épidermoïde
Background
Résumé Afin de prédire le pronostic à long terme et de définir les modalités de traitement individuels pour les patients par voie orale carcinome spinocellulaire (CCCO), des biomarqueurs tumoraux plus fiables sont nécessaires au cours de la période de pré-traitement de retraitement. La présente étude visait à identifier des marqueurs pronostiques de tumeurs immunohistochimique plus fiables dans les échantillons de biopsie prétraitement des patients atteints de CCCO.
Méthodes
Nous avons sélectionné 57 patients qui ont été diagnostiqués avec primaire CCCO par l'analyse histopathologique. spécimens Prétraitement de biopsie ont été analysées par immunohistochimie pour le facteur de transcription NANOG, souches du cancer marqueur cellulaire CD44, et de protéines de tumeur mutant 53 (p53 mutant). Les modèles de immunocoloration ont été évalués pour leur association avec les caractéristiques clinico de CCCO et les taux de survie globale. Tumeur stade tardif de
Résultats, positif noeud cou métastase, et la différenciation de haute qualité ont été associés à significativement plus faibles taux de survie. Une expression accrue de NANOG et mutant p53 positivité étaient significativement associés à des tumeurs cliniquement stade avancé, positif métastases des ganglions du cou, histologiquement tumeurs de haut grade, et de faibles taux de survie globale. ont été liés à des taux de survie significativement plus bas que ceux à la fois avec une faible expression de NANOG et p53 négativité OSCCs avec co-détection de forte NANOG et p53 mutant. L'expression accrue de CD44 avait une corrélation limitée avec des caractéristiques clinico défavorables.
Conclusion
haute expression de NANOG et d'expression positive de p53 mutante dans les échantillons de biopsie prétraitement des patients atteints de CCCO ont été associés à faible taux de survie et les caractéristiques clinico défavorables. Ces résultats démontrent que NANOG, le mutant p53 et CD44 peuvent être utilisés comme marqueurs immunohistochimie dans des échantillons de pré-traitement de CCCO. En particulier, l'analyse de co-expression de NANOG et p53 mutant devrait être hautement disponible comme un outil pour le pronostic et la sélection des modalités de traitement individuels.
Mots-clés
marqueurs tumoraux de carcinome à cellules squameuses orales immunohistochimie NANOG Mutant p53 Contexte
Oral carcinome spinocellulaire (CCCO) est une tumeur maligne commune de la région de la tête et du cou; Cependant, les patients atteints CCCO ont un taux de survie à 5 ans de moins de 50%. Les systèmes traditionnels TNM de stadification et de classement histopathologique ne permettent pas aux médecins de prédire avec précision l'agressivité ou sélectionnez traitement des modalités d'une tumeur sur une base individuelle [1]. Par conséquent, la recherche est en cours pour étudier les marqueurs tumoraux pronostiques plus efficaces et définitives pour les patients avec CCCO [2, 3]. Comme la cellule souche du cancer (SCC) hypothèse est devenue l'une des théories prédominantes expliquant la capacité de la tumeur initiatrice et l'hétérogénéité des cellules tumorales, des marqueurs de cellules différentes souches ont été étudiées afin de déterminer leur corrélation avec les caractéristiques de la tumeur clinicopathologiques et le pronostic à long terme [4 -8].
la transcription précoce des facteurs NANOG, OCT4 et SOX2, qui jouent un rôle essentiel dans le maintien de la pluripotence et l'auto-renouvellement capacité dans les cellules souches embryonnaires et adultes, ont également été signalés comme des facteurs clés de la réglementation dans le CSCs de tête et du cou carcinome épidermoïde (CETC) [7, 8]. Une expression élevée de NANOG et OCT4 a été corrélée positivement avec les carcinomes de haut grade histologiquement et cliniquement mauvais pronostic [7-10]. CD44 a été le premier marqueur du SCC décrit dans une tumeur maligne solide [5], et une fréquence élevée de cellules positives CD44 dans CETC est fortement corrélée à la récurrence et l'agressivité de la tumeur [11]. 53 protéine de tumeur (p53) est considéré comme un biomarqueur tumoral traditionnelle dans le carcinome spinocellulaire (CSC); cependant, son utilité comme indicateur pronostique reste incertaine [1]. De type sauvage, la protéine p53 est à peine détectable dans les tissus normaux en raison de sa courte demi-vie d'environ 20 min. [12] Cependant, le gène suppresseur de tumeur p53 est muté dans environ 40 à 60% des cas de CCCO, ce mutant p53 joue un rôle important dans le développement et la progression tumorale [12, 13]. Fait intéressant, la protéine p53 mutante est habituellement détectable par immunohistochimie (IHC) [14, 15].
