Résumé de l'arrière-plan
La fréquence d'isolement et de la sensibilité aux agents antifongiques de Candida orale
isolats de patients atteints de candidose orale (OC) ont été comparés entre les études menées en 2006-2007 et 2012-2013.
Méthodes
A souches total158 a été isolé à partir de 112 patients qui ont visité l'hôpital universitaire de Kagoshima pour Résultats du traitement de l'OC au cours de la période de 14 mois à partir de Février 2012 et Mars 2013, et évalué sur la fréquence d'isolement de la souche de chaque Candida et la sensibilité contre les drogues antifongiques par rapport à ceux évalués en 2006-2007.
Il y avait une fréquence plus élevée de la xérostomie comme une plainte en chef et de la maladie auto-immune dans l'étude 2012-2013 que dans l'étude 2006-2007. Plus de 95% de Candida de les isolats de C. albicans et C. glabrata
. En outre, la proportion de celui-ci a augmenté de 12,3% dans l'étude 2006-2007 à 23,4% dans l'étude 2012-2013, tandis que la proportion de la première est passée de 86,2% à 72,8%, respectivement. C. albicans
a été isolée dans presque tous les patients, alors que C. glabrata
a été seulement isolés en association avec C. albicans
. Les concentrations minimales inhibitrices (CMI) ne sont pas significativement différents entre les groupes à quelques exceptions près. Candida de les isolats, dont les PRI ont dépassé les points de rupture, apparemment augmenté pour miconazole et itraconazole contre C. glabrata
dans l'étude 2012-2013, mais cela n'a pas été statistiquement significative. En conséquence, plus de cas de maladie auto-immune, un plus grand nombre de C. glabrata
isolats, et une plus grande résistance aux azoles ont été observés dans l'étude de 2012 à 2013 que dans l'étude 2006-2007.
Conclusion
Ces données indiquent que les augmentations récentes des infection de C. glabrata, un champignon responsable de la OC, et dans la résistance de C. glabrata à azoles, la prudence est nécessaire dans le choix des médicaments antifongiques pour le traitement de l'OC.
Mots-clés
Candida glabrata
Candida albicans
souches isolées cliniquement Minimal concentration inhibitrice souches résistantes Yoshiaki Kamikawa, Youichirou Mori ont contribué également à ce travail.
matériel supplémentaire électronique
La version en ligne de cet article (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-14). contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés
Contexte
au début des années 1990, Candida albicans
résistant au fluconazole a été signalé être fréquemment isolé à partir de la cavité buccale des patients atteints du syndrome d'immunodéficience acquise. Une étude épidémiologique a été menée sur la sensibilité aux antifongiques médicaments des souches de Candida de isolées chez des patients atteints de candidose invasive [1]. Les programmes de surveillance mondiaux ont été mis en œuvre pour faire face à la résistance aux médicaments antifongiques candidose, tels que le programme de SENTRY sur les champignons résistants à l'amphotéricine B en 2006-2007 antifongiques [2] et des rapports sur la sensibilité à la candidose candin type [3-6]. Il y a 2 rapports sur la surveillance nationale au Japon: surveillance 99 par Invasive Mycose Group Japan Surveillance Study (JMS) [7] et Rapport Programme Japon antifongique Surveillance (JASP) [8-10]. Cependant, ces programmes de surveillance ont porté sur des souches isolées à partir de cas cliniques de mycose profonde, et seulement 1 rapport, notre étude précédente réalisée en 2006-2007, a été menée sur la candidose orale [11].
La fréquence d'isolement de Candida
souches est susceptible de changer au fil du temps, comme le montre la comparaison des études antérieures menées dans différentes périodes de temps. Par exemple, C. glabrata
est rarement isolé de patients atteints du SIDA avec une candidose buccale (OC) ou candidose oesophagienne dans l'étude de Sudo publiée en 1997 [12]; en revanche, C. glabrata
a été détecté dans 12,3% des patients atteints d'OC dans notre étude, dans laquelle l'itraconazole (ZCIT) a été efficace malgré l'existence de C. glabrata résistant
contre ZCIT [11]. En outre, alors que C. glabrata résistant
contre ZCIT se sont produits avec des fréquences élevées de 50% et 72,7% en OC et non-OC patients de cette étude, respectivement, [11], une étude japonaise précédente de surveillance a démontré résistant à C. glabrata
à seulement 1,0 à 9,3% des patients atteints de mycoses, mycoses principalement profonde [7-10]. Ainsi, la fréquence d'isolement des espèces de Candida et de leurs souches résistantes varie au fil du temps, mais aucune étude n'a rapporté des variations dans la fréquence des OC au fil du temps dans le même établissement de santé.
