Résumé de l'arrière-plan
Actinobacillus actinomycetemcomitans
(A.actinomycetemcomitans
) est un pathogène parodontal important que peut participer dans la parodontite et d'autres infections non par voie orale. Le cytolethal distendre toxine (Cdt) est parmi les facteurs de virulence produites par cette bactérie. Cette étude était d'élucider la répartition des A.actinomycetemcomitans
et la prévalence de son gène cdtB
chez les sujets chinois.
Méthodes
Un total de 255 échantillons ont été obtenus sous-gingivales de 30 sujets. Des échantillons ont été collectés sur des sites sains parodontales, ainsi que des poches peu profondes, moyennes et profondes. La quantité absolue du gène de A.actinomycetemcomitans
et cdtB ont été déterminées par temps réel la réaction en chaîne par polymérase.
Résultats de A.actinomycetemcomitans
a été détecté dans 92 des 105 (87,6%) échantillons de parodontite agressive (AGP) patients, dans 73 des 79 (92,4%) des échantillons de la parodontite chronique (CP) patients et 5 de 71 (7,0%) des échantillons de sujets sains parodontales. Le cdt
gène B a été détecté dans 72 sites (78,3%) avec agp infectés par A.actinomycetemcomitans
, 54 sites (74,0%) avec CP infectés par A.actinomycetemcomitans
et aucun dans les sites sains infectés par A.actinomycetemcomitans
. En outre, la quantité du gène de A.actinomycetemcomitans
et cdt dans les échantillons provenant des poches profondes étaient significatives plus grande que les sites modérés, peu profondes et en bonne santé (P & lt; 0,05). En comparaison avec les CP, les patients agp ont été infectés par un nombre accru de cdt
génotype dans les poches profondes (P & lt; 0,05).
Conclusion
Cette étude suggère que le gène de l'cdtB sont répandues dans A. actinomycetemcomitans
et la distribution de cdt
souche de génotype peut être corrélée avec agp et l'inflammation parodontale grave.
Mots-clés
Actinobacillus actinomycetemcomitans
Cytolethal distendre toxine Subgingival plaque en temps réel Xiaoqian PCR Wang, Lu Li, Yan Xu Ying et Sun a contribué également à ce travail
matériel supplémentaire électronique
La version en ligne de cet article. (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-37) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible aux utilisateurs autorisés.
Contexte
parodontite est une maladie inflammatoire chronique entraînant la perte des tissus parodontaux, qui est très répandu et est la principale cause de perte de dents chez les adultes. A parodontite ggressive (agp) se caractérise par le développement rapide et grave de la résorption osseuse, affecte généralement les patients plus jeunes que ne le fait la forme chronique.
A.actinomycetemcomitans
est, une tige Gram-négatif non motile, anaérobies et commensal bactérie , qui a longtemps été fortement associée à agp et peut également contribuer à la parodontite chronique (CP). En dehors de l'infection par voie orale, cette bactérie a également été responsable de certaines maladies infectieuses systémiques, comme endocarditic, la méningite, l'ostéomyélite, la glomérulonéphrite et de l'arthrite [1].
