CONTEXTE
Les plaquettes sont de petits anucléées organismes granulés qui adhèrent, d'agrégats et forment un bouchon de plaquettes au niveau des sites de lésion vasculaire pour prévenir la perte de sang. la concentration de plaquettes dans le sang est d'environ 300 000 /ul, et ils ont habituellement une demi-vie de 4 jours. Ils sont formés à partir de cellules souches géantes engagées appelées mégacaryocytes comme ils pincer des morceaux de leur cytoplasme et les extruder dans la circulation sanguine. Les plaquettes ont microtubules autour de leur périphérie et une membrane largement invaginé en contact avec le liquide extracellulaire.
Leurs membranes contiennent des récepteurs pour un certain nombre de substances, y compris le collagène, l'adénosine diphosphate (ADP), le facteur de von Willebrand et le fibrinogène. Certains des contenus de leur cytoplasme ont leur origine dans les mégacaryocytes, certains sont synthétisées en interne, et certains sont stockés après endocytose. Parmi les organelles intracellulaires existe deux types de granulés:
1) des granules denses, qui contiennent les substances non protéiniques, qui sont sécrétés en réponse à l'activation des plaquettes, y compris la sérotonine, l'ADP /ATP, l'histamine, la dopamine et catecholamines.1
2) * -granules, qui contiennent sécrétées proteins.1-3 Parmi ces protéines stockées sont des facteurs mitogéniques et angiogéniques croissance qui sont essentiels pour la régénération des tissus durs et mous et de réparation. Marx4 d'Amérique du Nord et Anitua et al.1 de l'Europe ont montré que la plus grande densité osseuse antérieure et on obtient des sites chirurgicaux traités par le PRP par rapport aux sites de contrôle. Les facteurs de croissance dans les plaquettes sont le facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), le facteur de croissance transformant (TGF-ß), facteur de croissance vasculaire endothélial (VEGF), facteur de croissance basique des fibroblastes (bFGF), le dérivé de plaquettes du facteur de croissance épidermique (PDEGF) et l'insuline -comme le facteur de croissance 1 (IGF-1). Ceux-ci sont diversement impliqués dans la stimulation de la chimiotaxie, la prolifération cellulaire et la maturation dans la plaie healing.1
Dans le début des années 1990 plasma riche en plaquettes (PRP) a été présenté comme un biomaterial.5,6 autologue Une variété de machines ont été adaptées pour obtenir la séparation centrifuge optimale de PRP pour une utilisation thérapeutique à partir de petites quantités de citraté blood.7-13
En 2002, Gonshor9 a développé une procédure caractérisée par une méthode de double rotation de centrifugation en utilisant une centrifugeuse non-automatisée pour séquestrer et concentrer les plaquettes à un niveau de valeurs de sang total quatre à huit fois référence. Les concentrations en produit technique de PDGF-AB au-dessus de 500% et le TGF, est supérieure à 800%. Ses essais ont montré que le rendement en plaquettes 85,1% sont restés au repos pendant toute la procédure, le maintien de leur intégrité et leur viabilité, sans déclenchement intempestif. thrombine bovine 5000 unités et une solution de chlorure de calcium à 10% ont été utilisés pour l'activation des plaquettes, créant un gel PRP.
En 2005, Marx et Garg15 publié un excellent manuel sur "Dental et Applications crâniofaciales de Platelet-Rich Plasma". Dans ce texte, les auteurs affirment que «les facteurs de croissance ont émergé comme le« Saint Graal »dans la guérison des plaies" et ils projeté lyophilisé préparation bovine de la thrombine comme la norme pour initier la coagulation du PRP et l'activation des plaquettes.
Cependant, une an plus tôt en 2004, la thrombine bovine est devenu indisponible au Canada. Cet événement a précipité une recherche d'une alternative à la thrombine bovine. thrombine autologue et /ou de la thrombine humaine recombinante ont été les choix logiques. La nécessité est donc devenue la mère de l'invention, et une recherche a été lancé pour une alternative.
SUJETS
Cette étude se composait de 21 patients qui avaient besoin de placements d'implants et /ou une greffe osseuse. Sur les 21 patients 5 nécessaire l'implantation immédiate avec une greffe osseuse, 8 pose de l'implant nécessaire seulement, et 8 os nécessaire greffage seulement.
MATERIELS ET METHODES
Matériaux
1) usage général centrifugeuse (non automatisée) avec un rotor à six positions, ou une centrifugeuse automatisée.