La présente étude a été entreprise pour évaluer les médicaments antifongiques contre Candida de souches de forme isolée de la cavité buccale des patients OC qui a visité l'hôpital universitaire de Kagoshima en 2012-2013 (14 mois) et d'évaluer la fréquence d'isolement des espèces de Candida de et leurs souches résistantes par rapport à notre précédente étude menée en 2006-2007 (24 mois) afin d'enquêter sur les médicaments antifongiques utilisation dans le traitement des OC.
Méthodes
sujets: Cette étude a analysé 158 souches isolées à partir de 112 patients qui ont visité le département de chirurgie orale, Université Kagoshima Hôpital, pour le traitement des OC au cours de la période de 14 mois à partir de Février 2012 et Mars 2013. les souches recueillies auprès de patients ayant reçu un traitement médicamenteux antifongique dans les 3 mois de la collection ont été exclus de cette étude
. Analyse des variables de Candida de fond
patients -isolated
Une analyse a été menée pour l'âge, le sexe, la maladie systémique sous-jacente, l'utilisation des hormones stéroïdes, des prothèses dentaires, les plaintes principales et maladies bucco-dentaires dans les 112 patients dont Candida
a été isolé.
la collecte de Candida
de la cavité buccale et de la culture bactérienne
Avant le diagnostic de CO, la zone affectée de la cavité buccale a été frottée avec un tampon d'ouate stérile préalablement immergé dans du sérum physiologique stérile. Identification de l'échantillon liquide recueilli sur le tampon a été enduit sur milieu de culture d'un CHROMagar Candida (Nippon Becton Dickinson et Company, Ltd.) et incubé pendant 48 heures à 36 ° C. Des espèces de Candida
culture positive de Candida l'espèce a été déterminée par l'observation colorimétrique des colonies dans le milieu de culture du CHROMagar Candida contenant des substrats colorimétriques synthétiques qui sont modifiés pour être chromogénique par les enzymes contenues dans les espèces Candida. La confirmation de la détermination de l'espèce Candida a ensuite été effectuée par PCR sur la base du procédé décrit à partir Kanbe et al., Les cellules brièvement fongiques cultivées dans le milieu de culture CHROMagar Candida ont été récoltées par centrifugation, lavées trois fois avec de l'eau distillée, et les ADN ont été extraits et purifié selon le protocole d'un kit de purification d'ADN, kit d'ADN rapide (BP Biomedical, États-Unis). Ensuite, les échantillons d'ADN ont été amplifiés par PCR et les produits de PCR ont été analysés par électrophorèse sur gel d'agarose pour déterminer le type d'espèces de Candida [13] de. Diagnostic du CO s fluide prélevé sur le tampon de la zone affectée a été transféré sur une lame de verre pour la coloration de Gram par une méthode de routine. Un diagnostic de CO a été faite lors de la formation de colonies a été notée au cours de l'incubation et la présence de pseudo-mycélium a été démontrée par la coloration de Gram [14] de. L'évaluation de la sensibilité aux médicaments anti-fongiques des souches de Candida
de les détectées par le ci-dessus méthodes mentionnées ont été re-ensemencées sur un milieu de gélose Sabouraud (Nippon Becton Dickinson et Company, Ltd.), suivie d'une incubation de 48 heures à 36 ° C. Ensuite, on dilue la culture et on l'ajuste à un facteur de 0,5 McFarland en mesurant la densité optique à 530 nm en utilisant un spectrophotomètre ViSpec II (Kyokuto, Japon), et appliquée pour le test pour déterminer la sensibilité. Une concentration minimale inhibitrice (CMI) de chacun des AMPH-B, 5-FC, FLCZ, MCZ, ZCIT et MCFG contre les souches de ces Candida ont été déterminées avec un kit Fungal Sensibilité ASTY Yeast-like (Kyokuto Pharmaceutical) compatible avec le Comité national pour Clinical Laboratory Standards (NCCLS) méthode M-27A [15]. Le kit comprend 11 concentrations de chaque médicament antifongique dans une microplaque 96 puits, soit des concentrations finales de 0, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 et 16 pg /ml pour l'amphotéricine B, le miconazole, et la micafungine, 0, 0,125, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64 pg /ml pour le fluconazole et le 5-FC et de 0, 0,015, 0,03, 0,06, 0,125, 0,25, 0,5, 1 , 2, 4 et 8 pg /ml pour l'itraconazole et de la micafungine. La concentration "0 pg /ml» est considérée comme un contrôle. Souches à haute MIC ont été soumis à nouveau la mesure de MIC avec un Fungal DP Eiken Levure-like (Eiken Chemical) compatible avec la méthode clinique and Laboratory Standards Institute (CLSI) M27-A3 [10, 16]. CMI50 et CMI90, MICS nécessaires pour inhiber la croissance de respectivement 50% et 90% des espèces Candida, ont été calculées. Des souches résistantes ont été déterminées par les critères suivants: MIC AMPH-B, FLCZ, ≥64 ng /mL; 5-FC, ≥32 pg /ml; MCZ, ≥4 pg /ml; MCFG, & gt; 2 pg /ml; et ZCIT, ≥1 pg /ml.