Ce micro-organisme exprime plusieurs facteurs de virulence potentiels qui sont impliqués dans la colonisation à l'oral cavité, l'inhibition de la régénération des tissus parodontaux et d'interférence avec les mécanismes de défense de l'hôte. En 1998, Ohguchi [1] a révélé que A.actinomycetemcomitans
pourrait produire cytolethal distendre toxine (CDT), qui a été sécrétée dans le surnageant de culture bactérienne. Il est clair que la CDT est codée par trois gènes cdtA de
désigné, cdtB
et CDTC
, qui sont disposés comme un opéron apparente. Ces trois gènes définissent trois polypeptides désignés CDTA, et CdtB CDTC avec des masses moléculaires apparentes de 28, 32 et 20 kDa, respectivement, qui forment une holotoxine hétérotrimériques [2-5]. Et CDTA CDTC sont nécessaires pour la sécrétion de la toxine, alors que CdtB est responsable de l'activité biologique [6]. CdtB présente une homologie de séquence avec la désoxyribonucléase I de mammifère, indiquant un rôle critique pour l'activité de nucléase dans les interactions hôte-parasite [7]. Le plus parmi les bactéries pathogènes parodontaux, A.actinomycetemcomitans
est la bactérie unique qui peut produire de la CDT. évidences démontrent que l'accumulation CDT est associée à la persistance de l'infection dans des modèles animaux [7], l'expression de RANKL (activation du récepteur du facteur nucléaire-kB ligand) ont augmenté et la conséquente ostéoclastogenèse [3]. Il y avait rapport montrant que cdtABC
était absent [8] dans A.actinomycetemcomitans
isolé au Japon [9], mais Kawamoto a confirmé que cdtABC
a souvent été trouvé dans le génome de A.actinomycetemcomitans
[ ,,,0],10]. le plus petit nombre de rapports Jusqu'à présent, il y a eu sur la prévalence de cdt
souche génotype de A.actinomycetemcomitans
chez les patients de parodontite chinois. évidences démontrent que l'accumulation CDT est associée à la persistance de l'infection dans des modèles animaux [7], l'expression de RANKL (activation du récepteur du facteur nucléaire-kB ligand) ont augmenté et la conséquente ostéoclastogenèse [3]. L'association de la CDT diversité génétique au sein A.actinomycetemcomitans
devrait être mieux évalué. Dans cette étude, nous avons détecté la distribution des A.actinomycetemcomitans
et la prévalence de son putative facteur de virulence CDT cdt de gène codant
B dans la plaque sous-gingivale obtenu à partir de patients chinois souffrant de CP et agp par PCR en temps réel, à évaluer l'association de la CDT diversité génétique A.actinomycetemcomitans et les caractéristiques cliniques.
Méthodes
sujets: Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique de l'hôpital stomatologique affilié à l'Université médicale de Nanjing, Nanjing, en Chine. Les objectifs et les procédures de l'étude ont été expliqués et consentements éclairés ont été obtenus à partir de toutes les recrues.
Participants inclus dans la présente étude ont été recrutés à l'hôpital stomatologique affilié à Nanjing Medical University, à partir de Décembre 2008 à Mars 2009. 10 patients CP, 10 patients agp et 10 sujets sains ont été recrutés dans cette étude
Les critères d'inclusion des patients étaient les suivants:. (i) l'ethnie Han et & lt; 40 ans; (Ii) aucun antécédent de traitement parodontal; (Iii) pas d'antibiotiques systémiques ou des médicaments anti-inflammatoires prises dans les 3 mois; (Iv) les conditions systémiques en bonne santé; (V) l'absence de grossesse, et (vi) ne sont pas les utilisateurs actuels des produits du tabac ou de médicaments de remplacement de la nicotine [10]. Les sujets en bonne santé parodontale avaient pas de sites avec la profondeur de sondage (PD) & gt; 3 mm ou de la perte d'attache clinique (CAL) & gt; 1 mm, et pas plus de 10% des sites avec saignement au sondage (BOP) .Les diagnostics de CP et agp ont été faites sur la base de critères définis à l'atelier parrainé par l'American Academy of Periodontology (AAP) en 1999 [11-13].
exemples de sites ont été classés comme faible, modérée ou profonde selon les niveaux de PD et CAL. Le niveau de PD était d'environ 3 mm ou le niveau de CAL était de 1-2 mm dans le groupe peu profonde; et 4-6 mm de PD ou de 3-4 mm de CAL dans le groupe modéré. Dans le groupe profond, le niveau de PD était de plus de 6 mm ou CAL ≥ 5 mm [12].
