Cependant, OSCCs sont moléculairement hétérogène et des tumeurs à l'identique la classification TNM et le grade de différenciation peuvent être différentes de l'agressivité et de la réponse au traitement [7, 9]. Ce comportement imprévisible soulève la nécessité d'un outil de diagnostic qui peut fournir des informations pronostiques plus fiables.
Un modèle de risque basé sur l'analyse histologique des tumeurs a été proposé [10-12]. Cependant, dans une étude récente de ce modèle n'a pas prédire l'issue des patients atteints de la langue SCC [13]. Plusieurs rapports précédents ont proposé différents biomarqueurs, tels que p53, EGFR, Ki67 et E-cadhérine comme marqueurs pronostiques pour CCCO, [14-16] mais aucun n'a été mis en œuvre dans la pratique clinique. Pour tenter de trouver des marqueurs nouveaux et mieux pronostiques nous avons dans cette étude a porté sur plectine plectine est une grosse protéine intracellulaire du cytosquelette de linker (& gt; 500 kDa) qui a été jugée importante dans l'organisation du réseau du cytosquelette. Elle est exprimée dans la peau normale et dans la muqueuse epitheliale du tractus gastro-intestinal, les cellules musculaires et les cellules endothéliales des vaisseaux, [17], ainsi que dans le cancer survenant dans l'œsophage, de l'estomac, du poumon, du pancréas et de la cavité buccale [17, 18]. Plectine est localisée au niveau du côté interne de la membrane plasmique où elle est associée à des filaments intermédiaires (IF), microtubules et des microfilaments [19]. Dans hémidesmosomes, plectine interagit avec la queue cytoplasmique de la sous-unité intégrine β4. Des défauts dans le gène plectine ont été trouvés dans le grave, héréditaire, la peau cloques héréditaire épidermolyse bulleuse simple maladie, en insistant sur l'importance de la protéine dans les cellules épithéliales normales [20]. Plectine affecte les propriétés mécaniques, ainsi que dynamiques du cytosquelette, et (au moins dans les kératinocytes) a été montré plectine carence se traduire par une augmentation des taux de migration probablement par activation de la voie ERK1 /2 [21]. Dans une étude portant sur CETC, Katada et al. a constaté que le taux de survie des patients avec une forte expression plectine dans leurs cellules cancéreuses a été diminué de manière significative, et la fréquence des récidives significativement augmenté, par rapport aux patients avec une faible expression de plectine [22].
Dans une étude récente, nous avons montré que l'urokinase récepteur de l'activateur du plasminogène (uPAR) et l'activateur du plasminogène inhibiteur-1 (PAI-1) peut être des marqueurs pronostiques dans CCCO stade précoce [23]. uPAR est un constituant du système activateur du plasminogène (PA), et à la fois l'activateur du plasminogène urokinase (uPA) et l'uPAR sont liés à une activité protéolytique accrue et la migration des cellules cancéreuses. uPA convertit le plasminogène en plasmine, la sérine-protéase active, une protéase à large spectre qui peuvent dégrader de nombreux types différents de protéines de la matrice extracellulaire, en plus d'activer latente facteurs de croissance et métalloprotéases matricielles [24, 25]. Par la liaison de uPA à uPAR, les cellules cancéreuses peuvent diriger l'activité protéolytique sur la surface de la cellule [26]. Comme dans le cas plectine, l'augmentation de l'expression de l'uPAR a été liée à la transition phénomène épithélio-mésenchymateuse (TEM) [27-29].
Dans cette étude basée sur la TMA, une faible expression de plectine a été trouvé être un marqueur pour un pronostic favorable dans CCCO non métastatique. Plectine et uPAR ont montré des motifs de coloration similaires dans les tumeurs et il y avait une corrélation significative entre plectine et expression uPAR.
