Résumé de l'arrière-plan
profil microbien Subgingival associé à la parodontite a été signalé à différer de manière significative par la situation géographique. Les échantillons Méthodes
Subgingival ADN Le but de cette étude était d'évaluer l'association entre un groupe de bactéries pathogènes parodontales putatifs et la parodontite chronique chez les Yéménites. ont été obtenus à partir de sites malades et sains de 20 non-fumeurs, modérée à sévère sujets chroniques de parodontite. Résultats de valeurs absolues (ADN bactérien copies par échantillon) et les chiffres relatifs (% des bactéries totales) de sept espèces periopathogenic /genres représentatifs des complexes rouge et orange ont été déterminées en utilisant des tests q-PCR Taqman.
Le q-PCR des essais ont montré une excellente linéarité (R
2 & gt; 0,99) et une sensibilité de 100 copies /échantillon. Le taux de détection était de 100% pour toutes les espèces testées /genres sauf pour P. gingivalis
et A. actinomycetemcomitans
qui ont été détectés à 97,5% et 67,5%, respectivement. Les chiffres absolus du journal médian étaient de l'ordre de 2.41-6.53 copies par échantillon alors que les chiffres relatifs médians étaient de l'ordre de 0,001 à 0,77%, les deux étant le plus élevé pour fusobactéries et le plus bas pour A. actinomycetemcomitans
. interspécifiques importantes corrélations ont été observées. Réglage des comparaisons multiples (P≤0.0063), que T. forsythia, T. denticola
et P. micra
maintenu association significative avec la destruction parodontale. Cette dernière espèce, cependant, a montré la plus forte association et a été trouvé dans des proportions plus élevées au niveau des sites de parodontite à travers tous les sujets (3,39 augmentation médiane de pliage). Aucune différence significative n'a été observée pour P. gingivalis.
Conclusions
P. micra
plutôt que P. gingivalis
apparaît comme un agent pathogène du trapèze dans cet échantillon yéménite. Cependant, ces résultats doivent être validés dans une étude à plus grande échelle avant de pouvoir être réclamés pour représenter les variations ethniques dans l'association des agents pathogènes à la parodontite.
Mots-clés
Microbiologie Pathogens temps réel Parvimonas PCR micra parodontite électronique matériel supplémentaire
La version en ligne de cet article (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-13) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés
Contexte
parodontite représente une gamme d'entités cliniques. qui sont caractérisées par la destruction immunologique de la dent des structures de support en réponse à une stimulation chronique par des bactéries spécifiques dans le biofilm sous-gingival [1]. Les trois dernières décennies ont été témoins ou si une explosion dans notre compréhension de la microbiologie de la parodontite. Des études antérieures utilisant des techniques à base de culture récupéré environ 250 espèces bactériennes (à & gt; 1% de l'abondance relative) à partir d'échantillons de plaque [2]. Avec l'application extensive des techniques moléculaires au cours de la dernière décennie, doubler ce nombre d'espèces nouvelles ont été identifiés [3-5] apportant la richesse de la flore sous-gingivale à plus de 700 espèces bactériennes, environ 50% sont incultivables.
Alors que la majorité des microbiote sous-gingivale est considéré comme commensal, plusieurs espèces ont été impliqués comme pathogènes parodontaux. Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsythia
et Treponema denticola
(le complexe dite rouge) ont montré jusqu'ici la plus forte association avec parodontite chronique [6]. D'autres agents pathogènes putatifs comprennent Fusobacterium de spp., Spp., Campylobacter rectus
Prevotella, Eubacterium nodatom
et Parvimonas micra
(auparavant des micros Peptostreptococcus
) [6]. phylotypes incultivables tels que synergistetes
, TM7 et Treponema de la taxa sont également soupçonnés de jouer un rôle pathogène dans la parodontite chronique [3, 4, 7]. En fait, on pense que la destruction du parodonte est déclenchée par un consortium bactérien plutôt que d'un seul agent pathogène [1].
