Résumé de l'arrière-plan
carcinome des cellules squameuses est la tumeur maligne la plus importante avec le site principal dans la cavité buccale et, étant donné la grande exposition de la muqueuse et les lèvres des facteurs étiologiques de cette tumeur, son incidence est élevée. L'étude des déterminants pronostiques est significatif pour les attentes de la proposition de traitement et la guérison du patient. La réponse immunitaire locale représentée par infiltrat inflammatoire peritumoral est un facteur pronostique possible.
Méthodes
Dans cette étude, des échantillons de muqueuse buccale de carcinome épidermoïde de cellules ont été analysés, séparés en fonction de leur classification histologique, ainsi que le profil phénotypique du des cellules comprenant l'infiltrat inflammatoire peritumoral a été étudiée par la méthode immunohistochimique, dans la dépendance, l'indice de prolifération cellulaire par l'intermédiaire de la protéine Ki67 expression a été determiné.: Résultats
les lymphocytes T constitués plus de ce infiltrat inflammatoire, et parmi ces cellules, il une prédominance de lymphocytes T CD8 par rapport aux lymphocytes T CD4. Les lymhocytes B étaient le deuxième type de cellules visualisé leucocytaire suivie par les macrophages et les neutrophiles. L'évaluation immunohistochimique de Ki 67 cellules positives a révélé une plus grande expression de cette protéine dans des échantillons de carcinome indifférencié des cellules squameuses.
Conclusion
Les résultats suggèrent que la réponse immunitaire cellulaire est le principal mécanisme de défense dans les cellules squameuses carcinome oral muqueuse, exprimée par le grand nombre de lymphocytes T et les macrophages, et que la plus grande intensité de la réponse locale peut être associé au meilleur pronostic
matériel supplémentaire électronique
la version en ligne de cet article (doi:. 10. 1186 /1472-6831-8-25) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés.
Contexte
tumeurs malignes de la bouche comprennent un groupe hétérogène de lésions qui diffèrent entre eux à des facteurs, cliniques risque aspects, et l'origine histologique. Parmi les différentes tumeurs de ce groupe, le carcinome des cellules squameuses est le type histologique le plus répandu et représente la plupart des cas de cancer buccal diagnostiqué [1-4]. En dépit des campagnes de prévention de plusieurs programmes et l'expansion du réseau de professionnels spécialisés qui privilégient le diagnostic des lésions précancéreuses de la bouche dans les différents services de soins de santé actuellement actives gouvernementales soins de santé, 7% de la population mondiale est touchée par le cancer par voie orale, et il est, par conséquent, un problème de santé dans le monde entier [4].
squameuses provient de carcinome des cellules de l'épithélium qui tapisse la bouche. Ce fait est extrêmement important si l'on considère l'exposition constante de la cavité buccale à des stimuli locaux intrinsèques associés au risque accru de ce type de cancer. Parmi les principaux facteurs de risque, le tabagisme, la consommation chronique d'alcool des boissons et des traumatismes mécaniques chroniques - tels que les prothèses dentaires et inadaptés dents fracturées - se démarquer. En outre, y compris le cancer primaire des lèvres, en particulier de la partie inférieure, nous devrions envisager une exposition continue au rayonnement solaire comme un facteur extrinsèque important, en particulier chez les individus leukodermic. Outre les facteurs intrinsèques locaux et les facteurs extrinsèques, la prédisposition génétique du patient et la réponse immunitaire sont des facteurs déterminants dans le risque de cancer [2, 4-10].
En plus de l'intensification des activités de prévention, plusieurs études ont été élaborées pour établir les facteurs déterminants du pronostic de ces lésions avec l'objectif de minimiser la morbidité et la mortalité causées par la lésion maligne existante. De nombreux auteurs ont étudié une corrélation possible entre la réponse immunitaire, néoplasique comportement, et le pronostic du patient [5, 11, 12].