Afin de prédire le pronostic à long terme et de définir les modalités de traitement individuels pour les patients atteints de CCCO, les biomarqueurs de tumeur plus fiables (y compris les marqueurs pronostiques immunohistochimie) sont nécessaires pendant la période pré-traitement de bilan. La présente étude visait à étudier l'expression des différents marqueurs tumoraux par IHC, y compris les cellules souches et les biomarqueurs liés à la tumeur, d'identifier des marqueurs pronostiques plus fiables dans CCCO échantillons de biopsie prélevés avant le traitement du cancer. Dans la présente étude, nous avons observé une corrélation positive entre les caractéristiques clinico de OSCCs et les profils d'expression immunohistochimique de NANOG, p53 mutant humain, et CD44. En outre, les intensités de immunocoloration de ces protéines marqueurs (de NANOG et p53 mutant) étaient positivement corrélés avec les taux de survie globale des patients atteints de CCCO.
Méthodes
Patients
Entre 2004 et 2014, un total de 92 patients ont été diagnostiqué avec CCCO au Département de chirurgie buccale et maxillo-faciale de l'hôpital universitaire de Gyeongsang national (GNUH) basée sur l'analyse histopathologique des échantillons de biopsies recueillies avant le traitement du cancer. Parmi eux, 57 patients atteints de CCCO primaire (excluant les patients atteints de métastases et des cancers récurrents, 36 hommes et 21 femmes) ont été sélectionnés pour la présente étude. Les critères d'inclusion étaient les patients qui ont accepté de participer à l'étude, achevée au moins 3 mois de suivi après avoir subi un prétraitement biopsie, et avait le volume de tissu suffisante dans l'échantillon de biopsie prétraitement pour effectuer la coloration immunohistochimique. Les dossiers médicaux des patients sélectionnés ont été analysés rétrospectivement. Le consentement éclairé pour l'utilisation de leurs échantillons de tissus a été obtenu à partir de tous les patients, et cette étude a été approuvée par le comité d'éthique de la recherche clinique à GNUH (GNUH IRB-2012-09-004-002). IHC a été réalisée sur des échantillons pré-traitement des biopsies de 57 patients, qui ont été obtenus à partir de la périphérie de la marge de la tumeur avec une longueur minimale de 5 mm et d'une largeur minimale et une profondeur de 2 mm, pour analyser la relation entre les profils d'expression des protéines et des caractéristiques de la tumeur clinicopathological . La durée de suivi pour les 57 patients variait de 3 à 127 mois, avec une moyenne de 35,9 mois. Les patients ont été évalués cliniquement selon le système TNM de classification élaboré par le American Joint Committee on Cancer (7
e édition, 2010) pour le stade de la tumeur et le cou noeud métastases, et les taux de survie globale ont également été déterminés. Les biopsies ont été histopathologique classés, et les tumeurs ont été classées ainsi, modérément ou peu différencié selon la classification OMS des tumeurs [16].
