Matrice des métalloprotéinases de résumé
fond (MMP) dégradent la matrice extracellulaire (ECM) et de réguler le remodelage et la régénération de l'os. Émail dérivé de la matrice (EMD) protéine a été utilisée cliniquement pour la régénération parodontale, bien que ses mécanismes moléculaires ne sont pas claires. Nous avons étudié le rôle des métalloprotéinases de matrice (MMP) dans la régulation de la dégradation de l'EMD-dépendante de la gélatine sur la lignée cellulaire oeoblast ressemblant MG63.
Méthodes
cellules MG-63 (lignée cellulaire ostéoblastique) ont été mises en incubation avec 100 pg /ml EMD des protéines en présence ou en l'absence d'un inhibiteur tissulaire de MMP-2 pendant 20 heures suivi par une incubation sur des plaques de DQ-gélatine enrobée pendant 4 h. Cellules MG-63 (1 x 10
6) ont été préincubées avec le SB203580 pendant 30 min à 37 ° C et ont ensuite été placées dans 100 pg /ml de protéine EMD pendant 24 h. Résultats de milieux conditionnés ont été
protéine EMD dégradation accrue à médiation cellulaire de gélatine, qui a été inhibée par l'inhibiteur de MMP-2 TIMP recueillies et détectées par analyse par transfert de Western.
. En outre, la MMP-2 a été produit par les cellules MG63 en réponse à la protéine MAPK dans un EMD manière dépendante de p38. En outre, le blocage de l'activation de p38 MAPK par SB203580 génération inhibé de manière significative de la forme active de la MMP-2.
Conclusion
voie P38 MAPK favorise l'expression de MMP-2 dans EMD activé ostéoblastes, qui à son tour stimule la régénération parodontale en dégradant . protéines de la matrice dans le tissu conjonctif parodontal
matériel supplémentaire électronique
La version en ligne de cet article (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-85) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés. Deux objectifs majeurs
Contexte de la thérapie parodontale se régénèrent le ligament parodontal (PDL) et la reconstruction de l'os alvéolaire perdu à la suite de la maladie parodontale. des modèles expérimentaux précédents et des études cliniques ont montré que (EMD) une protéine de matrice d'émail dérivé favorise la génération de PDL, cément et l'os alvéolaire [1-3]. EMD protéine active également les cellules ostéoblastes in vitro, ce qui conduit à une réponse de cicatrisation [4] et la production de phosphatase alcaline [5]. En outre, la protéine EMD régule la production de métalloprotéinases matricielles (MMP) et les inhibiteurs tissulaires des MMP (TIMP) dans le fluide gingival [6, 7].
L'os est constamment remodelé, et la quantité de nouvel os dépend de l'équilibre entre la formation osseuse et de résorption, qui sont médiés par les ostéoblastes, les ostéoclastes et les ostéocytes. matrice extracellulaire Disturbed (ECM) le chiffre d'affaires conduit à la perte osseuse et ses maladies associées, telles que la parodontite. Les ostéoblastes sont des cellules de remodelage osseux qui se différencient à partir de cellules souches mésenchymateuses et sécrètent une protéine d'ECM, qui est ensuite minéralisée par les ostéoblastes. Les MMP sont des endopeptidases zinc atome-dépendante qui jouent un rôle essentiel dans la dégradation des protéines ECM [8]. Les ostéoblastes et ostéocytes produisent également MMP telles que la MMP-2 et MMP-13 [7, 9]. La fonction de MMP-2 est de dégrader les protéines de la MEC et de promouvoir la régénération et le remodelage du tissu osseux [10]. Le plus des protéines kinases activées par les mitogènes (MAPK) sont des enzymes de transduction de signal importantes impliquées dans la régulation cellulaire. Des études récentes utilisant une p38 MAP kinases (MAPK p38) inhibiteur ont montré que la stimulation de cytokine de MMP-2 est impliquée dans la synthèse p38 MAPK signalisation [11, 12].
Le but de cette étude était de clarifier les effets de la EMD protéine sur la production et l'activation de la MMP-2, en utilisant une lignée cellulaire d'ostéoblastes, qui est, MG-63. Nous avons trouvé que la protéine EMD a favorisé la dégradation de la gélatine sur les cellules MG-63 et de renforcer l'activation de la MMP-2 dans les cellules MG-63. Les voies de signalisation des protéines EMD dépend de p38 MAPK. Ces résultats suggèrent que la régulation sélective de MMP-2 la production et l'activation subséquente de la MMP-2 par la protéine EMD en cellules MG-63 conduit à un remodelage et la régénération du tissu conjonctif parodontal.