Meneses et al., (1998) ont démontré, dans les cellules squameuses échantillons de carcinome orale, une association possible entre taille de la tumeur, la zone d'invasion, l'angiogenèse et la caractérisation phénotypique de l'infiltrat inflammatoire principalement constituée peritumoral par les lymphocytes T et les lymphocytes B. Coussens et al., (1999) ont également trouvé dans les carcinomes de la muqueuse buccale d'une association entre la prédominance des mastocytes dans l'infiltrat peritumoral et un plus grand développement de l'angiogenèse stromale, qui fournirait un apport sanguin adéquat pour la nutrition néoplasique, et par conséquent, un moins bon pronostic. le plus long avec l'évaluation de l'infiltrat inflammatoire peritumoral et ses produits, l'étude de la cinétique cellulaires tumoraux, ses mécanismes de régulation et de son inter-relation avec des facteurs de croissance, des oncogènes et anti-oncogènes a également été la cible de plusieurs des études [8, 15-19].
Parmi les événements cellulaires qui déterminent directement l'évolution clinique de la tumeur, de la prolifération cellulaire est importante, à savoir, des troubles du nombre de cellules résultant de dysfonctionnements dans le cycle mitotique [20, 21]. The activité proliférative d'un tissu ou d'une tumeur peut être déterminée par son taux de croissance en utilisant des anticorps dirigés contre des antigènes spécifiques exprimés par la prolifération des cellules tumorales, ce qui permet l'analyse simultanée de la prolifération cellulaire et de l'histologie [13, 22, 23]. La molécule Ki67 a été le marqueur antigénique de choix, car il ne souffre pas beaucoup d'influence de facteurs internes et externes, et son expression nucléaire pendant une période définie du cycle de la cellule représente un avantage dans son utilisation comme marqueur biologique de l'activité mitotique [ ,,,0],24-27].
récemment, il a été démontré que le gène Ki-67 souffre "surexpression" dans les cellules épithéliales des lésions buccales prémalignes et malignes.
dans cette étude, l'indice de prolifération des cellules a été évaluée au moyen de la expression de la protéine Ki67 et le profil phénotypique des cellules qui composent l'infiltrat inflammatoire peritumoral dans des échantillons de cellules squameuses carcinome de la muqueuse buccale. Les résultats ont démontré une implication importante de la population des lymphocytes T dans la composition de l'infiltrat inflammatoire associée à la zone néoplasique. Ces résultats suggèrent également une corrélation entre l'intensité de la réaction inflammatoire peritumoral et la prolifération des cellules tumorales.
Méthodes
échantillons de muqueuse buccale cellules squameuses carcinome du traitement des patients naïfs soumis à des biopsies incisionnelles diagnostiques. Des échantillons de paraffine bloqué (n = 30) ont été obtenus à partir des archives de l'anatomie pathologique de laboratoire de l'École de médecine de la Fondation Dom André Arcoverde -. Valença /RJ
Les blocs ont été traités histologiquement pour obtenir des tranches de 4 um d'épaisseur et colorées avec de l'hématoxyline de routine et de l'éosine (HE).
diapositives ont été évalués par deux examinateurs différents, et les tumeurs histologiquement ont été classées selon la Classification internationale des maladies pour l'oncologie (CIM-O /2000). Les échantillons ont été répartis dans les groupes suivants:
Groupe 1: bien différencié cellules squameuses carcinome de la muqueuse buccale (n = 10)
Groupe 2: modérément différencié cellules squameuses carcinome de la muqueuse buccale (n = 10)
Groupe 3:. cellules squameuses indifférenciées cancer de la muqueuse buccale (n = 10)
histomorphométrie de l'infiltrat inflammatoire
afin de quantifier l'infiltrat inflammatoire peritumoral, logiciel Scion image et logiciels FotoScan ont été utilisés pour la capture d'image et de morphométrie l'infiltrat inflammatoire. Tous les échantillons ont été capturés dans toute la mesure et les champs (grossissement 100 x) avec des zones enflammées autour de la tumeur ont été mesurés semi-automatique, avec sélection manuelle de la région enflammée et l'analyse calculée de la zone sélectionnée.