analyse immunohistochimique de biopsies
biopsies ont été fixés à 10% du formol tamponné neutre pendant 24 h, noyées dans un bloc de paraffine, coupées en sections de 4 pm et montés sur SuperfrostPlus microscope diapositives (Fisher Scientific, Rochester, NY, USA). Les sections ont été maintenues à température ambiante pendant 12 h. Après hydratation, IHC pour NANOG, CD44, et p53 mutante a été réalisée en utilisant un immunostainer automatisé (BenchMark XT, Medical System Ventana Inc., Tucson, AZ, USA), et la visualisation a été effectuée en utilisant le kit Ultraview DAB (Medical System Ventana Inc. ) selon le protocole du fabricant. Immunocoloration pour les trois protéines marqueurs, nous avons utilisé des anticorps monoclonaux de lapin (Abcam ™, Cambridge, UK). Les numéros des taux de dilution et le lot des anticorps primaires sont résumés dans le tableau 1. En bref, des sections ont été déparaffinées en utilisant une solution de préparation EZ; puis standard CC1 (pH 8,4 tampon contenait du Tris /borate /EDTA) a été appliqué pour la récupération de l'antigène pendant 60 min à 100 ° C. Les lames ont été incubées à 37 ° C pendant 4 minutes avec un inhibiteur de DAB (3% de H 2 O 2) pour bloquer l'activité de peroxydase endogène. Ensuite, les lames ont été incubées avec l'anticorps primaire à 37 ° C pendant 32 min, suivi d'une incubation avec l'anticorps secondaire (Universal multimère HRP) pendant 8 min à 37 ° C. Les lames ont été traitées avec le DAB + H 2 O 2 substrat pendant 8 min, suivi par l'hématoxyline II et d'un réactif de bleuissement à 37 ° C pendant une contre-coloration nucléaire. Pour les contrôles négatifs, seule incubation avec l'anticorps secondaire a été réalisée, en omettant toute l'incubation avec un anticorps primaire, dans les sections à partir des mêmes échantillons dans les mêmes conditions. En outre, les tissus humains de la vessie et le carcinome de la peau urinaires embryonnaires ont été utilisés comme témoins positifs pour NANOG, CD44, et p53 mutante, respectivement, selon le fabricant d'anticorps recommendations.Table 1 Résumé des caractéristiques clinico-pathologiques de OSCCs et IHC motifs d'expression du NANOG, CD44 et p53 mutant
NANOG
CD44
mutant p53
total No.
+++
++
+&–
++
+
–
+
–
No. de cases
57
21
18
18
28
21
8
34
23
Tumor Sites
Gingiva
27
13
8
6
10
11
6
13
14
Cheek
4
0
3
1
2
2
0
3
1
Palate
10
4
3
3
9
1
0
10
0
Tongue
9
0
2
7
2
5
2
4
5
FOM
7
4
2
1
5
2
0
4
3
Tumor stade
I + II
24
6
4
14
10
9
5
11
13
III + IV
33
15
14
4
18
12
3
23
10
Neck noeud
N0
34
9
10
15
13
15
6
16
18
N+
23
12
8
3
15
6
2
18
5
Histo qualité
Bien
22
4
4
14
9
9
4
6
16
Mod + Poor
35
17
14
4
19
12
4
28
7
Antibody
Taux de dilution
1: 250
1: 100
1: 200
Source (Lot n °)
Abcam ™ (ab109250)
Abcam ™ (ab51037)
Abcam ™ (ab32049)
abréviations: FOM
étage de bouche, noeud du cou négatif N0 de, N +
noeud du cou positif, bien
bien différencié CCCO, Mod + Pauvre
modérément et CCCO
tranches de tissus peu différenciées étaient semi-quantitativement analysé pour l'anticorps dépôt dans les composants cellulaires par deux pathologistes qui ont été aveuglés à l'information de l'étude. Basé sur une méthode précédemment avec une modification [10], immunocoloration positive de NANOG et CD44 a été marqué par la combinaison de l'intensité (0, coloration négative; 1, faible coloration; 2, coloration modérée et 3, une forte coloration) et le pourcentage cellules de colorées positivement tumorales dans des domaines de haute puissance (0, négatif; 1, & lt; 25%; 2, 25-50%; 3, 51-75%, et 4, & gt; 75%). La somme de l'intensité de la coloration et le pourcentage des scores de cellules tumorales positive a été notée comme suit: +++ (fort, 6-7); ++ (Modérée, 4-5); + (Faible, 2-3); et - (négatif, 0-1). Le profil d'expression de p53 mutant a été également marqué par la combinaison d'intensité de la coloration et le pourcentage de cellules tumorales positives et simplement classé comme + pour le positif (somme du score dépassé 3) et - pour le négatif (2 ou moins; expression négative ou faible l'expression dans moins de 25% des cellules), conformément aux rapports antérieurs [10, 17, 18]. Au moins trois champs différents sous un fort grossissement (× 400) par lame ont été analysés pour l'intensité immunocoloration. Un résumé des résultats de coloration immunohistochimique peut être trouvé dans le tableau 1.