Méthodes
ligne
ostéoblastes Cell ( MG-63 lignée cellulaire; American type Culture Collection, Rockville, MA) ont été maintenues dans un milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) additionné de 10% inactivé par la chaleur FBS (Equitech-Bio Inc., TX, USA), 2 mM de glutamine et 100 unités /ml de pénicilline /streptomycine (Invitrogen, Carlsbad, CA) à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO 2 dans l'air.
DQ gélatine dégradation test
Lamelles ont été revêtues avec 100 pg /ml substrat de fluorescence trempé DQ-gélatine (Molecular Probes, Eugene, OR). Cellules MG-63 ont été mises en incubation avec 100 pg /ml de protéine EMD (Seikagaku Kogyo-Corp., Osaka, Japon), en présence ou en l'absence d'inhibiteur tissulaire de métalloprotéases-2 (TIMP-2; Dainippon Pharm Co., Toyama, Japon) pendant 20 h, suivi par une incubation sur DQ-gélatine plaques revêtues pendant une durée de 4 heures. Les cellules ont été fixées avec 2% de paraformaldehyde dans du PBS. Les lames ont été montées avec des lamelles en utilisant du glycérol /PBS, et examiné avec à 488 nm (excitation) et 533 nm (émission) à l'aide d'un Olympus LSM-GB200 (Olympus, Tokyo, Japon) équipé d'une lentille à immersion d'huile. interférence différentielle de contraste (DIC) a été utilisé pour visualiser les cellules cultivées sur la matrice.
analyse par transfert de Western
MG-63 (1 x 10 6), les cellules ont été pré-incubées avec 100 ng /ml de 5 uM (substances chimiques SB203580 Inc., Darmstadt, Allemagne) pendant 30 min à 37 ° C et de cellules MG-63 ont ensuite été placées dans un milieu DMEM dépourvu de sérum avec 100 pg /ml de protéine EMD pendant 48 h. Les milieux conditionnés ont été recueillis, centrifugés pour éliminer les débris, et concentrées dans les concentrateurs Amicon Centriprep (Invitrogen) jusqu'à 10 fois. Les cellules ont été mises en incubation dans du milieu d'Eagle exempt de sérum avec 100 pg de protéine /ml EMD pendant 48 h. Cellules MG-63 préparées comme décrit ci-dessus ont été lysées avec un tampon d'échantillon SDS (80 mM de Tris-HCl, 3% de SDS, 15% de glycerol et 0,01% de bleu de bromophénol) et soniquée brièvement afin de cisailler l'ADN. Les échantillons ont été séparés sur 10% de gels SDS de polyacrylamide (SDS-PAGE) dans des conditions réductrices. Les protéines ont été transférées électrophorétiquement à difluorure de polyvinylidène (PVDF Immobilon-P) des membranes (Sigma-Aldrich Inc., St. Louis, MO). Membranes ont été incubées pendant 1 h avec l'anti-phospho-p38 anticorps (Cell Signaling Technology, Danvers, MA) ou un anticorps anti-p38 (Cell Signaling Technology) dans du PBS contenant 0,05% de Tween-20 et 10% Blockace (Dainippon Pharm Co., Toyama, Japon). Conjugué à la Peroxydase anticorps secondaire (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) a été utilisé à une dilution de 1: 1000 et bandes immunoréactives ont été visualisées à l'aide de Super Signal ouest pico substrat chimiluminescent (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL). Les signaux sur chaque membrane ont été analysés par VersaDoc 5000.