Mesures cliniques
Avant l'échantillonnage, un examen parodontal complet a été effectué pour enregistrer les paramètres parodontaux cliniques en utilisant la sonde FP32 (sonde Florida , États-Unis), y compris PD, CAL et BOP. Toutes les mesures ont été effectuées par un examinateur calibré. Pour éviter toute contamination qui pourrait résulter de saignement au sondage, le sondage clinique et la mesure ont été effectuées au moins 7 jours à l'avance de bactéries d'échantillonnage [14]
. L'échantillonnage des bactéries subginginval la plaque dentaire
8-10 échantillons ont été prélevés sites peu profonds, modérées et profondes de chacun des patients inscrits souffrant de CP et agp, ainsi que de sulci gingival des contrôles sains. Après l'élimination minutieuse des dépôts de plaque supragingivales, le site d'échantillonnage a été isolé avec des rouleaux de coton et doucement séché à l'air. Ensuite, un point 30 # papier [15, 16] a été inséré dans la poche /sulci gingival et laissé en place pendant 30 secondes. Le point de chaque site d'échantillonnage de papier a été immédiatement placé dans un tube de 1,5 ml microfuge vide. Les échantillons pour analyse par PCR ont été stockés à -80 ° C. Souches bactériennes de contrôle
positives
A.actinomycetemcomitans
ATCC 29522, ATCC 29523, ATCC 24523 ont été cultivés en anaérobiose (75% N
2, 10% CO 2, 15% de H 2) à 37 ° C sur 5% de gélose au sang de mouton plaques (Oxoid, Royaume-Uni) enrichi avec hémine (5 mg /l) et la ménadione (1 mg /l) 3- 5 jours, puis inoculées dans un bouillon d'infusion cerveau-coeur jusqu'à passé à la phase logarithmique tardive de croissance. Les bactéries ont été récoltées par centrifugation, lavées dans du PBS et remises en suspension à une concentration de densité optique à 690 nm de 1, ce qui correspond à environ 1 x 10 8 unités formant des colonies (UFC) /ml [17].
amorces oligonucléotidiques et des sondes TaqMan
l'identification des régions conservées ont été réalisées par alignement de séquences multiples avec le logiciel ClustalW sur la base du 16S ADNr publiée et les séquences de cdtB. Les colorants fluorescents à 5 'et 3' de la sonde étaient FAM (6-carboxyfluorescéine, journaliste) et TAMRA (6-carboxytétraméthylrhodamine; quencher), respectivement. Toutes les amorces et les sondes ont été vérifiées pour une éventuelle hybridation croisée avec des gènes bactériens en utilisant le programme de recherche base de données similitude BLAST. Amorces et sondes utilisées pour la quantification d'un actinomycetemcomitans de l'ADNr 16S et cdt
gène ont été présentés dans le tableau 1.Table 1 Amorces et TaqMan sondes séquences
Primer
Sequence
Produits taille
Aa
-F
GCTGGTCTGAGAGGATGGC
Aa
-R
CGAAAGAACTTTACAACCCGA
153 pb
Aa
-P
CCTACGGGAGGCAGCAGTGG
cdtB
-F
ATTCTTCTGTGCTTCAATCTCG
cdtB
-R
GGTGATGATGGTGATGAGGTAA
151 pb
cdtB
-P
CACAGGTGGTTCTGATGCGGTAA
Aa
-F, Aa la -R et Aa -P représentent amorces et la sonde TaqMan pour A. actinomycetemcomitans
16 s ADNr; cdtB
-F, cdtB
-R et cdtB de -P reposer amorces et sonde TaqMan pour A.actinomycetemcomitans cdtB
.
courbes standard construction
Afin d'établir le quantitative dosage, des plasmides contenant les séquences cibles de l'ADNr 16S de A.actinomycetemcomitans et le gène cdt ont été clonés à l'aide de la PMD 19 vecteur T (Takara, Japon). Les produits de PCR pour l'ADNr 16S de A.actinomycetemcomitans et cdt
gène ont été insérés dans des vecteurs plasmidiques respectivement, et les vecteurs recombinants ont été transformés dans E. coli
. Ensuite, les plasmides ont été purifiés avec le mini kit de purification de plasmide MEILLEUR (Takara, Japon). Les plasmides purifiés ont été quantifiés par spectrophotométrie. Des courbes d'étalonnage ont été construites en utilisant des plasmides purifiés après dilution en série avec des concentrations prédéterminées sur la base de la relation linéaire entre le Ct et le logarithme de la quantité de gène de départ. Sensibilité du temps réel développé test PCR a été évaluée en utilisant 10 7-10 ° plasmidiques copies de A. actinomycetemcomitans
et géniques de CdtB (données non présentées), la limite d'environ 10 cellules a été créé en le mélange de réaction PCR.