analyse statistique et de l'analyse de la survie globale
La relation entre les intensités d'expression de NANOG, p53 mutant, et CD44 dans des échantillons CCCO a été statistiquement évaluées à l'aide du chi- squared test. De même, la corrélation entre les profils d'expression des protéines et des caractéristiques clinico de CCCO, y compris le stade tumoral, le cou noeud métastases, et le grade histologique, a également été analysée en utilisant le test du chi carré. L'analyse de la survie globale a été réalisée selon la méthode de Kaplan-Meier, et les données ont été comparées en utilisant un test log-rank pour les 57 spécimens CCCO. Tout d'abord, l'analyse de la survie globale a été réalisée en fonction de la modalité de traitement, ainsi que les caractéristiques de la tumeur clinicopathologiques, y compris le stade tumoral, le cou noeud métastases, et le grade histologique (Fig. 5a-d). Dans la présente étude, les patients ont été divisés selon les modalités de traitement en trois groupes: la chirurgie seule (Surg), la chirurgie associée à une radiothérapie adjuvante (Surg + RT, y compris chimioradiothérapie), et la radiothérapie seule (RT). La plupart des patients du groupe RT ont subi une radiothérapie palliative parce qu'ils ont refusé de se soumettre à une intervention chirurgicale ou leurs tumeurs étaient inopérantes. En second lieu, l'analyse de survie a été effectuée en fonction des intensités d'immunocoloration de NANOG, le mutant p53 et CD44 dans des échantillons de biopsie pré-traitement (fig. 5e-h). la survie univariée et multivariée analyses ont été effectuées en utilisant un modèle des risques proportionnels de régression de Cox. Toutes les analyses ont été effectuées en utilisant le logiciel IBM SPSS Statistics (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Les cas ont été censurés à la date de la mort soit du patient ou le dernier suivi. Les résultats ont été considérés comme significatifs à la p
& lt; Résultats de 0,05, et ces différences ont été désignés par un astérisque ou des lettres différentes.
information des patients sélectionnés
Un total de 57 patients atteints de CCCO composé de 36 hommes et 21 femmes ont été inclus dans cette étude. L'âge des patients variait 17-90 ans (moyenne, 65,4 ± 13,9 ans). Le site de CCCO chez les patients inclus gingivale (27 cas), le palais (10 cas), la langue (9 cas), le plancher de la bouche (7 cas), et la joue (4 cas) (tableau 1). Les patients ont été divisés en fonction de la modalité de traitement comme suit: 15 patients dans le groupe Surg, 22 patients dans le groupe Surg + RT et 20 patients dans le groupe RT. La période moyenne de suivi chez tous les patients était de 35,9 mois; Pendant ce temps, 24 patients (19, 4, et 1 patient dans le RT, Surg + RT, et les groupes Surg, respectivement) sont morts après une moyenne de 18,4 mois, et 33 patients ont survécu sur un suivi moyen de 48,7 mois. Dans tous les cas de la chirurgie, les marges tumorales de résection ont été fixés comme au moins 2 cm, et le champ de résection a été confirmé être en utilisant des coupes de biopsies congelées sans tumeur
. Les profils d'expression de NANOG, p53 mutant et CD44 dans CCCO prétraitement biopsie spécimens NANOG a été principalement détectée dans les noyaux des cellules CCCO, mais une expression NANOG a été détectée dans le cytoplasme des cellules cancéreuses. p53 mutante a été localisée dans les noyaux des cellules cancéreuses, alors que le CD44 a été détectée dans la membrane cellulaire des cellules CCCO (fig. 1). Le nombre de cellules positives et les intensités d'expression étaient généralement plus en OSCCs de haut grade (modérément ou peu différenciées) que dans les tumeurs de bas grade (bien différencié) (fig. 1 et 2). Sur les 57 échantillons CCCO, l'expression de NANOG était forte dans 21 spécimens, modérée dans 18 échantillons, et faible ou négative dans 18 échantillons. expression modérée, faible et