transcription inverse-réaction de polymérisation en chaîne (RT-PCR)
ARN total a été isolé à partir de cellules MG-63 cellules par kit RNeasy (QIAGEN, Valencia, CA). Cellules MG-63 ont ensuite été placées dans un milieu DMEM dépourvu de sérum avec 100 pg de protéine /ml de DME pendant 12 h. Après dénaturation de l'ARN total à 70 ° C pendant 10 minutes, l'ADNc a été synthétisé avec l'amorce oligo-dT par incubation avec transcriptase inverse (Qiagen) à 50 ° C pendant 30 min. Les amorces pour la MMP-2 étaient 5'-TGGTTTTCCTCCATCCAGTGG-3 '(avant) et 5'-CAGGTTGTCTGAAGTCACTGC-3' (inverse). Les amorces pour GAPDH étaient 5'-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3 '(avant) et 5'-TCC ACC ACC TTG CTG CTG TA-3' (inverse). Les réactions en chaîne par polymerase ont été réalisées avec une Pfu polymerase (Qiagen) initiée par 1 cycle à 95 ° C pendant 15 min suivie de 30 cycles à 94 ° C pendant 45 s, 55 ° C pendant 45 secondes, 72 ° C pendant 1 min et 1 cycle à 72 ° C pendant 10 minutes pour l'extension finale. Les produits de PCR ont été chargées sur un gel d'agarose et colorés au bromure d'éthidium. Les bandes ont été analysées à l'aide Alphalmager ™ logiciel IS-3400. En bref, IDV a été mesurée comme la somme de toutes les valeurs de pixel après correction de fond dans chaque bande. Les valeurs (AVG) de chaque bande ont été calculées comme IND /AREA, où AREA est la taille de la région qui a été mesuré. Les résultats des résultats sont présentés les valeurs de AVG MMP1 /AVG GAPDH à chaque point de temps.
EMD protéines stimulées par MG-63 cellules promues dégradation de la gélatine
Afin de déterminer si protéine EMD est capable de faciliter la dégradation de la gélatine ostéoblastes à médiation par les ostéoblastes humains ont été incubées en présence ou en l'absence de 100 ug /ml de protéine EMD et étalées sur 100 pg /ml de DQ-gélatine plaques revêtues comme décrit dans les méthodes
( Figure 1). La dégradation de la DQ-gélatine a été visualisé dans la section optique comme un signal fluorescent vert. Bien que les cellules non stimulées MG-63 ne produisent pas de signaux visibles (panneaux A et C sur la figure 1), la protéine EMD améliorée de manière significative la dégradation de la gélatine (panels D et F sur la figure 1). Étant donné que la gélatine est un substrat pour MMPs, il est possible que le TIMP-2 peuvent inhiber la dégradation à médiation cellulaire de la gélatine. Pour tester cette hypothèse, recombiné TIMP-2 a été mis en incubation avec EMD et de cellules MG-63 et ensuite cultivées sur DQ-gélatine. TIMP-2 presque complètement la dégradation éliminé par EMD stimulée-MG-63 cellules (panneaux G et I dans la figure 1), ce qui indique que la dégradation de la gélatine est médiée par l'activité catalytique de MMP, qui est une étape clé dans la promotion du parodontale conjonctif le remodelage tissulaire. La figure 1 EMD protéine améliore les cellules MG-63 dégradation de la gélatine. Cellules MG-63 ont été incubées en présence (D, E, F) ou l'absence (A, B, C) de 100 pg /ml EMD pendant 20 heures et ont été ensuite mis en incubation sur le verre revêtu de 100 pg /substrat fluorescent ml refroidi DQ-gélatine pour un montant supplémentaire de 4 h. TIMP-2 (20 uM) a été incubée avec une protéine d'EMD et de cellules MG-63, comme décrit ci-dessus (G, H, I). La dégradation de la gélatine (fluorescence verte) a été détectée par un microscope confocal (Excitation: 488 nm; émission: 530 nm). Les images ont été obtenues à × 40 grossissement (A à I). Différentiel contraste d'interférence (DIC) images sont affichées. Quantification de la GFP dans les panneaux A-I a été réalisée par densitométrie en utilisant l'image NIH logiciel J. La densité est représenté comme moyenne GFP par cellule.