extraction d'ADN et PCR en temps réel
Chaque échantillon a été dilué dans 500 pi d'eau distillée, dispersées dans vortex pendant 1 min, a pris les points de papier avant l'extraction de l'ADN. Ensuite, l'ADN a été purifié par le kit de mini MEILLEURE bactéries de purification (Takara, Japon) et on a élue dans 60 ul de tampon d'élution TaqMan Universal PCR Master Mix. (Applied Biosystems, USA) a été utilisé pour l'analyse par PCR. La concentration finale a été utilisée dans un volume total de 10 ul contenaient 5 pi de 2 x Master Mix, 3 pl de matrice d'ADN, 0,9 mM de chaque amorce et 0,25 mM de sonde. PCR en temps réel a été réalisée en double dans l'ABI 7900 Système HT (Applied Biosystems, Etats-Unis) avec la séquence suivante: 2 min à 50 ° C, 10 min à 95 ° C et 40 cycles de 15 s à 95 ° C et 1 min à 60 ° C.
analyse descriptive L'analyse statistique
a été réalisée pour toutes les variables. Les variables quantitatives ont été décrites par les valeurs moyennes, les écarts-types, ainsi que les valeurs minimales et maximales. Les variables qualitatives ont été décrites par des fréquences absolues et relatives. Des comparaisons ont été faites entre les groupes (agp, CP et les sujets sains) pour les variables indépendantes (PD) en appliquant une analyse de variance (ANOVA). Résultats Tous les tests ont été effectués en utilisant SPSS pour Windows version 12.0 (USA) et P des valeurs inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives.
Analyse clinique
Nous avons analysé des échantillons de plaque recueillies à partir de 30 sujets suivants les protocoles décrits ci-dessus. Cette étude se composait de 255 échantillons de plaque sous-gingivale, qui ont été recueillies à partir de 10 patients agp, 10 patients atteints de CP et 10 sujets sains parodontales. La population étudiée avait pas d'antécédents de tabagisme ou le traitement parodontal.
Les valeurs moyennes de PD, CAL et BOP (%) de tous les sites d'échantillonnage ont été présentés dans le tableau 2. Ces résultats ont révélé qu'il n'y avait pas de différences statistiques de ces paramètres entre CP et agp groupes, alors qu'il y avait des différences significatives entre les deux groupes de CP ou d'un groupe agp et subjects.Table santé parodontale 2 caractéristiques cliniques des patients atteints de parodontite et des contrôles sains
H
CP
agp
sujets
10
10
10
des sites d'échantillonnage
71
79
105
Age (ans, moyenne ± SD)
27,5 ± 2,1
32,5 ± 1,8
29,7 ± 2,1
Sexe (homme /femme)
5/5
5/5
5/5
PD (mm, moyenne ± SD)
2,4 ± 0,8
4,1 ± 2,0 *
4,9 ± 1,9 *
CAL (mm, moyenne ± SD)
0
4,8 ± 2,0 *
4,5 ± 1,9 *
BOP (%, moyenne ± SD)
15,8 ± 0,9
30,8 ± 5,5 *
30,6 ± 7,2 *
agp, CP et H représentent parodontite agressive, la parodontite chronique et parodontale saine, respectivement.