Un certain nombre de techniques de biologie moléculaire ont été utilisées pour la détection et la quantification des pathogènes parodontaux dans des échantillons de plaque, y compris l'ADN d'hybridation d'ADN , PCR en temps réel et conventionnel, et ARNr 16S séquençage du clone [8]. Parmi ceux-ci, la PCR en temps réel est le permettant la détection plus sensible aussi faible que 1,6 cellules par réaction [9, 10]. Elle permet aussi de normaliser les comptages d'ADN cible pour la numération bactérienne totale dans l'échantillon (quantification relative), réglant ainsi les variations d'échantillonnage et de faire des comparaisons entre les échantillons plus fiables [11, 12]. Étonnamment, la PCR en temps réel n'a pas été aussi largement utilisé dans l'étude de la microbiologie de la parodontite comme on peut s'y attendre.
Profil microbien Subgingival associé à la parodontite ont été signalés à différer de manière significative par la situation géographique indépendamment des autres facteurs connus pour modifier sous-gingival composition microbienne [8, 13]. Il devient donc prudent, que l'obtention de plus d'informations sur la répartition mondiale des agents pathogènes et des motifs de leur association avec la maladie parodontale peut améliorer notre compréhension des différences dans le rôle qu'ils jouent dans la parodontite dans différentes populations. En l'absence de données sur cette provenance du Moyen-Orient, l'objectif de l'étude était d'évaluer l'association de sept agents pathogènes parodontaux putatifs avec parodontite chronique dans une population yéménite en utilisant des analyses quantitatives de PCR.
Méthodes
sujets d'étude et Examen clinique
Vingt sujets, âgé de 30-50 ans, avec parodontite modérée à sévère chronique (ayant au moins 1 site par quadrant avec la profondeur de poche ≥ 5 mm et la perte & gt fixation; 3 mm), ont été recrutés parmi les patients fréquentant dentaires cliniques à l'hôpital Al-Thawra, Sanaa, au Yémen. Les sujets présentant moins de 20 dents ou un diagnostic de parodontite agressive (ceux avec typique première molaire /présentation incisive centrale) ont été exclus. D'autres critères d'exclusion comprenaient des antécédents de tabagisme, le traitement parodontal ou l'utilisation antiseptique antibiotique /orale dans les 6 mois, la grossesse ou l'allaitement précédent, et toute prise d'une maladie ou d'un médicament systémique connu pour modifier l'inflammation parodontale.
L'indice communauté parodontale [14] a été utilisé pour dépister l'état parodontal par un seul, bien formé et precaliberated examinateur (Shuga-Aldin HM). Chez les sujets éligibles, profondeur de poche (PD) pour la poche la plus profonde dans chaque quadrant en millimètres a été établie à l'aide d'une sonde Williams. L'indice de plaque [15], a été mesurée sur les surfaces buccales et linguales /palatines /labiales des dents d'index. Les caractéristiques cliniques du groupe d'étude sont présentés dans le tableau 1.Table 1 Caractéristiques cliniques de Genre de l'étude groupe (M /F%)
60/40
Age , la médiane (intervalle interquartile)
40 (30-45)
Plaque index, médian (intervalle interquartile)
1,5 (1,25 à 1,65)
profondeur de poche sur les sites échantillonnés, la médiane (intervalle interquartile)
5,5 (5,00 à 6,75)
l'étude a été réalisée en conformité avec la déclaration d'Helsinki. Il a été approuvé par le médecin et le Conseil des études de santé, Graduate College, Université de Khartoum. Le consentement éclairé a été obtenu à partir de tous les sujets:. Prélèvement et extraction d'ADN
Pour chaque sujet, un échantillon regroupé sous-gingivale de la poche la plus profonde dans chaque quadrant (PD ≥ 5 mm) et un autre de 4 sites sains (PD ≤ 3 mm ; aucune perte d'attache) ont été obtenus, en utilisant des points de papier stériles. plaque supragingival a été retirée avant l'échantillonnage en utilisant des boulettes de coton stériles. Les échantillons (40 au total) ont été stockés dans un tampon de faible TE EDTA (Invitrogen, Etats-Unis) à -80 ° C jusqu'au moment du traitement.
