Résumé
fond
carie dentaire se développe en raison du métabolisme des hydrates de carbone par des bactéries cariogènes présentes dans un film biologique complexe. La présente étude visait à examiner si les bactéries dans des échantillons de plaque supragingivales communs quantifiés à l'aide d'un "checkerboard hybridation ADN-ADN" panel de bactéries apparentées caries-base, pourrait refléter l'expérience de la carie d'une manière similaire à des échantillons de salive analysés à l'aide d'une méthode au fauteuil dans une enquête précédente.
Méthodes
un total de 86 mères et leurs enfants âgés de 4-6 ans et 12-16 ans ont participé. Caries (CAOD /caod; dents cariées, absentes ou obturées pour les dents permanentes et primaires) a été enregistrée cliniquement et radiologiquement. Caries a été enregistré à la D
3 niveaux (caries dans la dentine). Le composant D /j a été divisé en trois catégories. Un échantillon de la plaque supragingival groupée par participant a été obtenu à partir de sites proximales postérieures. Résultats de Analyses de 15 espèces bactériennes ont été réalisées en utilisant la technique checkerboard ADN-ADN d'hybridation.
ont été trouvées entre les scores bactériens et les groupes CAOD /caod ni D /d Aucune relation significative
. Conclusions
Contrairement les échantillons de salive et la méthode au fauteuil, des échantillons de plaque communs interdentaires analysés en utilisant la «technique checkerboard ADN-ADN hybridation" n'a pas révélé de relations significatives entre les comptages bactériens et l'expérience de la carie.
Anette Carlén, Guglielmo Campus et Peter Lingstrom a contribué également à ce travail.
Contexte
la carie dentaire est une maladie multifactorielle initié et influencé par un certain nombre de facteurs clés [1]. En outre, la salive joue un rôle important dans le maintien de l'intégrité des dents en tamponnant les acides produits par les bactéries cariogènes et de protéger les dents contre la carie. Salivaire peut influencer la microflore buccale par adsorption à la surface des dents formant la pellicule acquise, qui détermine quels micro-organismes sont capables de fixer et de coloniser [2]. Saliva a été classiquement utilisé comme outil de diagnostic pour déterminer l'activité de la carie et au risque [3, 4]. Cette évaluation comprend l'enregistrement de la capacité et les chiffres de bactéries cariogènes principalement streptocoques mutans et les lactobacilles en utilisant des tests de chaise latéraux tampon salivaire.
Bien que l'analyse salivaire peut donner un aperçu général de l'écologie orale reflétant le risque de carie, la carie dentaire est principalement une induite par biofilm de la maladie [5]. Regarde ce biofilm (plaque dentaire) comme un écosystème microbien complexe a amélioré la compréhension de son rôle dans le développement des caries et de la progression [6]. plaques cariogènes se produisent lorsque des espèces bactériennes acidogènes et aciduriques augmente après fréquence élevée de glucides exposition. Le métabolisme microbien de ces hydrates de carbone se traduira par l'acidification du biofilm, qui à son tour peut conduire à une déminéralisation induite par l'acide des tissus dentaires durs [6]. L'une des techniques de biologie moléculaire qui ont démontré la composition microbienne diverse du biofilm dentaire est la «technique d'hybridation ADN-ADN en damier" [7, 8]. Toutefois, aucun panneau spécifique à la carie n'a encore été proposée. Il serait donc intéressant d'utiliser la technique d'hybridation ADN-ADN en damier avec une carie panneau spécifique pour étudier la relation entre l'expérience individuelle de la carie et les chiffres de différentes supragingivales bactéries liées aux caries de la plaque.
La présente étude a été réalisée dans le cadre de une série d'études sur les mères saoudiennes et leurs enfants. Une partie visant à décrire l'expérience de la carie par rapport à divers facteurs liés caries et une association claire entre chaise côté salivaire compte et caries bactériennes expérience a été trouvée [9]. Une autre partie a été conçue pour déterminer si des échantillons de plaque interdentaires communs analysés en utilisant la «technique d'hybridation ADN-ADN en damier" pourrait refléter l'expérience de la carie.
L'hypothèse de cette étude transversale est que la carie plus élevées expériences sont associées à des chiffres plus élevés de bactéries liées à la carie-en plaque supragingival. Le but de la présente étude était donc d'examiner si les bactéries dans des échantillons de plaque supragingivales communs quantifiés à l'aide d'un "checkerboard hybridation ADN-ADN" panel de bactéries apparentées caries-base, pourrait refléter l'expérience de la carie d'une manière similaire à des échantillons de salive analysés à l'aide d'un méthode au fauteuil dans une enquête précédente.