2) 4 vacutainers jaune-top -10ml contenant du citrate d'acide dextrose (ACD-a) solution 4) 21 -.. aiguille papillon de calibre 19 et une aiguille de calibre papillon 5) 21/2 "(63mm) aiguille émoussée . 6) 3 "(76mm) aiguille émoussée. 7) Solution 10% de chlorure de calcium. 8) 6- 5ml seringues stériles. 9) 6 -... 1ml seringues stériles 10) de récipient stérile pour PRP 11) de récipient stérile pour PPP 12) récipient stérile pour le sérum 13) 4 plats Däppen stériles. 14) de l'emballage de la membrane de collagène stérile. (Colla Bande de bande ou Neo) 15) porte-tube d'essai. La collecte de sang et de traitement Les tubes de sang ont été prélevés dans la région du coude avec un calibre 21 ou 19 aiguille de calibre papillon et recueilli en jaune-top tubes de collecte de sang 4-10ml contenant du citrate d'acide dextrose (ACD-A) solution. Deux tubes de sang supplémentaires ont été recueillies comme décrit ci-dessus, sauf en 10ml rouge-top vacutainers sans anticoagulant. (Chacun des deux rouge-top tubes a été marquée par un X) (Fig. 1). Les quatre jaune-top tubes de sang ont été traités pour produire PRP utilisant le Gonshor Procedure9 (fig. 2-4). Les tubes à deux RedTop de sang ont été mis de côté à coaguler. Utilisation de la centrifugeuse à usage général décrit dans la publication de Gonshor 9, les deux rouge-top tubes avec du sang coagulé ont été centrifugés à 2000 rpm pendant 10 minutes le long avec les quatre rouge-top tubes avec du plasma pour le deuxième tour (Fig. 3). Le sérum a été soigneusement éliminé de chaque tube avec une seringue stérile et mis en commun, dans un récipient stérile (fig. 5). Les récipients contenant la PrP (4.5mls), PPP (6.5mls) et le sérum (2,5 ml) ont été couvertes et placées dans la salle opératoire chirurgical avec un flacon de 10% de chlorure de calcium, plats Däppen stériles de 5 ml et des seringues stériles de 1 ml (fig . 6). aCTIVATION dE PRP afin d'activer le PRP pour obtenir un gel plasma riche en plaquettes, 1ml de PRP a été distribué dans chacun des quatre plats Däppen (fig. 7). 10% de chlorure de calcium a été ajouté à chaque dappen dans un rapport de 1 CaCl2: 5 en volume de PRP (0,2 ml de CaCl2: 1 ml de PRP). Le sérum a été ensuite ajouté au PRP calcifié dans chaque dappen dans un rapport de 1 sérum: 2 en volume de PRP (0,5 ml de sérum: 1 ml de PRP). Le complexe a été laissé au repos à la température ambiante et le temps de formation de gel PRP a été enregistrée (Fig. 8). Le processus d'activation ci-dessus a également été réalisé en aspirant les quantités appropriées de PRP entartrée et le sérum dans un 5ml. seringue. Le complexe activé pourrait alors être envoyé par la seringue à un site ciblé. Lors de la greffe osseuse a été réalisée, l'os autogène, une allogreffe, une xénogreffe ou une greffe composite a été ajouté au PRP entartrée, puis le sérum a été ajouté pour produire un gel de RLP en présence du matériau de greffe (figures 9 & amp;. 10). Le temps de formation du gel PRP a été enregistrée et le complexe de type gel greffé PRP a ensuite été placé in situ. Dans tous les cas où les membranes résorbables ont été utilisées, pour la fourniture de facteurs de croissance in situ, occlusivité cellulaire et /ou la régénération tissulaire guidée, les membranes ont été plongées dans du PRP calcifiée, activé avec du sérum alors immédiatement placé in situ entre l'os et le tissu mou avant gel de PRP était formé. Les temps de formation PRP Gel in situ ont été enregistrées. Lors de plasma pauvre en plaquettes (PPP) a été utilisé comme matériau d'étanchéité de tissu, il a également été activé avec du sérum et de 10% de chlorure de calcium. Après avoir distribué 1 ml de PPP dans un plat de chlorure dappen de calcium a été ajouté dans un rapport de 1 CaCl2: 2,5 PPP en volume (0,4 ml de CaCl2: 1 ml de PPP). Le sérum a été ensuite ajouté dans un rapport de 1 sérum: 1 en volume de PPP (1,0 ml de sérum: 1 ml de PPP). Le complexe a été laissé au repos à température ambiante pendant 10 minutes, puis utilisés pour sceller les points de ligne d'incision et la suture chirurgicale entrée (Fig. 11). Il a été laissé au repos pendant 5 minutes in situ. Ce processus a également été réalisé en aspirant les volumes respectifs de calcifiée PPP, 2 et sérum dans une seringue de 5 ml et on laisse reposer pendant 10 minutes avant utilisation. RÉSULTATS Le volume de concentré PRP obtenu est élevé à une moyenne de 1,1 ml /tube. Cela se compare favorablement avec le