Au moment de l'extraction de l'ADN, les échantillons ont été centrifugés à 15 000 g pendant 1 minute et le culot était remises en suspension dans 180 pi de tampon de digestion de lysozyme (25 mM de Tris-HCl, pH 8,0, EDTA 2,5 mM, 1% de Triton X-100) contenant 20 mg /ml de lysozyme et ont été mises en incubation à 37 ° C pendant une nuit. La digestion a ensuite été soumis à l'extraction d'ADN en utilisant le kit d'extraction d'ADN génomique Purelink (Invitrogen, USA); L'ADN a été élue dans 100 ul de tampon fourni et stocké à 4 ° C pour une analyse ultérieure des dosages PCR quantitative de bactéries totales.
, Fusobacterium spp s., Prevotella spp s., Actinobacillus actinomycetemcomitans
(anciennement Actinobacillus actinomycetemcomitans
), Parvimonas micra
(anciennement Micromonas micra
ou Peptostreptococcus micros)
, Porphyromonas gingivalis
, Tannerella forsythia
et Treponema denticola
ont été détectés et quantifiés dans les extraits d'ADN en utilisant la technologie PCR en temps réel TaqMan [16]. Des séquences de sondes et amorces utilisées dans l'étude sont présentés dans le tableau 2. Ils ont été fournis par Primerdesign, Royaume-Uni, optimisé et prêt à utiliser des kits qui comprenait également un contrôle positif à base de plasmide (séquence amplicon insérée). Cette dernière a été diluée en série pour construire des courbes étalons pour la quantification absolue des espèces d'essai et d'évaluer l'efficacité, la linéarité et la sensibilité des assays.Table 2 séquences d'amorces et des sondes utilisées dans des essais de PCR quantitatives des espèces d'essai
Sequences 5'-3 '
gène cible
taille du produit
Ref
A. actinomycetemcomitans
F-amorce: GGRAGAATGGATGGCGATAT
hgpA
81 pb
Cette étude
R-primaire: ATCAGAATGAACATAACCTATACCA
sonde: FAM- ATGAACGCAATTCAGCCCAGA ACTG-BHQ
P. micra
F-amorce: TGAGCAACCTACCTTACACAG
16S ARNr
112 pb
[17]
R-primer: GCCCTTCTTACACCGATAAATC
Probe: FAM- ACCGCATGAGACCACAGAA TCGCA-BHQ
P. gingivalis
F-amorce: ACGAATCAAAGGTGGCTAAGTT
fimA
85 pb
[17]
R-primer: TTAGTCGCATTTTCGGCTGAT
sonde: FAM- CCTGCTGTTCTCCATTATAAAC CATTACGG -BHQ
T. forsythia
F-primer: GATAGGCTTAACACATGCAAGTC
ARNr 16S
99 pb
[17]
R-primaire: GTTGCGGGCAGGTTACATAC
sonde: FAM- TTACTCACCCGTGCGCCGGTCG-BHQ
T. denticola
F-amorce: GGGCGGCTTGAAATAATRATG
ARNr 16S
92 pb
[17]
R-primer: CTCCCTTACCGTTCGACTTG
sonde: FAM- CAGCGTTCGTTCTGAGCCA GGATCA-BHQ
total bactéries
F-amorce: AAACTCAAAGGAATTGACGGGG
ARNr 16S
205 pb
[17]
R-primer: TTGCGCTCGTTGCGGGACT
Probe:. FAM-CTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA-BHQ
Fusobacterium
spp *
F-primaire: CGCAGAAGGTGAAAGTCCTGTAT
23S r ARN
101 pb
[18]
R-primer: TGGTCCTCACTGATTCACACAGA
Probe: FAM . - CTTTGCTCCCAAGTAACATG GAACACGA-BHQ
Prevotella
spp *
F-amorce: ACCAGCCAAGTAGCGTGCA
ARNr 16S
153 pb
[19]
R-primer: TGGACCTTCCGTATTACCGC
sonde: FAM- AATAAGGACCGGCTAATTCC GTGCCAG -BHQ
* la couverture des espèces est fournie dans les rapports originaux
pour vérifier la spécificité, les séquences d'amorces ont d'abord été sablées contre la base de séquences eubactériens au national Center for Biotechnology information (NCBI. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/index.cgi?LINK_LOC=BlastHome). Ensuite, chaque jeu a été testé dans un temps réel test PCR SYBR Green contre un sous-gingivale échantillon d'ADN mis en commun à partir de 5 patients atteints de parodontite, suivie d'une analyse de la courbe de dissociation. Un ensemble d'amorces a été jugée comme étant spécifique si elle a donné lieu à un seul pic de dissociation qui est identique au pic de l'étalon positif.