Méthodes
sujets: l'étude a reçu l'approbation éthique de la Faculté de médecine dentaire à l'Université king Abdulaziz à Jeddah, Royaume d'Arabie Saoudite. Les dossiers dentaires à la santé et d'urgence Cliniques dentaires à la Faculté de médecine dentaire ont été criblées pour identifier les candidats appropriés de la famille. L'étude comprenait 86 familles volontaires. De chaque famille, la mère (âge moyen 37,0 ± 4,5 ans) et deux de ses enfants âgés de 4-6 ans (âge moyen 5,0 ± 0,9 ans) et 12-16 ans (âge moyen 13,0 ± 1,4 ans) volontaire. information verbale à propos de l'étude a été remis aux parents et le consentement éclairé écrit a été obtenu. Toutes les enquêtes ont été réalisées par l'un des auteurs (AM).
Enregistrement Caries
L'état de la dentition a été exprimé à l'aide de l'indice CAOD (dents cariées, absentes et obturées) pour les dents permanentes et caod pour les dents primaires. Les troisièmes molaires ont été exclus. Caries a été enregistré cliniquement et radiologiquement au D 3 niveaux [10]. radiographies interproximales ont été prises pour chaque participant afin d'enregistrer la carie proximales. Toutes les surfaces proximales dans la denture de la surface mésiale des premières prémolaires /molaires primaires à la surface distale des deuxièmes molaires /molaires primaires ont été inclus.
Échantillons de plaque bactérienne
plaque supragingival Pooled a été échantillonné à partir des sites proximaux entre les dents 16/15, 25/26, 35/36 et 46/45 chez les mères et les enfants plus âgés et les dents 55/54, 64/65, 74/75 et 85/84 chez les enfants plus jeunes en utilisant curettes Gracey stériles. Si l'une des dents dans le site proximal était absent, un site adjacent a été utilisé. Chaque échantillon de plaque a été placée dans un tube Eppendorf contenant 150 μ
l de tampon TE stérile (10 mM de Tris-HCl, EDTA 1 mM, pH 7,6). Ensuite 100 μ l de
NaOH 0,5 M ont été ajoutés au culot de la plaque et la suspension bactérienne a été stocké à -20 ° C en attendant un traitement supplémentaire [11].
Damiers ADN hybridation de l'ADN
L'analyse des bactéries espèce a été effectuée en utilisant la méthode d'hybridation ADN-ADN en damier [12]. Les sondes génomiques entières ont été préparées à partir des 15 souches bactériennes connues pour être liées à la carie, comme indiqué dans le tableau 1. L'évaluation du nombre de bactéries dans les échantillons a été effectuée en comparant les signaux obtenus avec ceux générés par les échantillons standard regroupées contenant un décompte 10 6 et 10 5 de chaque espèce bactérienne, respectivement. Les signaux ont été codés sur une échelle allant de 0 à 5 comme suit: 0 = pas de signal; 1 = une densité de signal plus faible que celui du bas niveau (& lt; 10 5 bactéries); 2 = une densité de signal égal à celui du bas niveau (= 10 5 bactéries); 3 = une densité de signal supérieur à celui de la faible standard, mais inférieure à celle de la norme élevée (& gt; 10 5 mais & lt; 10 6 bactéries); 4 = une densité de signal égale à celle de la norme élevée (= 10 6 bactéries) et 5 = une densité de signal supérieure à celle de la norme élevée (& gt; 10 6 bactéries). D'autres détails concernant cette technique se trouvent dans Mannaa et al. [13]. Toutes les évaluations ont été effectuées par un examinateur (AM) .Table 1 Les 15 souches bactériennes liées caries utilisées pour la préparation de sondes d'ADN et d'autres comparaisons avec les données des caries cliniques
nomenclature bactérienne
Strain Description & amp; Source
streptocoques mutans
Streptococcus mutans
ATCC-25175
Streptococcus sobrinus
CCUG-27507
non-streptocoques mutans
Streptococcus mitis
ATCC-49456D-5
Streptococcus gordonii
ATCC-35105D-5
Streptococcus sanguinis
ATCC-10556D-5
Streptococcus salivarius
ATCC-9759D-5
lactobacilles
Lactobacillus casei
ATCC-334D-5
Lactobacillus salivarius
CCUG-55845
Lactobacillus fermentum
BMH -3182
Actinomyces
Actinomyces odontolyticus
NCTC-9935
Actinomyces oris
ATCC-12104D-5
Veillonella parvula
ATCC-10790D-5
Rothia dentocariosa
CCUG-17835
Bifidobacterium dentium
BMH-1956
Parvimonas micra
ATCC-33270
analyse des données
Toutes les données ont été analysées à l'aide d'IBM ® SPSS ® package statistique (PASW version 18.0, IBM ®, Chicago, Ill ., ETATS-UNIS). Le composant D /d a été classé en bas: ≤ 1, moyenne: 2-5 et haute: & gt; 5 pour les mères et les enfants plus âgés, et faible: ≤ 3, moyenne: 4-9 et élevées: ≥ 10 pour les enfants plus jeunes. Kappa de Cohen pour la détermination de la fiabilité intra-examinateur de l'enregistrement des caries a été calculé. Les statistiques descriptives, y compris les moyens et les écarts-types ont été calculés séparément pour les trois groupes. En ce qui concerne les scores en damier, seuls quelques signaux "0" des données ont été enregistrées et donc combiné avec signaux de données "1" en "≤1". One-way ANOVA a été utilisé pour comparer les différences moyennes dans l'expérience de la carie par rapport aux scores bactériennes. Le test exact de Fisher a été utilisé pour associer les groupes D /d avec les scores bactériens. Le niveau de signification statistique a été fixé à 5%.