Basé sur l'analyse des chaque échantillon, l'arithmétique simple signifie la zone enflammée par champ microscopique ont été obtenus et les résultats sont exprimés en pourcentage de la superficie peritumoral enflammée par groupe tranches de
Analyse immunohistochimique avec 4 um d'épaisseur disposées sur des lames silanisées (3-aminopropyltriéthoxysilane de. Sigma Chemical Co, USA), ont été déparaffinées dans une chambre à 60 ° C et séquentiellement hydraté dans des passages à travers du xylol, de l'alcool absolu, 70% d'alcool et d'eau distillée
L'avidine-biotine peroxydase de procédé complexe anti peroxydase classique. a été utilisée dans l'étude des échantillons. Les échantillons ont été soumis à l'extraction de l'antigène à l'immersion des fragments dans 0,001 M de tampon citrate, pH 6,0, et le bloc de peroxydase avec 3% de peroxyde d'hydrogène et en outre incubées pendant 1 heure avec les anticorps primaires indiqués dans le tableau 1. Ensuite, elles ont été mises en incubation avec secondaires anticorps biotinylé pendant 30 minutes et soumis à une réaction avec le complexe avidine-biotine pendant 30 minutes. La coloration a été réalisée par l'addition du chromogène diaminobenzidine (DAB) de substrat pour environ 1 minute.Table 1 Anticorps pour l'analyse immunohistochimique Antibody Marquage Marque
Anti CD20
B Lymphocytes
lymphocytes T
Dako
Anti CD3
Dako
Anti CD8
T Regulatory lymphocytes
Dako
Anti CD4
Helper T lymphocytes
Dako
Anti CD15
neutrophiles
Dako
Anti CD68
macrophages
Dako
Anti Ki67
prolifération cellulaire
Dako
contrôle négatif de la réaction immunohistochimique a été réalisée en omettant l'incubation avec l'anticorps primaire pour certaines tranches. Les coupes ont été analysées et des photomicrographies ont été prises avec le système Microphot de Nikon (Tokyo, Japon). Le plus le nombre de cellules réactives pour chaque anticorps a été effectué en balayant la totalité de l'échantillon, avec un grossissement de 400 x, avec un nombre de cellules positives dans tous les domaines. Les résultats ont été obtenus à partir de la moyenne arithmétique simple et exprimés en pourcentage de cellules positives par champ microscopique L'analyse statistique de l'analyse statistique a été réalisée avec de Mann-Whitney avec une p & lt. niveau de signification de 0,05 afin d'évaluer relativement moyen des paramètres analysés dans les différents groupes de l'expérience. Les résultats de
L'analyse histopathologique des coupes colorées à l'hématoxyline et l'éosine (HE) et soumis à l'analyse morphométrique a révélé que le pourcentage moyen de la zone enflammée peritumoral par champ microscopique était de 24,7% dans le groupe 1 (échantillons de bien différenciés cellules squameuses carcinome de la muqueuse buccale) (figure 1a), 33,2% dans le groupe 2 (échantillons de modérément différencié cellules squameuses carcinome de l'oral muqueuse) (figure 1b), et de 42,6% dans le groupe 3 (échantillons de cellules non différenciées de carcinome squameux de la muqueuse buccale) (figure 1c). Après évaluation statistique, la quantité de zone enflammée peritumoral a montré une différence statistiquement significative lorsque les groupes 1 et 3 ont été comparés (p & lt; 0,05) (Figure 2). Figure 1 Morphologique classement des cellules squameuses de la muqueuse buccale. A: bien différencié carcinome épidermoïde de la muqueuse buccale. tache N = 10. HE. grossissement original 200 ×. B: Modérément différencié carcinome épidermoïde de la muqueuse buccale. tache N = 10. HE. grossissement 400 ×. C: indifférencié carcinome épidermoïde de la muqueuse buccale. tache N = 10. HE. grossissement original 400 ×.
Figure 2 Intensité de l'infiltrat inflammatoire peritumoral. Les valeurs sont exprimées dans l'arithmétique simple signifie sd ±. différence significative statistique a été observée en comparaison des groupes 1 et 3. p ≤ 0,05.