Chaque réaction composé de 10 ul mastermix avec ROX (Primerdesign, Royaume-Uni), 1 pi amorces /sonde mélange, ADN 5 pi de modèle (ou d'une norme positive), et 4 pi d'eau PCR-grade; tous les essais ont été effectués sur un 7000 plateforme ABI-PCR en temps réel (Applied Biosystems, USA) en utilisant le programme suivant: L'activation de l'enzyme initiale à 95 ° C pendant 10 minutes suivie de 40 cycles de dénaturation à 95 ° C pendant 15 secondes et annelage /allongement à 60 ° C pendant 1 min. Les données ont été acquises à travers le canal FAM compte
absolus, en copies /réaction, ont été calculées en utilisant les courbes standard. ceux-ci ont ensuite été convertis en copies /échantillon en multipliant par 20 (étant donné que 5 ul de l'extrait a été inclus dans la réaction). Chiffres relatifs de l'espèce d'essai /genres ont ensuite été calculés en% des bactéries totales.
analyse statistique
examen des données cliniques et microbiologiques avec la statistique de Kolmogorov-Smirnov ont révélé une distribution non normale. Par conséquent, ils ont été résumées comme médianes et interquartiles (IQR). Importance des différences entre les sites sains et parodontite en termes de chiffres absolus (log transformé) et relatifs ont été recherchées à l'aide du test de Wilcoxon signé. correction de Bonferroni pour la comparaison multiple a été appliqué de manière un p-valeur ajustée de 0,0063 a été utilisé pour décrire de différence significative. Résultats Tous les tests ont été effectuées à l'aide de SPSS 17 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
Les tests de PCR quantitatives
Les huit essais de PCR en temps réel ont montré une excellente linéarité (R 2 ≥ 0,99) sur une plage dynamique de 5-10 6 copies /réaction (figure 1), la réalisation d'une sensibilité de 100 copies /échantillon (extraction d'ADN donnée était efficace à 100%). Tous les jeux d'amorces ont produit des pics de dissociation simples dans les SYBR essais verts qui correspondent aux pics standard (figure 2). coups de feu Figure 1 de l'écran d'ABI 7000 la sortie du logiciel SDS montrant des courbes standards pour deux des amorces /ensembles de sondes utilisées dans cette étude (T. denticola à gauche et A .actinomycetemcomitans à droite). Des dilutions en série de contrôle positif à base de plasmide ont été préparées avec des concentrations finales de 5-106 copies /réaction. Les dosages ont été réalisés comme décrit dans le texte. Les courbes ont été obtenues en traçant log copies ADN comptent contre les valeurs du cycle seuil (Ct).
Figure 2 Disassociation analyse de la courbe des amplicons produits en testant chacune des paires d'amorces utilisées dans l'étude contre échantillon d'ADN sous-gingivale commun de cinq sujets de parodontite utilisant un dosage Syber Green PCR. Chaque paire a donné lieu à un seul pic indiquant une amplification spécifique.