La moyenne profondeur de sondage, la perte d'attache clinique et le saignement au sondage (%) ont été enregistrés dans 255 sites d'échantillonnage de 30 patients. * Il y avait des différences significatives pour moyenne profondeur de sondage, la perte d'attache clinique et le saignement au sondage (%) entre agp ou CP et H (P & lt; 0,05), mais il n'y avait pas de différence significative entre agp et CP
Présence et distribution. de A.actinomycetemcomitans de la
en utilisant la PCR en temps réel, nous avons examiné 255 échantillons de plaque sous-gingivale pour évaluer les niveaux de A.actinomycetemcomitans
statut différent des sites parodontaux. Parmi tous les 255 échantillons sous-gingivales, A.actinomycetemcomitans
a été détectée à partir de 170 (66,7%) échantillons. Seuls 5 échantillons (7,0%) sur les 71 échantillons subgingivaux des individus en bonne santé parodontale étaient 16 s ADNr positive (Table 3) de A.actinomycetemcomitans. 73 des 79 échantillons de plaque sous-gingivale (92,4%) de patients de CP étaient 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans positive. Et parmi les 105 échantillons de plaque sous-gingivale de patients agp, 92 (87,6%) étaient 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans positive. Il n'y avait pas de différence statistique des taux positifs de A.actinomycetemcomitans entre CP (92,4%) et agp (87,6%) (P & gt; 0,05) (tableau 3) .Table 3 Prévalence de A.actinomycetemcomitans et cdt dans tous les sites d'échantillonnage
AgP
CP
H
Total
105
79
71
Aa
(+)
92
73
5
Aa
(+)/Total(%)
87.6
92.4
7.0
cdt
(+)
72
54
0
cdt
(+)/Aa
(+)(%)
78.3
74.0
0
Quantity-Aa
2.3 ± 1,1 *
2,1 ± 0,9 *
0,8 ± 0,5
Quantité-cdt
1,6 ± 0,8 **
1,3 ± 0,8 ***
0,4 ± 0,3
Le Aa
, agp, CP et H abréviation du A.actinomycetemcomitans
, des échantillons de parodontite agressive , des échantillons de parodontite chronique et des échantillons sains parodontales, respectivement
* Il y avait des différences significatives pour la quantité de A.actinomycetemcomitans
entre agp ou CP et H (P & lt; 0,05). et aucune différence significative entre agp et CP (P & gt; 0,05). ** Quantité de cdt
génotype A.actinomycetemcomitans
à partir d'échantillons agp étaient significativement plus élevé que celui du CP et H (P & lt; 0,05). *** Quantité de cdt
génotype A.actinomycetemcomitans
à partir d'échantillons de CP étaient significativement plus élevés que H (P & lt; 0,05).
Moyenne log-nombres transformés de 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans chez des sujets sains, les patients atteints de CP et les patients agp étaient de 0,8 ± 0,5, 2,1 ± 0,9 et 2,3 ± 1,1 (tableau 3), respectivement. Un plus grand nombre de A.actinomycetemcomitans
ont été détectés dans des échantillons provenant de sites de parodontite contrairement à ceux de sujets sains (P & lt; 0,05). Cependant, il n'y avait pas de différences significatives entre ces deux groupes de parodontite (P & gt; 0,05) Prévalence de la distribution et du gène de A.actinomycetemcomitans cdtB
Sur 255 échantillons subgingivaux, A.actinomycetemcomitans cdtB
. a été détecté dans 126 (49,4%) échantillons. Dans les 71 échantillons subgingivaux d'individus sains parodontales, aucun des échantillons ont été cdtB
positif (tableau 3). Bien que 54 des 73 (74,0%) A.actinomycetemcomitans de positifs les échantillons de plaque sous-gingivale de patients atteints de CP étaient cdtB
positive. Parmi positifs des échantillons de plaque sous-gingivale des 92 A.actinomycetemcomitans de patients agp, 72 (78,3%) échantillons ont été A.actinomycetemcomitans cdtB
positif. Il n'y avait pas de différence statistique pour les taux positifs de la A.actinomycetemcomitans CdtB entre CP (74,0%) et agp (78,4%) (P & gt; 0,05). Aucun des 16 s ADNr échantillons négatifs des A.actinomycetemcomitans étaient positifs pour cdtB.
Niveaux de gène cdtB de ont également été détectés dans 255 échantillons. nombre de cdtB
logarithmique moyen transformé en CP et agp était de 1,3 ± 0,8 et 1,6 ± 0,8 (tableau 3). Les échantillons du groupe agp ont montré les chiffres plus élevés de contraste de génotype A.actinomycetemcomitans de CdtB au groupe CP et des sujets sains parodontales (P & lt; 0,05). Association des A.actinomycetemcomitans
et cdt de
distribution avec l'état parodontal différente
moyenne des nombres log-transformée de A.actinomycetemcomitans
et cdtB de gène dans des poches peu profondes, modérées et profondes ont été de 1,8 ± 0,9, 2,2 ± 0,8, 3,1 ± 1,2 et 1,3 ± 0,8 , 1,5 ± 0,8, 2,1 ± 1,1 (tableau 4), respectivement. quantité supérieure du gène de A.actinomycetemcomitans
et cdtB dans les poches parodontales profondes ont été détectées que des poches modérées et peu profondes (P & lt; 0,05) .Table 4 Prévalence et distribution de A. actinomycetemcomitans et cdt dans les sites parodontite d'échantillonnage par sondage profondeur
Shallow
Moderate
Deep
Total
100
49
35
Quantity-Aa
1.8 ± 0,9
2,2 ± 0,8 *
3.1 ± 1.2 **
Quantité-cdt
1,3 ± 0,8
1,5 ± 0,8
2,1 ± 1.1 **
* moyenne log-nombres transformés de 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans des poches modérées échantillons étaient significativement plus élevés que que des poches peu profondes (P & lt; 0,05).