Dans tous les échantillons évalués dans cette étude, la prédominance quantitative de l'infiltrat inflammatoire était directement associé à des zones de plus grande invasion dans les tissus sous-jacents au parenchyme tumoral . The évaluation phénotypique de l'infiltrat peritumoral a été réalisée par l'identification de la positivité des cellules inflammatoires, caractérisée par la visualisation de la coloration intracellulaire brun clair sur un fond contre-colorées avec de l'hématoxyline dans chacune des réactions pour les anticorps utilisés.
Dans tous les groupes, une analyse de l'analyse immunohistochimique a montré la présence d'une réaction inflammatoire constituée essentiellement par des cellules inflammatoires mononucléaires. Les lymphocytes T ont fait la majeure partie de cette infiltrat inflammatoire, et parmi ces cellules, il y avait une prédominance de lymphocytes T CD8 par rapport aux lymphocytes T CD4 (figure 3a). Les lymphocytes B sont du second type de leucocyte plus visualisées (figure 3b), suivie par les macrophages (figure 3d) et de neutrophiles (figure 3C). Figure 3 immunohistochimie pour la caractérisation phénotypique de infiltrat inflammatoire peritumoral. A: les lymphocytes T (CD3 + cellules). grossissement 400 ×. B. A: les lymphocytes B (CD20 + cellules). grossissement original 400 × C. A: neutrophiles (cellules CD15 +). grossissement 400 × D. A: Macrophages (CD68 + cellules). . grossissement 400x
Il n'y avait pas de différence significative lorsque les types des trois groupes de leucocytes ont été comparés (p & gt; 0,05) (figure 4). Figure 4 profil cellulaire de l'infiltrat inflammatoire peritumoral. Les valeurs sont exprimées comme moyen arithmétique simple ± sd. Aucune différence statistiquement significative n'a été observée en comparaison des groupes. p ≤ 0,05. Dans les échantillons de
patients du groupe 1, l'analyse immunohistochimique de la protéine Ki-67 a révélé des cellules tumorales rares de immunoréactives (20% ± 3,2) (figure 5), tandis que dans des échantillons de patients du groupe 2, cellules avec positivité étaient plus abondantes (47% ± 6,3). Dans des échantillons de patients du groupe 3, les cellules marquées positivement représenté 60,3% ± 2,8 des cellules tumorales malignes. La comparaison entre les pourcentages de cellules tumorales positives pour Ki-67 expression par champ microscopique dans les échantillons de muqueuse buccale des trois groupes a montré des différences statistiquement significatives (p & lt; 0,05) (figure 6). Les tumeurs du groupe 3 ont montré une plus grande expression de la protéine Ki-67 par rapport aux tumeurs des groupes 1 et 2. La figure 5 immunohistochimique montrant l'expression de la protéine Ki67 dans des cellules tumorales malignes à partir d'échantillons de muqueuse buccale, des cellules de l'épithélium malpighien. A: carcinome bien différencié. grossissement 400 ×. B: carcinome Modérément différencié. grossissement 400 ×. C: carcinome indifférencié. grossissement original 400 ×.
Figure 6 Expression de la protéine Ki67 par groupe. Les valeurs sont exprimées dans l'arithmétique simple signifie sd ±. différence statistiquement significative n'a été observée en comparaison des groupes. Rapport de p ≤ 0,05.
carcinome des cellules squameuses est le type le plus répandu de cancer de la muqueuse buccale, et représente 91% des cas diagnostiqués de tumeurs malignes de la bouche [2, 6-8].
outre l'étiologie multifactorielle, impliquant des facteurs extrinsèques et intrinsèques, le statut immunitaire du patient est également considéré influencer le risque de cancer et de déterminer plusieurs aspects de sa progression [4, 9, 10]. Dans les années 1980, Scully C. (1983) avait déjà reconnu l'implication de la réponse immunitaire dans le développement de tumeurs malignes de la bouche, et a souligné que le futur traitement du cancer serait basé sur l'immunothérapie par immunomodulation.