Constatations microbiologiques générales
Toutes les espèces testées /genres ont été détectés dans 100% des échantillons, sauf P. gingivalis
et A. actinomycetemcomitans
, pour lesquels le taux de détection était de 97,5% et 67,5%, respectivement. Les données globales des comptages absolus et relatifs sont présentés à la figure 3. Le journal médian numération absolue était 8,69 pour les bactéries totales et dans la gamme de 2,41 à 6,53 pour les espèces individuelles, étant le plus élevé pour fusobactéries et le plus bas pour A. actinomycetemcomitans
. Chiffres relatifs médians (en% des bactéries totales) étaient de l'ordre de de 0,001 à 0,77%, soit encore plus élevé pour fusobactéries et le plus bas pour A. actinomycetemcomitans
. Total des agents pathogènes (somme de toutes les 7 espèces /genres) constituaient 2,1% (IQR 1,36 à 3,87%). Aucune espèce n'a été détectée à des taux supérieurs à 1% dans 75% des échantillons. A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis
et P. micra
ont jamais été détectés chez plus de 1%, tandis que fusobactéries, prevotellae, T. denticola
et T. forsythia
atteint aussi loin que 5,3%, 2,1%, 2,3% et 4,1%, respectivement, des valeurs aberrantes. Figure 3 parcelles Box montrant la médiane et interquartile (IQR) de l'ensemble absolu (à gauche) et relative (à droite) compte des espèces d'essai /genres dans les échantillons de biofilm sous-gingivales. Les barres d'erreur représentent les données à moins de 1,5 au-dessus IQR Q3 (troisième quartile) et en dessous de T1 (premier quartile). Les cercles et les étoiles sont aberrantes. Aa; A. actinomycetemcomitans
; Fuso: fusobactéries; Pg: P. gingivalis
; Pr: prevotellae; Pm: Parvimonas micra
; Tf: T. forsythia
; Td:. T. denticola
analyse non-paramétrique (corrélation de Spearman) a révélé un certain nombre d'importantes corrélations inter-espèces. Basé sur le nombre de journaux, et après avoir effectué la correction de Bonferroni pour les comparaisons multiples (P ≤ 0,002), fusobactéries ont montré une corrélation significative avec prevotellae et P. micra
(r = 0,71 et 0,53, respectivement), tandis que T. denticola
significativement en corrélation avec T. forsythia
(r = 0,72). Presque les mêmes schémas d'associations ont été trouvées sur la base des proportions, mais la corrélation entre fusobactéries et P. micra
disparu. Prenant un niveau moins conservateur de signification (P ≤ 0,01), T. forsythia
a également constaté une corrélation positive avec fusobactéries et prevotellae.
Parodontite contre des sites sains
Les chiffres du journal absolu des espèces d'essai /genres dans les échantillons de plaque sous-gingivale des sites sains et parodontite sont présentés dans le Tableau 3. on a récupéré l'ADN bactérien total de plus à partir des sites de parodontite que les sites sains bien que cela n'a pas résisté ajustement pour les comparaisons multiples. . Toutes les espèces d'essai /genres, à l'exception de A. actinomycetemcomitans et Fusobacterium de spp,
étaient également présents à des niveaux plus élevés dans les sites avec la destruction parodontale; cependant, seulement P. micra
et T. forsythia
maintenu différence significative après correction pour les comparaisons multiples (P ≤ 0,0063) .Table 3 médians (gamme interquartile) log chiffres de l'espèce d'essai /genres dans la plaque sous-gingivale de la sites espèces
santé sites sains et parodontite (n = 20)
parodontite sites (n = 20)
P
total bactéries
8,65 (8,46 à 8,83)
8,78 (8,52 à 9,10) 0,04
A. actinomycetemcomitans
2,42 (0,00 à 3,50)
2,40 (0,00 à 307)
0,67
Fusobacterium spp.