consentement éclairé et les lignes directrices éthiques
Tous les patients inscrits à condition de consentement éclairé par écrit à fournir directement des explications verbales et écrites détaillées de cette enquête. Cette étude a été approuvée par le Comité des droits de l'éthique de l'hôpital médical et dentaire de l'Université de Kagoshima (No.23-18 et 23-27).
Analyse statistique
test de probabilité exacte de Fisher a été utilisé pour déterminer des différences de sexe (2 × 2), les plaintes principales (2 × 8), une maladie systémique (oui ou non; 2 × 2), l'utilisation de stéroïdes (2 × 2), la présence de prothèses dentaires (2 × 2), la candidose orale (2 x 4), la composition les espèces de Candida d'isolement (2 × 7), et l'incidence des souches résistantes entre l'étude 2006-2007 et l'étude 2012-2013. La différence d'âge entre les 2 études a été examiné par t
-test de l'étudiant. P valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
Les variables de base de résultats
Comme le montre le tableau 1, il n'y avait pas de différences statistiques dans les variables de base en termes de sexe, d'âge, l'utilisation du traitement de l'hormone stéroïde, présence et le type de maladies systémiques et la présence de prothèses entre les patients dans l'étude 2006-2007 et ceux de l'étude 2012-2013. Parmi les patients ayant 1 chef plainte, xérostomie était plus élevé dans l'étude 2012-2013 (23,2%) que dans l'étude 2006-2007 (8,8%), tandis que tylosis linguae était inférieure à 7,0% et 0%, respectivement. Collectivement, la composition des principales plaintes était significativement différente entre les patients 2006-2007 et 2012-2013, les patients comme analysé par un test de probabilité exacte de Fisher (p & lt; 0,05). Malgré l'absence de différence significative dans la survenue d'une maladie systémique entre les 2 études (77,2% contre 86,6%), la présence de maladies auto-immunes a été plus élevée dans l'étude 2012-2013 que dans l'étude 2006-2007 (27,6% contre 6,7% , respectivement) .Table 1 Contexte variables des patients atteints de candidose orale inscrits dans les études 2006-2007 et 2012-2013
2006-2007
2012-2013
test
Sujets number
Total
57
112
Gender
Male
19
(33.3)
30
(26.8)
Fisher’s test de probabilité exacte
Femme
38
(66,7)
82
(73,2)
[2 × 2]
NS
âge
moyenne [max-min]
67,9
[26 -90]
69,6
[21-97] test t de Student
NS
plaintes chef
Heat sensation (HS)
23
(40,4)
46
(41,1)
Goût anomalie (TA)
2
(3.5)
0
(0)
xérostomie (X)
5
(8.8)
26
(23,2)
tylosis linguae (TL)
4
(7.0)
0
(0)
test de probabilité exacte de Fisher
Rubor /Erosion (R /E)
4
(7.0)
8
(7.1)
[2 × 8]
HS + TA + X
9
(15,8)
16
(14.3)
p & lt; 0,05
HS + TA + R /E
5
(8.8)
8
(7.1)
HS + TL
5
(8.8)
8
(7.1)
Total
57
(100)
112
(100)
Systemic maladie
Oui
44
(77,2)
97
(86,6)
test de probabilité exacte de Fisher
Aucun
13
(28,8)
15
(13,4)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Endocrine
22
(29.3)
22
(17.3)
Cardiovascular
18
(24.0)
28
(22.0)
Gastrointestinal
123
(16.0)
12
(9.4)
Fisher’s test de probabilité exacte
Tumeur maligne
8
(10.7)
12
(9.4)
[2 × 7]
CNS
4
(5.3)
10
(7.9)
N.S.