négative de CD44 a été observée dans 28, 21 et 8 échantillons CCCO, respectivement. En outre, 34 échantillons étaient positifs pour p53 mutante, tandis que 23 échantillons étaient négatifs (voir le tableau 1). Figue. Une coloration immunohistochimique de NANOG, le mutant p53 et CD44 dans OSCCs. une série de sections spécimens CCCO modérément différenciés montrent une expression modérée de NANOG et CD44, et l'expression positive de p53 mutante. b Dans les champs de grossissement plus élevé de coupes sériées, NANOG est détectée principalement dans les noyaux, mais est également exprimée dans le cytoplasme de certaines cellules tumorales. p53 mutante est détecté dans les noyaux des cellules tumorales, alors que CD44 est localisée dans les membranes des cellules cancéreuses. Les flèches indiquent les sites de co-expression de NANOG, le mutant p53 et CD44 dans OSCCs. Barre d'échelle = 50 um
Fig. 2 immunocoloration de bien (a & amp; b) et mal (c) OSCCs différenciés. Dans une des sections en série, l'expression négative de NANOG, p53 mutant et CD44 est détectée dans un échantillon de CCCO bien différencié (* indique les tissus cancéreux). b Dans un autre cas de CCCO bien différencié, NANOG et p53 mutant sont presque négatif, vu dans moins de 25% de cellules positives, alors que CD44 est faiblement détectée dans la membrane des cellules cancéreuses (flèches). c Dans un échantillon de CCCO mal différenciés, l'expression accrue des NANOG, p53 mutant et CD44 est détectée. Les flèches indiquent la co-localisation des trois protéines marqueurs. Barre d'échelle = 50 pm
relations directes entre les intensités d'expression de NANOG, p53 mutant et CD44 ont été observés (Fig. 3a). Tumeurs avec une forte expression de NANOG aussi fréquemment exposés expression positive mutant p53 (p
= 0,002) et une meilleure expression de CD44 (p
& lt; 0,001). De même, les tumeurs avec une expression positive de p53 mutant affichés amélioré l'expression de CD44 (p
& lt; 0,001) (Fig. 3a). Dans certains cas, la co-expression de NANOG, le mutant p53 et CD44 a été détectée dans des coupes en série des mêmes échantillons CCCO, indiquant que certaines cellules cancéreuses présentent une co-expression de ces trois protéines marqueurs. Fait intéressant, la co-expression de trois protéines était plus fréquemment observée dans OSCCs modérément ou faiblement différenciées (Fig. 1b et 2c). Figue. 3 La corrélation des motifs d'expression du NANOG, le mutant p53 et CD44 et le grade histologique OSCCs. un Tumeurs avec une expression accrue de NANOG montrent une fréquence plus élevée de positivité mutant p53 (p
= 0,002) et une meilleure expression de CD44 (p
& lt; 0,001). De même, OSCCs avec expression positive de p53 mutant montrent une plus forte expression de CD44 (p
& lt; 0,001). b expression forte ou modérée de NANOG est significativement liée à histopathologique OSCCs de haut grade (p
& lt; 0,001); Cependant, l'expression faible ou négative de NANOG est en corrélation avec le carcinome bien différencié (p = 0,018
). En outre, l'expression de p53 mutante positive est significativement associée à un carcinome de haut grade (p
& lt; 0,001). De même, une expression accrue de CD44 est associée à des tumeurs de haut grade, mais pas de signification statistique a été observée (p = 0,058
). Les données représentent le nombre de cas avec une expression positive de chaque protéine, et un astérisque (*) indique des différences significatives (p
& lt; 0,05). [Abréviations: NANOG (++ /+++), expression forte ou modérée de NANOG; NANOG (+/-), expression faible ou négative de NANOG; p53 (+), l'expression positive de p53 mutant; p53 (-), expression négative de p53 mutant; CD44 (++), plus d'une expression modérée de CD44; CD44 (+), une faible expression de CD44; CD44 (-), l'expression négative de CD44; Eh bien, OSCCs bien différenciés; Mod + pauvre, modérément et mal différencié OSCCs]