Méthodes
Specimens
Ce fut une étude rétrospective utilisant formaline fixé, des échantillons de tumeurs de paraffine de 115 patients avec histologiquement vérifié CCCO primaire dans la période 1986-2002 ont été recueillies à partir des archives du Département de pathologie clinique, Hôpital universitaire de Norvège du Nord. Pour sécuriser une cohorte homogène, les tumeurs avec des modèles de croissance verruqueux ainsi que des tumeurs de patients atteints de cancer précédente, ou une radiothérapie avant la région de la tête et du cou ont été exclus. Tous les patients présentaient une maladie primaire située dans la cavité buccale, y compris la langue mobile, plancher de la bouche, de la muqueuse buccale, la gencive et le palais dur et mou. données cliniques pertinentes et TNM classification ont été récupérées à partir des dossiers des patients, y compris les rapports de pathologie, la statistique de la Norvège et la cause de la mort du Registre. Les statuts N et M ont été déterminées par l'examen clinique et radiologique. Le tissu de la muqueuse normale languette a été obtenue à partir d'un tissu adjacent au tissu tumoral. L'étude a été approuvée par les comités régionaux pour la recherche médicale et de la santé éthique, Nord de la Norvège (n ° 22/2007). L'information du patient a été dépersonnalisés avant l'analyse. Le comité d'éthique a jugé inutile d'obtenir un consentement écrit ou oral des patients participants. Microarray
tissulaire (TMA)
Une région morphologiquement représentant de chaque tumeur a été identifiée sur un hématoxyline et l'éosine (HE) coulissent -stained, et carottes pour le TMA ont été récoltées à partir du bloc de tissu correspondant à l'aide d'un tissue arrayer Beecher Instruments Micro. Huit noyaux de 0,6 mm ont été prélevés dans les régions choisies du bloc donneur de chaque tumeur et insérés dans la paraffine receveuse blocs de puces à ADN. Quatre sections um d'épaisseur du fixe, inclus en paraffine tissus TMA ont été coupés avec un microtome et placés sur des lames Superfrost. HE-coloration et immunohistochimique cytokératine-coloration a été réalisée pour vérifier la présence de tissu tumoral.
Nous avons connu une perte de 16,5% des noyaux lors de la préparation, et des noyaux conservés, 8,4% contenaient trop peu de cellules tumorales à évaluer . Cette perte en raison de problèmes techniques est modéré par rapport à d'autres rapports [30, 31]. De chaque patient un nombre moyen de 3,82 noyaux colorés et évalués pour l'expression plectine.
Évaluée à partir de chaque patient était de 3,82.
Immunohistochimie (IHC)
Toutes les lames ont été déparaffinées et réhydratées. La récupération de l'antigène plectine a été améliorée par ebullition dans un système pressurisé avec 10 mM de tampon citrate (pH 7,0). En outre, les lames ont été incubées 30 minutes avec 3% de H
2 O 2 pour bloquer l'activité de peroxydase endogène, et on a incubé une heure avec 10% de sérum de chèvre (Dako, Glostrup, Danemark) dans du tampon phosphate salin (PBS) ( Dako, Glostrup, Danemark) afin de réduire la coloration non spécifique. Lapin anticorps monoclonal primaire contre plectine (ab32528, Abcam, Cambridge, MA) a été dilué à 1: 200 dans le diluant d'anticorps Dako (S3022, Dako, Glostrup, Danemark), et incubé pendant une nuit à 4 ° C. Par la suite, les anticorps liés ont été visualisés en utilisant l'anticorps anti-lapin système Envision Plus (K4011, Dako, Glostrup, Danemark). Les lames ont été lavées dans du PBS w /0,1% de Tween-20 à de fortes concentrations de sel (NaCl 0,4 M) et un pH de 6,0 (PBSTS6) après incubation avec des anticorps primaires et secondaires.
L'anticorps anti-plectine (ab32528 ) a été décrit précédemment et validé comme un bon marqueur pour adénocarcinome pancréatique [18]. En tant que témoin négatif, le tissu de cancer du pancréas a été traité selon le même protocole de coloration, mais l'anticorps primaire a été omis. Aucune coloration n'a été observée, indiquant que l'anticorps secondaire a pas de coloration non spécifique dans le tissu (données non présentées).