6,62 (5,82 à 6,85)
6,37 (6,00 à 7,03)
0,08
Prevotella spp. 6.20 (5,65 à 6,65)
6,42 (6,07 à 6,80) 0,02
P. micra
4,33 (3,78 à 5,21 )
5,40 (4,92 à 5,65)
0,0001 *
P. gingivalis
3,90 (2,56 à 5,70)
5,52 (03/07 à 06/04)
0,04
T. forsythia
6,09 (5,24 à 6,47)
6,71 (5,97 à 6,91)
0,006 *
T. denticola
5,47 (4,10 à 6,26)
6,16 (5,71 -6,76)
0,02
* statistiquement significatif après ajustement pour les comparaisons multiples (P
≤ 0,0063); Wilcoxon Test des rangs signés.
Moyen des chiffres relatifs (proportions), toutes les espèces d'essai, sauf A. actinomycetemcomitans
, étaient présents à des proportions plus élevées dans les sites de parodontite par rapport aux sites sains (tableau 4). Cependant, les différences ne sont significatives que pour P. micra
et T. denticola
(P ≤ 0,0063) qui a montré 3,39 et 1,33 médiane augmentation de pliage, respectivement, dans les sites où la destruction parodontale par rapport à des sites sans destruction. P. micra
était présent à compte relativement plus élevés dans la parodontite par rapport à des sites sains à travers tous les 4 médian subjects.Table (intervalle interquartile) compte relatifs (% des bactéries totales) de l'espèce d'essai /genres dans la plaque sous-gingivale de la santé et de la parodontite sites espèces
santé sites (n = 20)
parodontite des sites (n = 20)
Pliez différence
P
A. actinomycetemcomitans
0,001 (0,000 à 0,020)
0,001 (0,000 à 0,005)
0,07
0,12
Fusobacterium spp.
0,789 (0,238 à 1,205)
0,701 (0,250 à 1,029)
0,81
0.79
Prevotella spp.
0,360 (0,222 à 0,903)
0,394 (0,228 à 0,751)
1,23
0.50
P. micra
0,009 (0,003 à 0,022)
0,031 (0,014 à 0,081)
3,39
0,0001 *
P. gingivalis
0,004 (de 0,0001 à 0,0611)
0,068 (0,0001-0,219)
1,97
0,156
T. forsythia
0,302 (de 0,055 à 0,541)
0,425 (0,170 à 1,50 )
0,86
0,08
T. denticola
0,092 (de 0,007 à 0,438)
0,338 ( 0,126 à 0,613)
1,33
0,006 *
* statistiquement significatif après ajustement pour les comparaisons multiples (P
≤ 0,0063); Rapport de Wilcoxon Test des rangs signés.