Association entre les caractéristiques de la tumeur clinicopathologiques et les profils d'expression de NANOG, p53 mutant, et Strong expression de CD44 de NANOG était significativement corrélée avec OSCCs histologiquement de haute qualité (p
& lt; 0,001), alors que l'expression faible ou négative de NANOG principalement produite carcinomes dans bien différenciés (p = 0,018
). De même, l'expression de p53 mutant positif était significativement associée à des carcinomes de haut grade (p
& lt; 0,001) (figure 3b.). tumeurs de haut grade présentent une expression accrue de CD44, mais cette constatation n'a pas été statistiquement significative (Fig. 3b). Dans l'évaluation de la relation entre l'expression de la protéine et le stade de la tumeur, forte et expression modérée de NANOG affiché associations directes avec des tumeurs à un stade avancé (stade III et IV; p
& lt; 0,05), alors que faible expression de NANOG était directement associé avec des tumeurs à un stade précoce (stade I et II; p = 0,018
) (figure 4a.). l'expression de p53 mutant positif a été fréquemment observée dans les tumeurs à un stade avancé (p = 0,049
). De même, une plus forte expression de CD44 a été fréquemment observée dans les tumeurs à un stade avancé, mais la différence n'a pas été statistiquement significative (Fig. 4a). Dans l'analyse du cou noeud métastase, expression faible ou négative de NANOG était significativement liée à négative métastases ganglionnaires de cou OSCCs (p
= 0,005) (Fig. 4b). De même, l'expression négative de p53 mutant (p
= 0,007) et une faible expression de CD44 (p = 0,049
) ont été significativement liée à une fréquence plus élevée de négatif métastases ganglionnaires du cou (Fig. 4b). Figue. 4 Corrélation de stade de la tumeur ou du cou noeud métastases et les modèles de immunocoloration de NANOG, p53 mutant et CD44. une expression forte ou modérée de NANOG est directement associée à des tumeurs à un stade avancé, alors que l'expression faible ou négative de NANOG est directement liée au cancer à un stade précoce (p
& lt; 0,05). expression positive de p53 mutante est également significativement associée à des tumeurs à un stade avancé (p = 0,039
). expression supérieur de CD44 est fréquemment associée à des tumeurs à un stade avancé, mais pas de signification statistique a été observée (p
& gt; 0,05). b Tumeurs avec une expression faible ou négative de NANOG (p
= 0,004), l'expression négative de p53 mutant (p = 0,006
), et une faible expression de CD44 (p = 0,049
) montrent une fréquence significativement plus élevée négatif métastases ganglionnaires du cou. les niveaux d'expression plus élevés des trois protéines ne sont pas associées au noeud du cou métastatique (p
& gt; 0,05). Les données représentent le nombre de cas avec une expression positive de chaque protéine, et un astérisque (*) indique une différence significative (p
& lt; 0,05). [Abréviations: I + II, stade de la tumeur I & amp; II; III + IV, stade de la tumeur III & amp; IV; N0, négative métastases ganglionnaires du cou; N +, positif noeud cou métastase]
analyse de survie
L'analyse des taux de survie globale des patients en termes de caractéristiques tumorales clinicopathologiques a révélé des résultats significatifs (fig. 5a-d). Les patients atteints de CCCO stade avancé (stade III et IV) a eu un taux de survie significativement plus faible que celles des tumeurs à un stade précoce (stade I et II) (p
& lt; 0,05, figure 5a.). Les patients atteints de CCCO et positive métastases dans les ganglions du cou affichent un taux de survie nettement plus pauvres que ceux avec négative métastases ganglionnaires du cou (p
& lt; 0,01, figure 5b.). En outre, les patients atteints de histopathologique de haute qualité CCCO avaient un moins bon pronostic que les tumeurs bien différenciées (p
& lt; 0,01, figure 5c.). En termes de modalité de traitement, le groupe RT a présenté un taux de survie nettement plus pauvres que les groupes Surg et Surg + RT (p