La coloration de la muqueuse buccale normale a montré une forte coloration spécifique des tissus musculaires dans les vaisseaux sanguins, servant de témoin positif.
La coloration uPAR a été réalisée selon précédente décrit les protocoles [23].
immunohistochimique notation
Tous les noyaux ont été examinés par un pathologiste expérimenté (SES) et une tête et du cou chirurgien formé (OR) sans connaître les résultats cliniques. La notation était semi-quantitative, [32, 33] et l'indice de coloration (IS) calculé en tant que produit de l'intensité de la coloration (aucune (0), faible (1), modérée (2) ou solide (3)) et la proportion de les cellules tumorales positives (pas de coloration (0), & lt; 10% (1) 10 à 50% (2) 51 à 80% (3) ou & gt; 80% (4)). Ainsi, le SI pour chaque noyau diffère d'une valeur minimale de zéro à un maximum de 12, et le score final du patient était le SI moyenne de tous les noyaux évalués. Tumeurs avec score supérieur à la valeur médiane ont été classés comme élevés exprimeurs », tandis que ceux avec un score sous la valeur médiane ont été classés comme ayant une faible expression du biomarqueur
. Immunofluorescence (IF)
Pour IF analyse les lames ont été prétraités comme décrit dans le protocole IHC pour plectine. Un anticorps anti-plectine polyclonaux de lapin (ab83497, Abcam, Cambridge, MA) recommandé pour IF a été utilisé. L'anticorps a été dilué à 1:10 dans du diluant d'anticorps Dako (S3022, Dako, Glostrup, Danemark) et on a incubé pendant 3 h à température ambiante. Après les lames ont été lavées avec PBSTS6, ils ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C avec l'anticorps anti-uPAR humain monoclonal de souris (# 3936, Sekisui Diagnostica, Stamford, CT, USA) à une dilution de 1:10 dans un tampon de 10 % de sérum de chèvre (Dako Amérique du Nord, Carpintera, CA, USA) dans du PBS avec 1% de BSA et 0,3% de Tween 20, pH 6,0. Après incubation, les lames ont été lavées avec PBSTS6. Les anticorps secondaires (Alexa Fluor 488, de chèvre anti-lapin, A11034 et Alexa Fluor 647, la souris de chèvre-anti, A21236, Invitrogen, Carlsbad, CA) ont été mélangés et dilués à 1: 200 dans du PBS. Les lames ont été montées et DAPI antifade (DAPI dans Fluorgard, 0,5 g /ml, insitus, Albuquerque, NM) et scellés avec du vernis à ongles. Les lames ont été observées et photographiées en utilisant Leica TCS SP5 microscope confocal laser avec le logiciel Leica Application Suite avancée Fluorescence (Leica Microsystems AG, Wetzlar, Allemagne).
La spécificité de l'anticorps anti-plectine polyclonaux (ab83497) utilisé dans la coloration par immunofluorescence a été testée par coloration adénocarcinome pancréatique. Similaire à l'anticorps anti-plectine monoclonal, l'anticorps anti-plectine polyclonaux spécifiquement colorées des cellules cancéreuses pancréatiques. En outre, Western blot de lysat entier des cellules musculaires a montré que l'anticorps a donné une bande de environ 500 kDa correspondant à la taille de plectine (données non présentées). Statistique
Toutes les données ont été totalisées et analysées à l'aide de la DGI SPSS Statistiques (Chicago, IL), la version 21. les associations entre les différentes variables catégoriques ont été évaluées par le test du chi carré Pearson`s. Les analyses univariées de l'influence des différentes variables sur le temps de survie spécifique de la maladie ont été effectuées en utilisant la méthode de Kaplan-Meier, et la signification statistique entre les catégories a été estimée par le test du log-rank. Les valeurs statistiquement significatives par analyse univariée COX ont été saisies dans une analyse multivariée en utilisant le modèle de régression de Cox pas à pas vers l'arrière. la mort spécifique de la maladie (DSD) a été défini comme les patients qui meurent sous forme CCCO et non pas de conditions non liées. Ces données ont été obtenues à partir de la «Cause du décès registre en Norvège. Corrélation entre bivariates a été calculé avec le rho de Spearman. Le cut-off pour l'expression basse et haute pour chaque biomarqueur a été fixé à la valeur médiane du score final du patient, et a été 5,60 pour plectine et 5,63 pour uPAR. Tous les résultats ont été considérés comme significatifs si p
& lt; 0,05, et rapportés selon les lignes directrices de ReMark par McShane et al. [34] Le point de départ a été défini comme le temps du diagnostic, et le dernier jour de suivi était de 1 Janvier er, 2012.