** moyenne des nombres log-transformée de 16 s de ADNr et cdt de A.actinomycetemcomitans
génotype A.actinomycetemcomitans
des poches profondes échantillons étaient significativement plus élevé que celui des poches modérées et peu profondes (P & lt; 0,05).
en ce qui concerne les différents statuts parodontales, signifie nombres log-transformée de gène de A.actinomycetemcomitans
et cdtB de CP et agp en eaux peu profondes , des poches modérées et profondes ont été représentés sur la figure 1, respectivement. La quantité de A.actinomycetemcomitans
et cdtB de gène dans les poches parodontales profondes de agp était plus élevé que CP (P & lt; 0,05). Figure 1 Mean nombre de A.actinomycetemcomitans ADNr 16S et cdtB log-transformée dans les poches parodontales peu profondes, modérées et profondes. une. Moyenne des nombres log-transformée de 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans en eaux peu profondes (n = 48), modérée (n = 20), profonde (n = 11) des poches parodontales de sujets de CP étaient de 1,9 ± 0,8, 2,1 ± 0,8 et 2,5 ± 1,0, respectivement. Moyenne des nombres log-transformée de 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans en eaux peu profondes (n = 52), modérée (n = 29), profonde (n = 24) des poches parodontales de sujets agp ont été de 1,7 ± 0,8, 2,3 ± 0,8 et 3,4 ± 1,1, respectivement. * La quantité de A.actinomycetemcomitans
dans les poches parodontales profondes de agp était plus élevé que CP (P & lt; 0,05). b. Moyenne des nombres log-transformée de A.actinomycetemcomitans cdtB
en eau peu profonde (n = 48), modérée (n = 20), profonde (n = 11) des poches parodontales de sujets de CP étaient de 0,8 ± 0,1, 1,5 ± 0,8 et 1,3 ± 0,7, respectivement. Moyenne des nombres log-transformée de 16 s ADNr de A.actinomycetemcomitans en eaux peu profondes (n = 52), modérée (n = 29), profonde (n = 24) des poches parodontales de sujets agp étaient de 0,8 ± 0,1, 1,6 ± 0,8 et 2,6 ± 1,0, respectivement. * La quantité de A.actinomycetemcomitans cdtB
dans les poches parodontales profondes de agp était plus élevé que CP (P & lt; 0,05) Rapport de
Cette recherche nous avons employé TaqMan PCR en temps réel pour cible quantification directe A.. actinomycetemcomitans
et B du gène de cdt en gravité différente des sites de parodontite de agp ou CP patients.and il est efficace pour détecter les espèces d'agents pathogènes qui sont extrêmement difficiles à cultiver. Par conséquent, nous avons choisi différents sites parodontaux comme cibles à explorer la présence et la quantité de A.actinomycetemcomitans et son gène codant CDT chez les sujets chinois et l'état parodontal différent. A.actinomycetemcomitans
pourrait ne pas être présent dans tous les sites oraux dans une parodontite patient non traité [18]. Prélèvement d'échantillons subgingivaux de toutes les dents serait le moyen le plus fiable pour détecter A.actinomycetemcomitans
. Cependant, cette méthode est consommatrice d'argent et de temps qui ne convient pas pour être utilisé dans la pratique quotidienne. L'échantillonnage de la poche la plus profonde de chaque quadrant a été démontré pour être assez fiable pour détecter la présence d'agents pathogènes parodontaux sous-gingivale chez les patients non traités [18]. Cette technique est basée sur le niveau individuel. Alors que l'on a souffert de la parodontite, le mode agressif ou chronique, la sévérité de la maladie parodontale peut varier d'un site à. Donc, nous avons évalué la pertinence de A.actinomycetemcomitans
et son gène codant CDT avec de parodontite de base sur "site".