Parmi les événements qui ont directement déterminer la progression clinique de la tumeur, ceux d'une importance primordiale comprennent des troubles du nombre de cellules résultant de dysfonctionnements du cycle mitotique et des défaillances possibles »dans l'évasion immunitaire de l'hôte des tumeurs - évaluée par l'intensité de l'infiltrat inflammatoire péritumorale, la composition des cellules inflammatoires, la production de cytokines par infiltrer les cellules, et la présence de l'angiogenèse [11, 12, 14, 20, 21].
Selon Costa L. et al., (2005) dans une étude clinique rétrospective avec 38 échantillons de carcinome orale des cellules squameuses, le TNM (mise en scène de la tumeur déterminée par la taille du cancer primaire et la présence de métastases) classification est en corrélation avec les caractéristiques histopathologiques principaux de la classification tumorale - degré de kératinisation, pléomorphisme nucléaire, et l'intensité de l'infiltration lymphocytaire peritumoral, et le lien entre ces données est importante pour déterminer le pronostic et le choix du traitement. le plus Ces résultats ont montré une corrélation inverse entre le degré de différenciation de la tumeur et la vitesse de prolifération cellulaire obtenue par l'expression de la protéine Ki67. Des résultats similaires à ceux trouvés dans cette étude sont également proposés par Costa et al., (2005) dans le carcinome oral, Glen et al., (2006) dans les lésions pancréatiques malignes, Deans et al., (2006) dans les cancers gastro-oesophagien et Cai et al., (2006) dans le carcinome à cellules transitionnelles de la vessie. Les tumeurs indifférenciées ont montré une expression accentuée de la protéine KI-67. Aguiar (1996) ont démontré que l'index mitotique augmente progressivement à partir de la muqueuse buccale normale peritumoral vers des zones tumorales, ainsi que dans les zones de plus grande invasion tissulaire [7]. . Pich et al, (2004) dans une étude rétrospective avec des lésions malignes de la cavité buccale, des glandes salivaires, du pharynx et du larynx, a observé que l'activité proliférative étudiée par différentes méthodes - telles que la détermination AgNORs Index et MIB-1 et Ki67 expression par immunohistochimie - est cliniquement pertinent et valable pour proposer le traitement et la définition de pronostic. Dans cet article, les caractéristiques histologiques présentées par la tumeur maligne ont été associés à l'agressivité clinique par l'analyse de la qualité maligne liée à des déterminants possibles de lésion pronostic -. Profil immunologique local et la prolifération des cellules malignes
Selon les résultats obtenus à partir de morphométrie de l'infiltrat peritumoral, le pourcentage moyen de la zone enflammée par champ microscopique était plus élevée dans les tumeurs indifférenciées (groupe 3) par rapport à la moyenne des échantillons de tumeur modérément différenciés (Groupe 2), suivi par les échantillons de tumeurs bien différenciées ( Groupe 1). Dans l'évaluation de ces données, nous avons constaté qu'il existe une corrélation entre le plus haut degré de malignité et l'intensité inflammatoire le plus grand.
La caractérisation de la composition infiltrat peritumoral n'a pas révélé une différence entre les types des trois groupes leucocytaires, déterminés à partir de leurs qualités, mais il est intéressant, les quantités de chaque type de cellule étaient également proportionnelle dans ces groupes. Nous notons que, dans tous les échantillons, le nombre total de lymphocytes T et les macrophages prédominait sur la quantification des plasmocytes, caractérisant la réaction locale du patient, comme une réponse immunitaire principalement du type de cellule.
En plus de l'évaluation de l'intensité de l'infiltrat inflammatoire péritumorale et ses composants cellulaires, certains des déterminants majeurs de l'agressivité tumorale et les prédicteurs possibles de pronostic sont des altérations de la prolifération cellulaire, à savoir, des anomalies du nombre de cellules résultant de dysfonctionnements du cycle mitotique. Cette activité proliférative néoplasiques peut être déterminée par le taux de croissance au moyen d'expression de Ki67 [18-21, 28-31].