Protéine EMD améliorée MMP-2 activité sur cellules MG-63
Nous avons montré précédemment que cellules MG-63 produits spontanément MMP-2, mais pas de MMP-9 [10]. Comme le montre cette étude, la protéine EMD une dégradation accrue de la gélatine dans des cellules MG-63 (Figure 1). Par conséquent, nous avons également testé si une protéine affectée EMD la production de MMP-2 à 100 pg /ml de plaques de cellules MG-63 revêtues de gélatine. EMD protéine (100 pg /ml) a amélioré la production de 66 kDa, 68 kDa et 46 kDa de la MMP-2, qui correspondent aux formes pro, intermédiaire et actif de cette enzyme, respectivement. Surtout, lorsque les cellules de protéines activées par EMD ont été cultivées sur des plaques revêtues de gélatine, la génération de la forme active de la MMP-2 a également été observée (figure 2A). Ces résultats ont été confirmés par des études par RT-PCR pour démontrer que le niveau de MMP-2 transcription de l'ARNm a été augmentée en présence d'EMD non stimulées par rapport aux cellules MG-63 (figure 2B). Figure 2 Expression de la MMP-2 de EMD cellules de protéines stimulée par MG-63. (A) cellules MG-63 ont été incubées à Eagle sans sérum contenant 100 ug /ml de protéine EMD pendant 24 heures et le milieu conditionné et les lysats cellulaires totaux ont été préparés comme décrit dans les méthodes
. milieux concentrés ont été séparés par 8% de SDS-PAGE, transférés avec un anti-MMP-2 avec l'anticorps et visualisé super Signal West Pico substrat chimioluminescent. Les marqueurs moléculaires (kDa) sont indiqués dans la colonne de gauche. Quantification de MMP-2 dans le panneau supérieur a été réalisée par densitométrie en utilisant l'image NIH logiciel J. Les hauteurs des pics de chaque densité sont représentés comme pour cent de valeurl maximale. (B) L'ARN total a été isolé à partir de cellules MG-63 cultivées en présence d'EMD pendant 24 heures et soumis à des expériences de RT-PCR en utilisant des amorces spécifiques pour la MMP-2 (en haut) ou GAPDH (en bas).
P38 la voie est impliquée dans l'activité des protéines EMD stimulée par la MMP-2 sur les études antérieures de cellules MG-63 ont montré que p38 régulé MMP-2 induite par diverses cytokines [13]. Ainsi, il est possible que la protéine stimule également EMD MAP kinases dans les cellules ostéoblastes pour induire la production de MMP-2. Pour tester cette hypothèse, nous avons d'abord testé si une protéine EMD est capable d'activer p38 en utilisant une analyse par Western Blot. Lorsque les cellules MG63 ont été cultivées en présence de 100 pg /ml de protéine EMD sur des plaques revêtues de gélatine, l'activation de la MAPK p38 a été observée d'une manière dépendante du temps, avec la phosphorylation maximale à 5 min (panneau supérieur sur la figure 3A). quantité totale de protéine p38 MAPK n'a pas été affectée (en bas sur la figure 3A). Un inhibiteur synthétique spécifique pour p38, le SB203580, a éliminé l'activation de cette kinase chez EMD cellules MG-63 de protéines stimulées (figure 3B), ce qui indique en outre l'activation de p38 dans les cellules MG-63 en présence de DME protein.In afin de caractériser davantage le rôle de p38 EMD activation de la voie induite par la protéine, les cellules MG-63 ont été prétraités avec le SB203580, suivie par la stimulation de la protéine EMD. SB203580 a inhibé de manière significative la production et l'activation de la MMP-2 par la protéine sur EMD cellules MG-63 (Figure 4). l'activation de la MAPK p38 Figure 3 EMD-induite dans des cellules MG-63. (A) cellules MG-63 ont été stimulées avec 100 ng /ml de protéine EMD pendant les durées indiquées à 37 ° C. Les cellules ont été récoltées, et les lysats ont été résolus en 10% de SDS-PAGE et ont été transférées sur une membrane de PVDF. Les membranes ont été immunoblottées avec l'anticorps anti-phospho-p38 MAPK (top
), et ont ensuite été dépouillés et immunoblottées avec l'anticorps anti-p38 MAPK (en bas de
). Les marqueurs moléculaires (kDa) sont indiqués dans la colonne de gauche. (B) des cellules MG-63 ont été traitées pendant 30 min avec le SB203580 (5 uM) avant la stimulation avec 100 pg /ml de protéine EMD pendant 5 min. Les cellules ont été récoltées, et les lysats ont été résolus en 10% de SDS-PAGE et transférés sur une membrane de PVDF. La membrane a été immuno- empreinte avec un anticorps anti-phospho-p38 MAPK (top
), et a ensuite été dépouillé et immuno- empreinte avec un anticorps anti-p38 MAPK (en bas
). Les marqueurs moléculaires (kDa) sont indiqués dans la colonne de gauche. Quantification de p38 MAPK phosphorylation a été réalisée par densitométrie et corrigée par rapport au montant total de la protéine p38 MAPK. Les hauteurs des pics de chaque densité sont représentés comme pour cent de la valeur maximale.