Les amorces choisies pour la détection de A.actinomycetemcomitans
et cdt
gène étaient basées sur un 16 s le gène ADNr de .actinomycetemcomitans et le gène cdtB de respectivement. Le gène de l'ADNr 16 de a été rapportée comme étant hautement conservé et ce motif pour la détection d'A.actinomycetemcomitans
a été bien conservée [19, 20]. Par ailleurs, des données récentes ont montré que CdtB est le composant principal et indispensable à l'expression de l'activité de l'holotoxine HAC [6, 8] et la séquence de cdtB
est également hautement conservée parmi les espèces de A.actinomycetemcomitans [21] . Ainsi, la prévalence des gènes codant la CDT a été évaluée en utilisant des amorces et des sondes spécifiques de CdtB.
Des courbes standards ont été utilisés dans cette étude pour évaluer la quantification absolue des hôtels et A.actinomycetemcomitans gène cdt
dans des échantillons . Les plasmides contenant des séquences cibles clonées ont été utilisés en tant que substances standard dans la PCR quantitative, ce qui a permis des mesures plus précises et stables par rapport à l'aide d'amplicon PCR comme substances standards directement [22].
Certaines études ont examiné la prévalence de A.actinomycetemcomitan
dans certaines populations différentes [4, 13, 18]. Notre travail est le premier rapport sur l'analyse des deux taux positif et la quantité absolue de A.actinomycetemcomitans
et son cdt gène
B chez les patients de parodontite chinois, et l'association de la distribution des A.actinomycetemcomitans
et cdtB
avec divers état parodontal.
Nous avons constaté que A.actinomycetemcomitans
et son gène cdtB
étaient significativement plus fréquentes et plus grande quantité dans les échantillons de patients atteints de agp ou CP que les sujets en bonne santé parodontale, et A.actinomycetemcomitans
et son cdt
gène étaient également plus répandue et plus grande quantité dans les poches parodontales profondes que dans les poches parodontales modérées et peu profondes.
Bien A.actinomycetemcomitans
est liée à l'étiologie de la agp, cette bactérie se retrouve également chez les sujets qui sont en bonne santé ou avoir d'autres formes de la maladie parodontale [8]. Nos résultats ont montré que seulement 7,0% des sites sains parodontales étaient A.actinomycetemcomitans
positif; 92,4% des échantillons de CP et 87,6% des échantillons présentaient agp A.actinomycetemcomitans
positif, ce qui démontre que la présence de A.actinomycetemcomitans
a été corrélée avec la parodontite.
Données quantitatives ont montré que la quantité de A.actinomycetemcomitans
en CP et des échantillons agp étaient visiblement plus élevé que dans les échantillons sains, alors aucune différence entre le CP et agp. Mais le montant de la souche de génotype cdtB de A.actinomycetemcomitans
dans les échantillons agp étaient remarkablly plus élevé que dans CP et des échantillons sains (tableau 3). Ces données peuvent indiquer des résultats quantitatifs ont été plus approprié pour analyser la distribution des A.actinomycetemcomitans
et ses souches de génotype
CdtB
. La cdtB la souche de génotype de A. actinomycetemcomitans
peut être plus pertinente avec parodontite agressive.