études du Moyen-Orient sont limités à ceux qui a évalué l'effet de l'hygiène bucco-dentaire traditionnels tels que miswak ou certaines habitudes, comme qat à mâcher, sur les niveaux de pathogènes parodontaux [17, 20 21]; aucune étude n'a jusqu'à présent évalué quels pathogènes parodontaux sont particulièrement associés à la parodontite dans une population arabe. Les chiffres de l'étude par rapport de 7 agents pathogènes putatifs entre les sites sains et malades chez les patients atteints de parodontite chronique modérée à sévère, en utilisant la PCR en temps réel. Malgré l'avantage de cette technique (sensibilité et possibilité de quantification relative), un nombre limité d'études utilisé dans l'étude de la microbiologie de la parodontite et encore moins utilisé la quantification relative pour faire des comparaisons entre la santé et la maladie. des sites sains dans les mêmes sujets plutôt que des individus sains ont été utilisés comme témoins pour éviter les effets des variations inter-individuelles dans des facteurs autres que la composition microbienne. Néanmoins, y compris des sujets sains que des contrôles supplémentaires auraient permis pour plus de comparaisons et une vision plus large des différences dans la composition microbienne entre la santé parodontale et la maladie. Donc, cela pourrait être considéré comme une limitation de l'étude actuelle. Une autre limitation est que le saignement au sondage n'a pas été enregistrée bien qu'il ait été montré précédemment comme une variable clinique importante. En outre, alors que les agents pathogènes les plus importants ont été testés, le panel aurait pu inclure plus d'espèces en particulier les agents pathogènes nouveaux, tels que Filifactor alocis
, synergistetes orales et TM7. Chiffres
absolus ont été signalés dans les copies d'ADN plutôt que le nombre de cellules, car le gène cible nombre de copies par génome, en particulier gène 16S ARNr, varie d'une espèce à l'autre et on ne sait pas pour certains d'entre eux. Cela implique que le nombre de bactéries réelles pour certaines des espèces testées /genres sont inférieurs aux chiffres rapportés dans l'étude. Cependant, elle n'a pas d'influence sur la validité des comparaisons entre les sites ou les patients. Théoriquement, le moins une copie du gène par la réaction peut être détectée par PCR en temps réel; cependant, dans la pratique, cela est généralement pas possible. Certaines des études précédentes sur les pathogènes parodontaux étaient en fait pas clair quant à savoir si la limite inférieure de détection a été signalé par réaction ou par échantillon, mais il peut être conclu qu'au moins 100 copies d'ADN par réaction pourraient être détectés [11, 22] . Cependant, une limite de détection aussi bas que 1,6 cellules par réaction a été rapporté [9, 10], qui est comparable à la sensibilité des essais q-PCR dans cette étude (5 copies /réaction). La sensibilité élevée de q-PCR explique probablement les taux de détection plus élevés d'agents pathogènes observés dans les études qui ont utilisé cette technique par rapport à ceux avec des techniques de culture ou de l'ADN d'hybridation de l'ADN.
Les chiffres du journal médian des bactéries totales, ainsi que certains des les espèces d'essai /genres dans cette étude sont 1-3 log plus élevés que ceux déclarés par la plupart des études précédentes qui utilisaient PCR en temps réel [9, 10, 12, 22]. En revanche, Lyons et al. [11] ont rapporté les chiffres aussi élevés que 10 14 et 10 12 pour les bactéries totales et P. gingivalis
, respectivement, ce qui semble peu plausible. Bien que ces différences peuvent être attribuables à des variations dans l'échantillonnage et l'extraction d'ADN efficacité, des inexactitudes dans la préparation des courbes standard représentent probablement la plus grande partie d'entre eux. Courbes préparées en utilisant des dilutions en série de cellules bactériennes ou extrait d'ADN génomique, comme cela se fait dans la plupart des études antérieures, peuvent ne pas être aussi précis que ceux générés en utilisant des plasmides. D'autre part, en raison de polarisation de l'ADN plasmidique conformation de quantification a été rapporté récemment, en particulier avec des plasmides circulaires [23]. Toutefois, étant donné que les valeurs de cette étude sont également proches de ceux obtenus précédemment par checkerboard hybridation ADN-ADN [24], ils peuvent être supposés être assez précis.
Les abondances relatives de T. denticola
et T. forsythia
dans l'étude actuelle sont très comparables à ceux rapportés pour une population japonaise en utilisant une technique de quantification similaire [12]. Dans cette dernière étude, cependant, P. gingivalis
et Prevotella intermedia
ont été présentés à des proportions extrêmement élevées et a montré une association significative avec la maladie qui, en contraste avec les résultats actuels. Utilisation de damier ADN-ADN hybridation, des proportions beaucoup plus élevées des membres complexes rouges ont été rapportés chez des patients chroniques de parodontite de Etats-Unis, le Brésil, le Chili et la Suède [13] par rapport aux chiffres relatifs décrits ici. Toutefois, cela peut être tout simplement justifiée par le fait que les proportions dans la technique de damier sont calculées en normalisant les valeurs absolues de chaque espèce à des comptages totaux de l'espèce 40 sondes utilisées plutôt que le total des bactéries comme cela se fait dans l'étude actuelle.