& lt; 0,01, figure 5d.). Figue. 5 Le taux de survie globale des patients CCCO selon les caractéristiques clinico tumorales, modalité de traitement, et les modèles de immunocoloration de NANOG, p53 mutant et CD44. a Les patients atteints de tumeurs à un stade avancé (stade III & amp; IV) montrent des taux significativement plus faibles de survie (p
& lt; 0,05). b-d une association positive entre le taux de survie globale des patients CCCO et le grade tumoral histopathologique, noeud du cou métastase, et modalité de traitement est observée. Le groupe bien différencié CCCO, négatif groupe de noeuds du cou, et le traitement chirurgical exposition collective significativement meilleurs taux de survie à long terme que les groupes opposés correspondants (p
& lt; 0,01). e Enhanced expression de NANOG est associée à un faible taux de survie; en particulier, les patients présentant une expression forte ou modérée de NANOG montrent des taux de survie significativement plus bas que ceux avec l'expression de NANOG faible ou négative (p
& lt; 0,01). f Les patients avec p53 mutante (de +) - tumeurs exprimant montrent un taux de survie plus faible que celles des tumeurs négatives pour p53 mutant (-) (p
& lt; 0,01). g expression de CD44 accrue tend à corréler avec les faibles taux de survie, mais pas de signification statistique a été trouvée (p
& gt; 0,05). h OSCCs avec co-expression d'une meilleure NANOG et p53 mutant [NANOG (++) /p53 (+)] en corrélation avec un taux de survie globale significativement inférieurs à ceux avec une faible NANOG et p53 négativité [NANOG (+/-) /p53 ( -)] (p = 0,014
). Notamment, il n'y a eu aucun décès dans les 12 cas de NANOG (+/-) /p53 (-) pendant la période de suivi. Des lettres différentes indiquent des différences statistiquement significatives entre les groupes (p
& lt; 0,05)
En outre, l'analyse de survie en fonction des modèles de immunocoloration de NANOG, p53 mutant, et CD44 a révélé des différences statistiquement significatives (figures 5E-h.). L'intensité de l'expression de NANOG était directement associé avec le taux de survie globale; patients atteints de tumeurs NANOG exprimant de fortes [NANOG (+++)] avaient des taux de survie plus défavorable que ceux avec des tumeurs NANOG exprimant faibles ou négatives [NANOG (+/-)] (p
. & lt; 0,01, figure 5e) . De même, une association positive entre l'expression de p53 mutant et le taux de survie globale a été observée; spécifiquement, les patients atteints de p53 positif CCCO avaient des taux de survie inférieurs à ceux avec p53 négatif CCCO (p
. & lt; 0,01, figure 5f). expression de CD44 renforcée a été associée à des taux de survie pauvres, mais ce résultat n'a pas été statistiquement significative (p
& gt; 0,05, figure 5g.). Fait intéressant, les patients avec co-expression de NANOG améliorée (expression modérée ou forte) et p53 positivité [NANOG (++) /p53 (+)] avaient significativement plus courts taux de survie que les patients avec faible NANOG et d'expression de p53 négative [NANOG (+ /-) /p53 (-)] (p = 0,014
, la figure 5 H).. D'importance, parmi les 28 patients avec NANOG (++) /p53 (+) des tumeurs, 17 patients sont décédés, alors qu'il n'y a eu aucun décès dans les 12 patients avec NANOG (+/-) /p53 (-) lésions pendant le suivi jusqu'à la période (Fig. 5h). Univariée risques proportionnels de Cox analyse de régression a révélé que le noeud du cou métastase, histologiquement tumeur de haute qualité, et le stade de la tumeur en retard ont été associés à un pronostic nettement plus pauvres. En outre, une expression accrue de la p53 mutante et NANOG, en particulier la co-détection de ces deux protéines dans les échantillons pré-traitement CCCO de biopsie est directement associée à des taux de survie inférieurs (tableau 2). De même, le modèle des risques proportionnels de régression multivariée de Cox a démontré que le noeud du cou métastase, le grade histologique et le motif d'expression immunohistochimique de NANOG étaient directement liés au taux de survie globale des patients atteints de CCCO (tableau 3) .Table 2 univariée risques proportionnels de Cox Analyse de régression rapport à la survie globale des 57 patients CCCO