Figure 4 Effets de la MEK sur la dégradation de la gélatine en protéines stimulées EMD cellules MG-63. des milieux conditionnés concentrés préparés à partir de cellules MG-63 non stimulées (piste 1)
, EMD cellules stimulées par la protéine MG-63 (5 pm) (piste 2
), EMD protéines stimulées par les cellules MG-63 en présence de DEMSO (piste 3
), EMD protéine stimulée cellules MG-63 cultivées en présence de SB203580 (5 uM) (piste 4
) ont été séparés sur 8% de SDS-PAGE. Les membranes ont été effacés avec anti-MMP-2 anticorps et visualisées avec Super Signal ouest pico substrat chimioluminescent. Les marqueurs de poids moléculaire (kDa) sont indiqués dans la colonne de gauche. Les mêmes milieux conditionnés concentrés ont été séparées et transférées sur des membranes. Les hauteurs des pics pour chaque densité sont représentés comme pour cent de la valeur maximale. voie
P38 MAPK est impliqué dans EMD protéines stimulée par la dégradation de la gélatine par cellules MG-63
Enfin, nous avons confirmé ces résultats dans les études de dégradation de la gélatine à médiation cellulaire. Cellules MG-63 ont été mises en incubation avec de la protéine EMD en présence ou en l'absence de SB203580, et ont ensuite été cultivées sur une matrice DQ-gélatine. En accord avec les résultats de la figure 1, une protéine EMD améliorée à la dégradation de la gélatine (panels D, E, F sur la figure 5), par rapport à des cellules non stimulées MG-63 (panneaux A, B, C de la figure 5). Quand le SB203580 a été co-incubées avec la protéine EMD, la dégradation de la gélatine a été arrêté, comme démontré par une diminution significative des signaux fluorescents spécifiques (panneaux G, H, I sur la figure 5). Ces résultats suggèrent que la MMP-2 est une enzyme majeure de gélatine dégradant produit par EMD ostéoblastes de protéines stimulée. La figure 5 p38 MAPK sont importants pour la protéine EMD stimulée par MG-63 dégradation à médiation cellulaire de la gélatine. Le verre a été revêtu avec 100 pg /ml de substrat fluorescent désactivé DQ-gélatine. Cellules MG-63 ont été traitées pendant 30 min avec U0126 (5 uM). Les cellules ont été incubées en présence ou en l'absence de 100 ug /ml de protéine EMD pendant 20 h. La dégradation de la gélatine (fluorescence verte) a été détectée en utilisant un microscope confocal (Excitation: 488 nm; émission: 530 nm). Les images ont été obtenues à × 40 grossissement (A à I). Différentiel contraste d'interférence (DIC) images sont affichées. La densité moyenne est représentée comme la GFP par cellule.
Ces résultats suggèrent également que la protéine EMD stimule la dégradation de la matrice impliquée dans l'activité catalytique de MMP-2. En outre, notre étude met en évidence le rôle central des voies p38 MAP kinase dans l'induction de MMP-2 production d'EMD ostéoblastes de protéines stimulée.
Discussion
Dans cette étude, nous avons montré que la protéine EMD stimule les ostéoblastes à dégrader la gélatine in vitro et que la production de MMP-2 est régulée à la hausse en réponse à la stimulation de la protéine EMD. Nos résultats suggèrent également que l'adhérence à la gélatine améliore la production et active la pro-MMP-2, qui est spontanément produit par les ostéoblastes. protéines EMD stimule les voies de signalisation p38 MAPK, qui à son tour, induisent la MMP-2 par les ostéoblastes. Bien que des études antérieures ont montré que la protéine EMD appliquée aux défauts parodontaux est absorbée dans la surface de la dentine radiculaire dénudée et induit la régénération du parodonte [14-16], les mécanismes de cette action restent largement inconnus. À cet égard, nos résultats montrent le rôle central de la MMP-2 produite à partir des ostéoblastes en réponse à la protéine EMD pour faciliter la régénération conjonctif parodontale.