Relative les données de quantification montrent que bien que les agents pathogènes parodontaux étaient présents dans des proportions beaucoup plus élevées dans les sites de parodontite par rapport à des sites sains, ils constituent encore une minorité de microbiote sous-gingivale. Ceci est, cependant, pas surprenant puisque l'évaluation des études antérieures sur la base de culture et des études plus récentes utilisant des techniques moléculaires révèle clairement que les agents pathogènes parodontaux, en particulier les membres du complexe rouge, ont presque toujours été détectée à une faible abondance [3, 24, 25] . Ce qui n'a pas été abordée de manière adéquate, d'autre part, est de savoir comment ces agents pathogènes peuvent causer la parodontite à cette faible abondance. Une intéressante vue actuellement en évolution est que la faible abondance des pathogènes parodontaux orchestrent parodontite en induisant une communauté microbienne de dysbiotic «pathogène» qui, à son tour médie la destruction osseuse [26]. On pense que le résultat de la capacité de ces agents pathogènes à renverser certaines composantes de la réponse de l'hôte plutôt que d'agir directement en tant que bactéries pro-inflammatoires comme cela a été récemment démontré pour P. gingivalis
in vitro [27]. Par conséquent, de faibles pathogènes parodontaux abondantes sont revendiquées pour fonctionner comme des agents pathogènes clés de voûte, une hypothèse qui remet en question le rôle des membres complexes rouges comme des agents pathogènes classiques [28].
L'étude n'a pas montré une association entre P. gingivalis
et destruction parodontale, qui est très difficile de se défendre contre les preuves accablantes existant. Toutefois, cela peut simplement être un échec pour détecter l'association en raison d'un manque de puissance adéquate existante, surtout qu'il y avait une différence significative dans le nombre absolu au niveau de 0,05. D'autre part, étant donné la nature polymicrobienne de la parodontite, et compte tenu de la nouvelle hypothèse clé de voûte de l'agent pathogène, il est également plausible de proposer que les autres membres de l'équipe pathogène peut dans certains cas prendre le rôle de P. gingivalis
comme un agent pathogène du trapèze. En fait, P. gingivalis
n'a pas toujours montré la plus forte association avec la parodontite [3, 29, 30]. Dans l'étude actuelle, T. denticola
et T. forsythia
, les deux membres du complexe rouge, ont bien montré une association significative avec la parodontite, ce qui est cohérent avec la littérature. Cependant, P. micra
(anciennement connu sous le nom de Peptostreptococcus micros
) a montré la plus forte association avec la maladie étant présente à significativement plus absolue et relative chiffres dans les sites de parodontite dans tous les sujets de l'étude. Cette espèce est un membre de l'orange microbienne complexe [6], et il existe une preuve élargissant son rôle, ainsi que d'autres peptostreptococci, comme un agent pathogène parodontal [3, 29, 31, 32].
Conclusion
Malgré sa présence dans les chiffres relatifs très faibles, P. micra
a montré la plus forte association avec la destruction parodontale, ce qui suggère un rôle potentiel en tant que clé de voûte pathogène à la place de P. gingivalis
. Toutefois, cela doit être validée dans une étude à plus grande échelle avant de pouvoir prétendre à représenter les variations ethniques dans l'association des agents pathogènes avec parodontite
Déclarations Remerciements.
Cette étude a été financée en partie par Al-saeed Foundation pour la science et la technologie. Tous les travaux de laboratoire a été réalisée au Laboratoire Moléculaire Research, UST, Sana'a, Yémen. Nous tenons à remercier le Dr Mohammed Sultan pour son aide à la collecte de l'échantillon. De fichiers soumis originaux pour les images
Voici les liens pour les auteurs
auteurs originaux soumis fichiers pour les images. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