Viral
6
(8.0)
8
(6.3)
Autoimmune
5
(6.7)
35
(27.6)
Total
75
(100)
127
(100)
Steroid
Dose
12
(21.1)
28
(25.0)
Fisher’s test de probabilité exacte
non-dosées
45
(78,9)
84
(75,0)
[2 × 2]
Total
57
(100)
112
(100)
N.S.
Denture
Wearer
37
(64.9)
57
(50.9)
Fisher’s test de probabilité exacte
non-porteur
20
(35,1)
55
(49,1)
[2 × 2]
total
75
(100)
112
(100)
NS
candidose orale
pseudomembraneuse
42
(73,7)
42
(37,5)
érythémateuse
11
(19,3)
52
( 46.4)
test de probabilité exacte de Fisher
hypertrophique
2
(3.5)
4
(3.6)
[2 × 2]
Mixed
2
(3.5)
14
(12.5)
N.S.
Total
55
(100)
112
(100)
Figure entre parenthèses représente le pourcentage, sauf l'âge.
Classification de la candidose orale (OC)
Classification des cas d'OC diagnostiqués est également indiqué dans le tableau 1. Parmi les 57 patients de l'étude 2006-2007, OC était le plus souvent classé comme OC pseudomembraneuse (73,7%), suivie par OC érythémateuse (19,3%). Dans l'étude 2012-2013, cependant, OC érythémateuse représentait la moitié (46,4%) des cas d'OC, suivie par OC pseudomembraneuse (37,5%) et OC mixte (érythémateuse et pseudomembraneuse, 12,5%), mais aucune différence statistique n'a été notée.
espèces de Candida
isolés
au total, 158 souches de Candida
ont été isolés chez des patients dans l'étude 2012-2013. Les espèces les plus fréquemment isolées de Candida
étaient Candida albicans
(C. albicans
, 116 souches, 73,4%), suivie par C. glabrata
(36 souches, 22,8%), C. tropicalis
(3 souches, 1,9%), C. parapsilosis
(2 souches, 1,3%), et C. krusei
(1 souche, 0,6%) (tableau 2). Lors de l'analyse sur une base du patient, C. albicans
a été isolée chez tous les patients (n = 112), alors que C. glabrata
n'a jamais été retrouvé sur son propre, seulement en association avec C. albicans
chez 36 patients . Plus d'un type d'espèces de Candida a été isolé de chez 41 patients, avec C. albicans concomitants
et C. glabrata
étant la combinaison la plus courante dans environ 90% de ces patients. En revanche, parmi les 65 souches de Candida
isolées chez des patients dans l'étude 2006-2007, 56 souches de C. albicans
(86,2%), 8 souches de C. glabrata
(12,3%), et 1 souche de C. tropicalis
(1,5%) ont été identifiés, et aucune souche de C. parapsilosis
et C. krusei
ont été détectés. Ainsi, dans l'étude 2012-2013, le nombre de souches isolées de C. glabrata
était presque le double de l'étude 2006-2007, et le rapport de C. albicans
aux souches de Candida tout a été donc significativement plus faible dans l'étude 2012-2013 lorsqu'il est analysé sur une souche de base ou sur un patient-base. Ainsi, à la fois le patient base et la souche-base des analyses, une différence statistique n'a été observée entre l'étude 2006-2007 et l'étude 2012-2013 (p & lt; 0,01) .Table 2 Répartition des espèces de Candida isolées chez des patients atteints de candidose orale les études
espèces de Candida 2006-2007 et 2012-2013
Nombre de patients (%)
test
2006 à 2007
2012-2013
espèces simples isolé
Candida albicans
(CA )
49
(86,0)
71
(63,4)
Candida glabrata
(CG)
1
(1,8)
0
(0)
Candida tropicalis
( CT)
0
(0)
0
(0)
Candida parapsilosis
(CP )
0
(0)
0
(0)
Candida krusei
(CK)
0
(0)
0
(0)
test de probabilité exacte de Fisher
espèces pluriel isolé
[2 × 10]
CA + CG
6
(10,5)
36
(32,1)
p & lt; 0,01
CA + CT
0
(0)
3
(2,7)
CA + CP
0
(0)
1
(0,9)
CA + CG + CT
1
(1,8)
0
(0)
CA + CP + CK
0
(0)
1
(0.9)
Total
57
(100)
112
(100)
espèces de Candida
Nombre total de Candida souches isolées (%)
test
2006-2007
2012-2013
Candida albicans
56
(86,2)
112
(72,8)
Candida glabrata
8
(12,3)
36
(23,4)
Candida tropicalis
1
(1,5)
3
(1.9)
exact de Fisher test de probabilité
Candida parapsilosis
0
(0)
2
(1.3)
[2 × 5]
Candida krusei
0
(0)
1
(0,6)
p & lt; 0,01
total
65
(100)
154
(100
susceptibilité aux médicaments antifongiques
Depuis quelques (1 à 3 souches) des espèces du Candida albicans autre que C.