Résultats
Dans la présente étude, la valeur pronostique de plectine en CCCO a été évaluée par une analyse immunohistochimique à base de TMA du tissu tumoral primaire obtenu à partir d'une cohorte norvégienne au nord de 115 patients. La cohorte était constituée de 64 hommes et 51 femmes, avec un âge moyen de 65,2 ans (hommes 64,4 /femmes 66,0) au moment du diagnostic [23]. La majorité des patients ont présenté des petites tumeurs (T1, T2 ou 34%, 37%), pas de métastases des ganglions lymphatiques (N0, 63%) et une tumeur bien ou modérément différencié (90%). Comme prévu, la taille de la tumeur (T) et la présence de métastases ganglionnaires (N +) est significativement corrélée avec la mort spécifique de la maladie (DSD), tandis que le degré de différenciation n'a pas immunohistologique coloration modèle de.
Plectine langue normale à peine teinté muqueuse qui a servi de matériel de contrôle, alors que les vaisseaux sanguins dans le stroma sous-jacent affiche une coloration plus forte (fig. 1a). Dans OSSC plectine positif tumeurs la coloration était relativement homogène tout au long de la tumeur (Fig. 1b). Les cellules cancéreuses ont été très positifs tandis que la matrice extracellulaire adjacente a montré moins de réactivité. La coloration des cellules cancéreuses se limite principalement à la membrane plasmique (fig. 2), mais une coloration cytoplasmique a également été observée dans une proportion relativement importante des noyaux. Figue. 1 coloration immunohistochimique pour plectine de la langue muqueuse normale (a) et le carcinome épidermoïde oral (b). La muqueuse normale a montré que faible coloration tandis que les vaisseaux sanguins dans le stroma ont été fortement colorées. La coloration des cellules tumorales positives plectine était forte, et le stroma n'a pratiquement aucune coloration
Fig. 2 immunohistochimique motif de coloration dans les noyaux TMA de carcinome épidermoïde oral. Plectine coloration est principalement à la membrane plasmique, mais aussi une certaine coloration cytoplasmique a été vu
Survival
Pour les patients sans métastase ganglionnaire (N0), à tout stade T, le risque de mourir de la maladie dans les 5 ans était diminué de façon significative chez les patients atteints de tumeurs exprimant plectine faibles par rapport à ceux avec l'expression de plectine élevé (p = 0,008
) (tableau 1 et figure 3). En outre, pour les patients atteints de T1-tumeurs, indépendantes de N-état, les analyses statistiques ont révélé un risque significativement réduit pour DSD chez ceux qui avaient des tumeurs avec une faible expression de plectine (p = 0,031
). Comme prévu, compte tenu des résultats précédents, les patients atteints de tumeurs T1N0 avec une faible expression de plectine avaient un excellent résultat que tous ces patients étaient encore en vie après 5 ans (p
& lt; 0,001). Dans une analyse multivariée des N0-cas y compris plectine et la taille de la tumeur (T1 vs T2-4), seule une expression élevée de plectine était un prédicteur indépendant significatif de l'augmentation de DSD (p = 0,014
, HR 3,674, IC à 95% 1.305- 10.344) .Table 1 expression de plectine dans l'ensemble de la cohorte, N0, T1 et patients T1N0 au moment du diagnostic. Le nombre de patients atteints d'une maladie spécifique la mort de 5 ans (DSD) est donnée en nombre et aussi en pourcentage du total dans chaque groupe du total dans chaque groupe
plectine
basse expression
haute expression
dsdp
Toutes patientsa
N (% du total)
55
56
5 ans DSD
19 (35%)
25 (45%)
0,198
N0-casesb
N (% du total)
36
32
5 ans DSD
5 (14%)
13 (41%)
0,008 *
T1 -casesc
N (% du total)
23
16
5 ans DSD
2 (9%)
6 (38%)
0,031 *
T1N0-casesd
N (% du total)
19
9
5 ans DSD
0
4 (44%)
& lt; 0,001 *
numéro Un total de patients inclus dans l'analyse était de 111
nombre btotal des patients inclus dans l'analyse a été 68
nombre Ctotal des patients inclus dans l'analyse a été 39
nombre dtotal des patients inclus dans l'analyse était 28
* p
& lt; 0,05 a été considérée comme statistiquement significative, et mis en évidence dans boldsface lorsqu'il est présent