results.9 de Gonshor Le volume total de PRP obtenu à partir du 4 citraté tubes de sang était 4.5mls. Le volume de sérum obtenu à partir des 2 tubes de sang entier coagulé après centrifugation était de 2,5 ml. Le volume de PPP obtenu a été de 6,5 ml. Pour la formation d'un gel de plasma riche en plaquettes in vitro (fig. 8), l'intervalle de temps est de 5-10 minutes. La plage était 30-60 secondes in situ. Le traitement du sang complet a pris environ 30 minutes. Le PRP a été rapidement un gel formé en présence d'une autogreffe (fig. 9) et allogreffe (fig. 10). Un caillot PPP a été formé en 10 minutes lorsque le sérum a été ajouté à calcifiée PPP (Fig. 11). Cela a été utilisé comme un produit d'étanchéité de tissus autologues pour les points de la ligne d'incision et d'entrée de suture chirurgicale. DISCUSSION avantages physiologiques de PRP Afin de récolter les bénéfices physiologiques du PRP il est très important que les facteurs de croissance libérés par les plaquettes viables, car il est au cours de l'acte de exocytose des granules que la plaquette complète structure.2,3,9 tertiaire de la protéine de facteur de croissance de la structure tertiaire, avec sa conformation unique est le plus biologiquement la structure active. La conformation moléculaire permet à la protéine de présenter de manière appropriée son site actif à son substrat spécifique afin que la catalyse peut procéder. Anitua et al1 ont énuméré un certain nombre de situations où ont guidé la sécrétion de produits plaquettaires autologues peuvent favoriser la guérison et la réparation des plaies. Les situations sont: la chirurgie maxillo-faciale et des greffes osseuses, chirurgie d'implant dentaire, la chirurgie orthopédique et la reconstruction osseuse, plastique faciale et chirurgie esthétique, ulcères de la peau, des yeux chirurgie rétinienne trou réparation, la médecine du sport-cartilage et la réparation du tendon. À ce jour, l'utilisation la plus répandue de PRP est en dentisterie, 4,5,11,12,15 où divers auteurs ont montré que l'administration de PRP dans une variété de sites chirurgicaux ont rapidement précipité à la fois la régénération des tissus durs et mous et repair.1 , 5-7,15,16 d'autres prétendent que l'utilisation de plaquettes autologues peut influer positivement sur le résultat lorsque autogreffes, allogreffes et xénogreffes sont utilisés pour la crête alvéolaire augmentation procedures.15,16 la régénération osseuse nécessite le recrutement , la prolifération et la maturation des ostéoblastes qui sont dérivées de souches mésenchymateuses cells17,18 et une étude suggère que les produits de libération plaquettaire favorisent également la migration des souches mésenchymateuses cells.19 Gonshor9 indique que la combinaison des facteurs de croissance PDGF et TGF a été montré pour accélérer la réparation des os, 20 promouvoir la prolifération des fibroblastes, augmenter la vascularisation des tissus, le taux de formation de collagène, 21,22 mitose des cellules souches mésenchymateuses, cellules endothéliales, ainsi que les ostéoblastes, jouant un rôle clé dans le taux et l'étendue de la formation osseuse. une série de 20 patients qui subissent des extractions multiples, un caillot de PRP a été déposé dans les douilles d'un côté de la bouche tandis que l'autre a servi de contrôle. Les biopsies osseuses ont été prélevés dans des sites d'extraction entre 10 et 16 semaines. Dans la plupart des patients atteints de PRP caillot, la régénération osseuse était vaste et le tissu osseux était compact avec trabécules bien organisé. En revanche, dans le groupe de contrôle de la cavité a été principalement rempli de tissue.1 conjonctifs En utilisant des modèles animaux certains auteurs ont montré que, comme chez les humains, en ajoutant PRP-caillot implants en titane autour rugueuses au moment de leur implantation dans goats23 et minipigs24 améliorée l'étendue et la qualité de la régénération osseuse autour des implants. Quel est initier le caillot? il est un fait physiologique bien connu que le sang commence à coaguler quand il est exposé au collagène dans vivo. Le fait qu'un morceau de collagène a réduit le temps d'activation est la preuve que la surface appropriée a été fournie pour l'initiation de la cascade de coagulation. Les précurseurs et les enzymes du système de coagulation doivent donc être présents dans le sérum utilisé ainsi initier la cascade de la coagulation. La thrombine est habituellement pas présente