survie globale
P
valeur variable
rapport Hazard
95% noeud CI
Neck
& lt; 0,001 *
6,795
2,745 à 16,817
Le grade histologique
0,003 *
12.271
2,336 à 64,465
Tumor stage
0.009*
3.718
1.385–9.980
NANOG
0.019*
4.494
1.275–15.839
Mutant p53
0.016*
3.747
1.279–10.977
CD44
0.263
2.315
0.532–10.097
NANOG + P53
0,028 *
0,741
0,217 à 2,531
Abréviation: intervalle de confiance
CI * Statistiquement significatif ( p
& lt; 0,05)
Tableau 3 multivariée risques proportionnels de Cox analyse de régression par rapport à la survie globale des 57 patients CCCO
survie globale
variable la valeur
P
rapport Hazard
95% Cl
Neck noeud
0,004 *
6,549
1,800 à 23,822
Le grade histologique
0,012 *
3.598
1,330 à 9,937
Tumor stage
0.254
3.546
0.403–31.225
NANOG
0.035*
4.319
3.351–27.476
Mutant p53
0,180
1.195
1. 713 à 5,754
Abréviation: CI
intervalle de confiance
* Statistiquement significatif (p
& lt; 0,05)
Discussion
Depuis l'émergence de l'hypothèse que le SCC une théorie clé pour expliquer la progression du cancer, les motifs d'expression de plusieurs marqueurs de cellules souches pluripotentes et des facteurs de transcription ont été étudiés dans différents tissus cancéreux ou des lignées cellulaires pour déterminer leur corrélation avec un pronostic à long terme. Dans la présente étude, le NANOG début du facteur de transcription, le marqueur CD44 SCC et p53 mutant humain ont été immunohistochimie étudiés dans les échantillons de prétraitement de biopsie de 57 patients atteints de CCCO pour identifier toute relation de leurs profils d'expression avec des caractéristiques tumorales clinicopathologiques et le pronostic du patient. Les résultats de cette étude ont démontré que les profils d'expression immunohistochimique de NANOG et p53 mutant ont été directement associés à des taux de survie globale, ainsi que les caractéristiques clinico, y compris le stade tumoral, le cou noeud métastases, et le grade histologique. Les patients atteints de CCCO dont les tumeurs avaient une expression plus élevée de NANOG et p53 mutant présentait des caractéristiques clinico moins favorables et les taux de survie plus faible. Une expression accrue de CD44 a également été associée à un mauvais pronostic et les taux de survie plus faible, mais pas de signification statistique n'a été observée. Récemment, une modalité commune pour prédire le pronostic du cancer a été la mesure de intra-tumorale hétérogénéité génétique [19, 20]. Hétérogénéité signifie que les tumeurs sont composées de multiples sous-populations clonales de cellules caractéristiques différentes et, par conséquent, l'examen histologique révèle fréquemment des différences dans la morphologie cellulaire et les propriétés, parmi les cellules dans le même échantillon de cancer [20]. hétérogénéité intra-tumorale renforcée a été directement corrélée à une mortalité accrue; en particulier, une forte hétérogénéité et p53 mutation positivité ont été associés à des taux de mortalité plus élevés dans une grande étude de cohorte de la tête et du cou [19]. Dans la présente étude, des coupes en série de spécimens de tumeurs souvent révélé la co-expression de NANOG, p53 mutant et CD44, qui a été associée à un mauvais pronostic. Le co-détection de ces différentes protéines de marqueurs dans la même cellule cancéreuse ou d'une région même de la tumeur peut représenter l'hétérogénéité tumorale élevée. Le plus NANOG est un facteur de transcription précoce et un marqueur pluripotent qui maintient l'auto-renouvellement des cellules souches embryonnaires et mésenchymateuses [8 ]. Des études récentes ont révélé que NANOG est fortement détectée dans les carcinomes mal différenciées et des tumeurs à un stade avancé [8-10].