et C. glabrata
ont été isolés dans les deux études, les CMI de médicaments antifongiques contre C. tropicalis
, C. parapsilosis,
et C. krusei
, qui n'a jamais été isolé seul, mais uniquement en combinaison avec C. albicans
et C. glabrata
, ne sont pas fiables. Par conséquent, les résultats des tests de sensibilité portent principalement sur les CMI de C. albicans
et C. glabrata
(tableau 3) .Table 3 antifongique profil de sensibilité, contre l'amphotéricine B, flucytosine, fluconazole, miconazole, l'itraconazole, et micafungine, des espèces de Candida isolées chez des patients atteints de candidose orale dans les études 2006-2007 et 2012-2013
a. amphotéricine B (AMPH-B)
Année
Strain
No.
MIC souches (μg/mL)
MIC50
MIC90
<0.03
0.03
0.06
0.125
0.25
0.5
1
2
4
8
16
>16
2006-2007
C. albicans
56
8
43
3
2
0,5
0,5
C. glabrata
8
1
2
2
2
1
0,5
2
C. tropicalis
1
1
0,25
0,25
2012-2013
C. albicans
112
4
12
86
9
1
0,5
1
C. glabrata
36
1
2
16
14
2
1
0,5
1
C. tropicalis
3
1
2
1
1
C. parapsilosis
2
2
& lt; 0,03
& lt; 0,03
C. krusei
1
1
0,5
0,5
b. flucytosine (5-FC)
Année
Strain
Nombre de souches
MIC (pg /mL)
la MIC MIC 50
90
& lt; 0,125
0,125
0,25
0,5
1
2
4
8
16
32
64
& gt ; 64
2006-2007
C. albicans
56
18
8
24
3
1
2
0,25
0,5
C. glabrata
8
4
1
1
2
& lt; 0,125
16
C. tropicalis
1
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
56
1
43
3
3
4
1
1
0,25
1
C. glabrata
36
20
6
6
2
1
1
& lt; 0,125
8
C. tropicalis
3
3
& lt; 0,125
& lt; 0,125
C. parapsilosis
2
2
2
C. krusei
1
1
1
0,25
0,25
c. fluconazole (FLCZ)
Année
Strain
Nombre de souches
MIC (pg /mL)
MIC MIC de 50
90
& lt; 0,125
0,125
0,25
0,5
1
2
4
8
16
32
64
& gt; 64
2006-2007
C. albicans
56
22
22
5
1
1
1
1
3
0,5
4
C. glabrata
8
1
2
2
1
1
1
2
& gt; 64
C. tropicalis
1
1
& gt; 64
& gt; 64
2012-2013
C. albicans
112
4
33
51
2
1
3
3
3
0,5
2
C. glabrata
36
4
1
5
6
7
7
2
16
64
C. tropicalis
3
1
2
32
32
C. parapsilosis
2
2
2
2
C. krusei
1
1
2
2
d. miconazole (MCZ)
Année
Strain
Nombre de souches
MIC (pg /mL)
MIC MIC de 50
90
& lt; 0,03
0,03
0,06
0,125
0,25
0.5
1
2
4
8
16
& gt; 16
2006-2007
C. albicans
56
2
22
20
8
1
3
0,125
0,25
C. glabrata
8
1
2
2
1
2
1
4
C. tropicalis
1
0,125
0,125
2012-2013
C. albicans
112
2
20
64
18
1
1
1
2
3
0,25
0,5
C. glabrata
36
1
5
12
7
3
3
2
3
2
16
C . tropicalis
3
1
1
1
1
4
C. parapsilosis
2
1
1
1-2
2
C. kurusei
1
1
4
4
e. itraconazole (ZCIT)
Année
Strain
Nombre de souches
MIC (pg /mL)
MIC