dans le sérum après la coagulation est terminée depuis sa production est arrêtée par l'antithrombine III, l'inhibition des facteurs 1XA, Xa, Xla et Xlla avec l'aide de l'héparine cofacteur, et ce qui reste est complexée avec la thrombomoduline pour fibrinolyse le aide de la protéine C, protéine S, activateur tissulaire du plasminogène (tPA), l'activateur du plasminogène urokinase (uPA) plasminogène et la plasmine. la recherche doit être fait sur la quantification des composants et des enzymes du sérum et précurseurs de coagulation de leur la stabilité dans diverses conditions. D'autres études doivent également être menées sur la stabilité des facteurs de croissance après avoir été libérés des plaquettes. IN SITU RÉSULTATS Les résultats obtenus in situ sont similaires aux résultats obtenus par Anitua et al1 quand ils irrigués surfaces péri-implantaires avec PRP calcifiée mélangé avec le surnageant extrudé à partir d'un caillot rétracté immédiatement après la pose des implants. IN vITRO RÉSULTATS Les temps plus coagulation obtenus in vitro pourrait être une indication que les concentrations de précurseurs et enzymes de coagulation peuvent être relativement faibles dans le sérum et il faut du temps pour les réactions de se développer. Cependant, la coagulation subséquente une fois l'activation a été initiée déroulée rapidement. Ceci est cohérent avec la autocrine /paracrine de la nature de la communication intercellulaire par l'intermédiaire de médiateurs chimiques lors de l'activation plaquettaire. Anitua et al1 indique que l'administration des plaquettes activées dans un caillot de fibrine ou de colle de fibrine fournit un support adhésif qui peut limiter la sécrétion à un site choisi, et la présentation des facteurs de croissance attachés aux plaquettes et /ou la fibrine peut entraîner une activité accrue sur les protéines recombinantes . Extended dans les temps d'activation in vitro pourrait être avantageux lorsque os autogène, allogreffes et xénogreffes doivent être mélangés avec PRP avant le placement in situ pour les greffes faîtage d'augmentation, les greffes d'entretien de la crête, les greffes sinus d'élévation, la réparation de la membrane de Schneider, ainsi que la guérison des tissus mous rapide et maturation. CONCLUSION la procédure présentée ici montre comment la thrombine autologue dans le sérum du patient peut être utilisé pour activer les plaquettes. Il devrait fournir une alternative sûre pour un usage thérapeutique. La disponibilité immédiate de PRPgel autologues avec le facteur de croissance de libération et de la colle de fibrine autologue comme un scellant tissulaire indique que la thrombine autologue dans le sérum du patient peut activer efficacement les plaquettes et fournir ainsi une alternative à continuer la stimulation de la régénération tissulaire, de la réparation et de la maturation en médecine dentaire et en médecine . Attention * Les niveaux de facteur de croissance, la numération plaquettaire et les temps d'activation varient d'un individu à ainsi que l'âge et l'état de santé. * Le vieillissement de sérum et PRP peut affecter les temps d'activation puisque les protéines sont très labiles in vitro. * Lorsque cette procédure est utilisée, des mesures devraient être prises pour veiller à ce que l'environnement au maximum stérile est prévu pour la collecte de sang, le traitement PRP et activation. Dr. Smith a été en pratique privée depuis 25 ans à New Westminster, en Colombie-Britannique. En 2004, il a inventé une procédure spécifique au patient pour l'activation de la thrombine autologue de plaquettes dans le plasma riche en plaquettes (PRP). Santé bucco-dentaire se félicite de cet article original. Je tiens à remercier le Dr Aron Gonshor de Montréal, le Dr Ross MacGillivray, le Dr Ed Pryzdial, et le Dr Dana Devine du Centre de recherche sur le sang, Université de la Colombie-Britannique, pour leur discussions inestimables. Divulgation des L'auteur prétend avoir aucun intérêt financier dans une société ou un des produits mentionnés dans le présent article. REFERENCES 1.Eduardo Anitua, Isabel Andia, Bruno Ardanza, Paquita Nurden (3,4), Alan t. Nurden. les plaquettes autologues en tant que source de protéines pour la cicatrisation et la régénération tissulaire. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2004; 91: 4-15 2.Rendu F, Brohard-Bohn B. La plaquette réaction de libération:. 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