La comparaison entre les pourcentages des cellules tumorales positives pour l'expression de Ki-67 par champ microscopique dans le des échantillons de muqueuse buccale des trois groupes ont montré des différences statistiquement significatives. Les échantillons provenant du groupe 3 (non différencié des cellules de l'épithélium malpighien de la muqueuse buccale) fait preuve d'une plus grande expression de cellules marquées positivement, puis les échantillons des patients du groupe 2 (modérément différencié des cellules de l'épithélium malpighien de la muqueuse buccale), et du groupe 1 ( bien différencié cellules squameuses carcinome de la muqueuse buccale).
Quant à la caractérisation des leucocytes, SICA et al., (2006) a rapporté des preuves associées à la prédominance de la population macrophage dans l'infiltrat peritumoral et une plus grande promotion de l'angiogenèse tumorale, attribuant à ces cellules un rôle pro-tumorale, et par conséquent un mauvais pronostic.
dans le carcinome des échantillons étudiés par voie orale, l'évaluation des cellules inflammatoires péritumoraux a démontré l'importance de l'immunité cellulaire dans la réponse antinéoplasique locale due à la présence d'un population majoritairement composée de lymphocytes T et les macrophages, mais avec aucune différence significative quant à la composition de infiltrat selon le grade histologique.
récemment, dans des échantillons de cancer du sein invasif, nous avons étudié la corrélation possible entre l'intensité de l'infiltrat inflammatoire peritumoral et le degré de différenciation de la tumeur [32]. Nous rappelons que, lorsque nous avons analysé les patients atteints de tumeurs malignes de la même année, ceux qui ont progressé de manière satisfaisante ont montré une réponse inflammatoire peritumoral plus intense, tandis que ceux qui ont connu des rechutes tumorales et la dissémination métastatique a développé une réponse inflammatoire peritumoral moins intense.
Conclusion
Dans cette étude, le parallèle entre l'intensité de l'inflammation et le pronostic du patient n'a pas encore été totalement clarifiée, et des recherches supplémentaires sont nécessaires. La distribution des échantillons de carcinome de la muqueuse buccale en groupes a été faite selon la classification histologique. Les résultats suggèrent une corrélation positive entre l'intensité de la réponse inflammatoire et le degré de différenciation de la tumeur. Par conséquent, les tumeurs indifférenciées présentent un plus grand développement du processus inflammatoire peritumoral par rapport à modérément différencié et les tumeurs bien différenciées. Néanmoins, afin de définir cette variable inflammatoire intensité de la réponse en tant que facteur de pronostic dans le cancer buccal, d'autres études doivent être réalisées de telle sorte que l'intensité de la réponse locale et la prolifération des cellules malignes dans les tumeurs de la même classification histologique associé aux patients ' les progrès cliniques peuvent être évalués.
Enfin, les résultats présentés dans cette étude suggèrent que la réponse immunitaire cellulaire est le mécanisme principal de la défense dans le carcinome des cellules squameuses de la muqueuse orale, exprimée par le grand nombre de lymphocytes T et les macrophages.
Nous soulignent en outre que Ki-67 expression est liée à l'index mitotique et, par conséquent, à la prolifération cellulaire et classement maligne du néoplasme.
Remerciements
Rede mineira de bioterismo. 2824/05 - FAPEMIG; Rede mineira "TOXIFAR". 2827/05 - FAPEMIG; Les auteurs de CNPQ des déclarations de fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs «fichiers d'origine soumis pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12903_2008_100_MOESM2_ESM.pdf Auteurs 12903_2008_100_MOESM1_ESM.pdf Auteurs fichier d'origine pour la figure 2 12903_2008_100_MOESM3_ESM.pdf Auteurs 'fichier d'origine pour la figure 3 12903_2008_100_MOESM4_ESM.pdf Auteurs fichier d'origine pour la figure 4 fichier original 12903_2008_100_MOESM5_ESM.pdf Auteurs »pour la figure 5 12903_2008_100_MOESM6_ESM.pdf auteurs fichier d'origine pour la figure 6 intérêts concurrents
les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts.
auteurs contributions
FLDV et BJV ont participé à la destinée de l'étude, l'étude immunohistochimique et étude histopathologique . FMA et MAMG ont participé à la conception et la coordination.