Fig. 3 Kaplan-Meier. La figure illustre la différence de la survie chez les patients N0-avec une expression élevée et faible de plectine respectivement
Corrélation des plectine et d'expression uPAR
Nous avons récemment montré que les patients atteints de tumeurs T1N0 exprimant de faibles niveaux de uPAR ont un DSD considérablement réduit par rapport à ceux avec une expression plus uPAR. Pour étudier la distribution de l'expression de uPAR et plectine dans les tumeurs que nous avons fait un test de chi-carré, et constaté qu'un nombre important de tumeurs qui étaient exprimeurs élevés de uPAR étaient également exprimeurs élevés de plectine, et ceux avec une faible expression de uPAR étaient généralement faibles exprimeurs de plectine. Cette corrélation est significative avec un coefficient de corrélation de 0,769 (p = 0,01
) comme indiqué dans un nuage de points sur la Fig. 4. Double coloration par immunofluorescence a été réalisée sur certaines tumeurs sélectionnées pour déterminer si plectine et uPAR ont été co-localisés dans les mêmes cellules, co-exprimé par les mêmes cellules, ou situé à mêmes régions tumorales. Immunofluorescence ont montré que la plectine uPAR et la coloration est localisée dans les mêmes zones de la tumeur (Fig. 5). Comme prévu, la coloration par immunofluorescence a confirmé que plectine se trouve principalement dans la membrane plasmique tout en uPAR est principalement localisée dans le cytoplasme. Figue. terrain de 4 Scatter de uPAR et le score plectine pour l'ensemble de la cohorte. Il y avait une corrélation significative (p = 0,01
) entre le plectine et le score uPAR. Les lignes gris clair dans la figure représentent l'intervalle de confiance de 95%
Fig. 5 La coloration par immunofluorescence de tissu de carcinome à cellules squameuses buccal. La majorité des cellules étaient positives pour les deux plectine et uPAR. Plectine (vert) se situe principalement à la membrane plasmique et la périphérie de la cellule, tandis que uPAR (rouge) est plus importante dans la partie cytoplasmique des cellules. Plectine est fortement exprimé dans la paroi des vaisseaux sanguins (asterix de
)
Surgery Discussion de est le principal traitement pour le cancer de la cavité buccale, et est souvent associée à la radiothérapie alors la chimiothérapie est plus souvent appliquée comme traitement palliatif en phase tardive du traitement [35-37]. Les effets secondaires du traitement du cancer par voie orale peuvent être dévastateurs pour la qualité de vie du patient, [38], et il est donc important d'éviter le surtraitement nuisibles à la radiothérapie des patients atteints de tumeurs de petite taille avec un pronostic favorable. Les décisions concernant l'ampleur du traitement des patients atteints de CCCO au stade précoce sont souvent difficiles. Pourtant, le choix du traitement repose principalement sur TNM stade qui ne fait pas de discrimination entre les tumeurs agressives et plus indolents. Plusieurs études sur les biomarqueurs potentiels pour le traitement de stratification ont montré des résultats prometteurs, mais jusqu'à présent, aucun de ces biomarqueurs ont été mis en œuvre dans la pratique clinique. Dans la présente étude, nous avons étudié le rôle potentiel de plectine comme un biomarqueur pronostique. À notre connaissance, la valeur pronostique de plectine en OSCCs a déjà été étudié par Katada et al. qui a enquêté sur une cohorte de 62 CETC, dont 23 de la cavité buccale [22]. Bien que la cohorte était petite et hétérogène, ils ont constaté que la survie était significativement diminuée lorsque les cellules tumorales expriment des niveaux élevés de plectine. Notre cohorte est plus grande et composé seulement de tumeurs de la cavité buccale, et donc plus homogène. Conformément aux résultats de Katada et al., Nous avons constaté que la faible expression de plectine dans les cellules tumorales prédit une issue favorable, mais seulement chez les patients atteints de la maladie à un stade précoce.