MMP-2 joue un rôle crucial dans le remodelage osseux et de la minéralisation [17], et plusieurs études ont évalué les rôles fonctionnels de MMP spécifiques [18-20]. Nos résultats confirment en outre l'importance des MMP produites par EMD ostéoblastes de protéines stimulée dans le remodelage osseux. Les observations de la dégradation de l'ECM résiduelle en présence de TIMP-2 peuvent être expliqués par l'implication d'autres protéases telles que la sérine-protéase. En effet, des études récentes ont montré que les ostéoblastes expriment la sérine protéase de surface [21]. Toutefois, l'inhibition significative de la dégradation de la gélatine par le TIMP-2 suggère que la protéine EMD améliore la production de MMP sur les surfaces cellulaires, ce qui facilite gelatinolysis ostéoblastique médiation. Dans la présente étude, nous avons démontré que la MMP-2 est produite à partir d'ostéoblastes spontanément non stimulées, et que la gélatinase est activée en présence de la protéine EMD. En revanche, des études antérieures ont montré que les gélatinases MMP-9 n'a pas été produit par les ostéoblastes EMD de protéine activée par [10]. Le plus EMD protéine contient à la fois des facteurs de croissance TGF-ß et BMP-like, qui contribuent à l'induction d'une biominéralisation lors de la régénération du parodonte [22]. BMP-2 a été montré pour favoriser la régénération osseuse in vivo [23], d'améliorer l'activité de la phosphatase alcaline [24, 25], et d'augmenter les MMP de production [26, 27], suggérant ainsi que les cytokines présentes dans EMD sont nécessaires pour promouvoir l'os régénération. EMD protéine active également l'activité de la phosphatase alcaline [28]. Il est possible que le TGF-β et BMP en protéines EMD activent ostéoblastes. Nos données montrent que la protéine EMD améliore la production de MMP-2 par les cellules d'ostéoblastes et suggèrent que la régénération osseuse dépend de la MMP-2 activée par EMD. Ces documents appuient nos données [29, 30]. protéines EMD ont diminué les niveaux de MMP-1 et MMP-8 dans le fluide gingival après chirurgie à lambeau in vivo [6].
EMD-induit la production de VEGF est régulée par p38 MAPK dans les fibroblastes gingivaux humains [31].
Nous avons également fourni des preuves identifiant p38 MAPK que la voie prédominante pour induire la production de MMP-2 dans les ostéoblastes EMD stimulées. Des études antérieures ont montré que cette voie est important de favoriser la croissance des cellules stimulées par la protéine PDL EMD [32]. Ainsi, la famille des MAPK, y compris la MAPK p38, ERK et JNK voies activées par la protéine EMD, joue un rôle clé dans la régulation des fonctions cellulaires nécessaires à la régénération du parodonte [33]. la production de VEGF induite par EMD est régulée par p38 dans des fibroblastes gingivaux humains [31]. p38 MAPK pourrait réglementer non seulement la production de MMP, mais cytokine également la production en EMD stimulée ligament parodontal. Notre étude montre également que l'inhibition de EMD la production induite par la protéine de MMP-2 conduit à des réductions importantes dans la production d'activité de MMP-2, supportant en outre l'idée selon laquelle la MMP-2 agit comme une dégradation de la gélatine pour la MMP-2 dans les protéines EMD les ostéoblastes stimulés.
en résumé, les résultats suggèrent un modèle dans lequel la MMP-2 joue un rôle dans le remodelage du parodonte du tissu conjonctif en dégradant les protéines de matrice et /ou par l'activation d'un gélatinase puissant de la MMP-2 dans les ostéoblastes.
Conclusion protéines
EMD induit MMP-2 production via Déclarations
Remerciements de la p-38 MAPK-activation des voies de signalisation dans les ostéoblastes, ainsi stimuler la dégradation du collagène entourant, ce qui entraîne des changements dans la structure ECM et la promotion parodontale régénération.
ce travail a été soutenu par Grant-in-Aid pour la recherche scientifique (C) 24592853, 23592755 et 23592786. les auteurs déclarent aucun conflit d'intérêts potentiels à l'égard de l'auteur et /ou de la publication de cet article.
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Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. Les contributions
auteurs
SG ont participé à la planification et la conception l'étude, dans l'analyse des données et la rédaction du manuscrit. HI effectué la plupart des travaux de laboratoire et a participé à l'analyse des données. OS, YU, ED et TI ont participé à l'analyse des données. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