Tan et ses collègues ont trouvé A.actinomycetemcomitans
avec le cdt
génotype étaient à une fréquence plus élevée des sites obtenu à partir de patients diagnostiqués avec la parodontite agressive [23]. Notre étude a montré l'cdtB
génotype A.actinomycetemcomitans
étaient à une plus grande quantité à partir de sites obtenus à partir des poches profondes. La plus grande fréquence et la quantité de cette bactérie dans des échantillons ayant le statut de parodontite sévère n'a pas été une observation surprenante. La toxine de la CDT A.actinomycetemcomitans peut être similaire à la toxine de la CDT H.ducreyi, ce qui peut contribuer à la pathogénie des bactéries à une concentration supérieure [7]. Les études in vivo sont encore nécessaires pour explorer le rôle pathogène exact de A.actinomycetemcomitans de CDT à l'avenir. Nos données ont montré A.actinomycetemcomitans
et son cdt
souche de génotype étaient répandues dans les poches parodontales profondes et modérées. Pour avancer une seule étape, l'analyse quantitative a montré la souche de génotype cdtB de A.actinomycetemcomitans
étaient plus fréquentes dans les poches parodontales profondes. Les quantités de cdt
souche génotype de A.actinomycetemcomitans
étaient en corrélation avec les formes sévères de la parodontite (CP ou AGP). De nombreuses études ont examiné A.actinomycetemcomitans
comme un micro-organisme étiologique important impliqué dans agp [24-26], cependant, à partir d'une nouvelle perspective, nos données ont montré que la souche de génotype cdtB de A.actinomycetemcomitans
était principalement trouvé parmi les sites avec des formes sévères de la parodontite. A.actinomycetemcomitans
avec cdtB de génotype peut être plus virulente à parodonte humaine.
Comme prévu, aucun des 16 s ADNr échantillons négatifs des A.actinomycetemcomitans étaient positifs pour cdtB
. Ce résultat a confirmé que A.actinomycetemcomitans
était le membre exclusif de la flore microbienne orale identifiés à transporter et exprimer le cytolethal distendre locus toxine. D'ailleurs, il y avait 5 d'échantillons sains dans notre étude qui étaient positifs pour A.actinomycetemcomitans
tout en négatif pour cdt
. Cela peut être des résultats de la quantité minute de cdt
souche génotype de A. actinomycetemcomitans
dans ces 5 échantillons de plaque de sous-gingivale, alors que peut-être une nouvelle preuve de soutien pour l'exister de cdt
souche de génotype -négatif de A. actinomycetemcomitans
dans la cavité buccale.
Le cdt
gène ainsi que lktA
(leucotoxine a) de A.actinomycetemcomitans
est un gène à copie unique [21]. Cependant, le gène de l'ADNr 16 peut généralement 4 à 6 copies par cellule (par exemple, 6 exemplaires pour E. coli
) [22]. Nos résultats ont montré que, dans le même échantillon, la quantité absolue de 16 s ont été A.actinomycetemcomitans ADNr de 1-10 fois par rapport à celle de cdtB du gène, ce qui indique que seul site parodontal peut être infecté par deux ou même plus génotypes de A.actinomycetemcomitans
simultanément. Certains génotypes de A.actinomycetemcomitans
possèdent cdt
gène, qui pourrait exprimer l'activité CDT; tandis que d'autres génotypes de A.actinomycetemcomitans
sont cdt
séronégatifs, ce qui serait moins virulent que cdt
souches -positif. Yamano [9] ont rapporté que 89% des souches de A.actinomycetemcomitans possédait le cdt
gène. Une autre étude [4] a découvert que 86% des A.actinomycetemcomitans
isolats présenté opéron complet de cdt
gène et son activité cytotoxique caractéristique. Tan et ses collègues ont montré une association étroite entre agp et cdt
génotype A.actinomycetemcomitans
souches -positifs [23]. Ces résultats suggèrent que toutes les souches des cdt possédées de A.actinomycetemcomitans
gène, en d'autres termes, les souches de tous les A.actinomycetemcomitans non présentées cytotoxique activité CDT. Semblable à A.actinomycetemcomitans de souches, Campylobacter spp
., C. jejuni
, H.ducreyi
et d'autres bactéries CDT-producteurs n'expriment pas une activité CDT ou contiennent toutes les cdtABC
gènes dans toutes les souches [4].
Conclusion
Notre étude a examiné la prévalence et la distribution de A.actinomycetemcomitans
et son cdt
gène dans la plaque sous-gingivale de patients atteints de parodontite chinois. L'augmentation significative des quantités de cdt
-positifs génotype A.actinomycetemcomitans
ont été trouvés dans les sites parodontaux agp et dans les poches profondes de CP et patients agp, qui indiquaient que cdt
gène pourrait être un potentiel de virulence associée gène impliqué dans la pathogenèse de agp et la destruction parodontale sévère. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