Nous avons déjà constaté que la faible expression de uPAR en corrélation avec DSD réduite pour les patients atteints de tumeurs CCCO T1N0, et que uPAR donc peut-être un marqueur pronostique approprié pour ce sous-groupe de patients [23]. Dans la présente étude, nous avons trouvé une corrélation très significative entre l'expression de plectine et uPAR. Cependant, contrairement à uPAR, une expression élevée de corrélation significative avec plectine DSD chez tous les patients atteints d'une maladie non métastatique, et non seulement le sous-groupe T1N0.
La plupart des cellules tumorales qui expriment plectine ont également exprimé uPAR. Il a déjà été suggéré que l'augmentation de l'expression de l'uPAR sur des cellules tumorales est associée à une OGD [27, 29, 39]. On connaît peu plectine et EMT, mais la formation de podosomes contenant plectine-a été proposée comme une première étape vers EMT dans CCCO [40].
Conclusion
La présente étude a montré que la faible expression de plectine prédisent une résultat favorable chez les patients atteints d'une maladie non métastatique. En outre, tous les patients atteints de la maladie T1N0 et une faible expression de plectine, ont survécu pendant plus de 5 ans. Bien que les résultats doivent être validés dans les grandes cohortes, ils suggèrent plectine comme un biomarqueur pronostique prometteur, qui peut être utilisé pour guider la stratification de traitement pour les patients atteints de CCCO non métastatique
abréviations
DSD:.
maladie mort spécifique
EMT:.
transition épithéliale-mésenchymateuse
CETC:
Tête et cou carcinome malpighien
CCCO:
carcinome épidermoïde oral
TMA:
microréseau tissulaire
TNM:
système de classification pour évaluer l'étendue de la tumeur primaire des métastases des ganglions lymphatiques régionaux et métastases à distance
uPAR:
urokinase récepteur de l'activateur du plasminogène
Déclarations
Remerciements
Nous remercions Bente Mortensen, Eli Berg et Magnus Persson pour une excellente assistance technique, et Inger Sperstad pour l'aide à la conception de la base de données. En outre, nous remercions Bodil Fadnes d'assistance avec immunofluorescence et les questions techniques. Ce travail a été soutenu Les autorités sanitaires norvégiennes Nord régionales et UiT L'Artic Université de la Norvège, les deux organisations étant sans but lucratif
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concurrence. intérêts
les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. les contributions de
auteurs
OGR recueillis la matière, réalisée coloration immunohistochimique et immunofluorescence, interprétées les données, effectuer une analyse statistique, et rédigé le manuscrit. SNM effectué une coloration immunohistochimique, interprété les données et rédigé le manuscrit. Gs et EHO ont participé à la conception de l'étude, ont contribué à l'interprétation des données, et révisées critique du manuscrit. LUH conçu la conception de l'étude, a contribué à l'interprétation des données, et révisé critique du manuscrit. SES a participé à la conception de l'étude, a contribué à l'interprétation des données, effectué une analyse statistique, et révisé le manuscrit critique. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