Résultats et discussion
valeurs kappa de Cohen pour l'enregistrement des caries pour les mères, les enfants plus jeunes et les enfants plus âgés étaient 0,88, 0,90 et 0,82 respectivement. Le tableau 2 résume les comptes bactériens pour chaque espèce. Les caries expériences (CAOD /caod) des mères, des enfants plus jeunes et plus âgés sont résumés dans le tableau de distribution 3.Table 2 Score pour les 15 souches bactériennes obtenues par la technique Damier ADN-ADN Hybridation dans les mères, de 4 à 6 ans
damier scores de souches bactériennes de -old (C 4-6) et de 12 à 16 ans (C 12-16) enfants
mères
C4-6
C2-16
n = 86
n = 86
n = 86
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
≤1
2
3
4
5
S. mutans
77
8
1
0
0
68
15
3
0
0
10
76
0
0
0
S. sobrinus
6
80
0
0
0
79
3
4
0
0
9
77
0
0
0
S. sanguinis
17
69
0
0
0
19
66
1
0
0
68
17
1
0
0
S. salivarius
84
2
0
0
0
80
6
0
0
0
83
3
0
0
0
S. gordonii
67
16
3
0
0
67
16
3
0
0
66
16
3
1
0
S. mitis
72
12
2
0
0
72
10
4
0
0
74
12
0
0
0
L. casei
81
5
0
0
0
82
4
0
0
0
81
5
0
0
0
L. fermentum
84
2
0
0
0
82
4
0
0
0
84
2
0
0
0
L. salivarius
84
2
0
0
0
84
2
0
0
0
83
3
0
0
0
A. odontolyticus
83
3
0
0
0
80
6
0
0
0
81
5
0
0
0
A. oris
55
27
4
0
0
40
40
6
0
0
55
30
1
0
0
V. parvula
56
28
1
1
0
50
29
7
0
0
54
29
3
0
0
R.dentocariosa
74
12
0
0
0
72
14
0
0
0
71
14
1
0
0
B. dentium
81
5
0
0
0
81
5
0
0
0
83
3
0
0
0
P. micra
20
28
24
14
0
24
26
28
8
0
29
19
29
8
1
Table 3 état de Dentition (CAOD /CAOD) et caries (D /d) dans les mères, de 4 à 6 ans (C 4-6) et de 12 à 16 ans (C 12-16) enfants
variable
mères
C4-6
C12-16
n = 86
n = 86
n = 86
CAOD /adroite (moyenne ± SD)
12,4 ± 5,3
9,0 ± 5,0
5.8 ± 4.1
D /j (moyenne ± SD)
5,5 ± 3,9
8,0 ± 5,1
4,5 ± 3,7
CAOD /adroite = 0 (n [%])
3 [3.5]
8 [9.3]
10 [11.6]
D /d = 0 (n [%])
10 [11.6]
9 [10.5]
12 [14,0]
Low
17 [19,8]
23 [26,7]
23 [26,7]
moyen
31 [36,0]
25 [29,1]
32 [37,2]
Haute
38 [44,2]
38 [44,2]
31 [36,0]
Il y avait une distribution non équitable des sujets dans les scores sur l'échelle de damier, avec la majorité des numérations bactériennes dans les plages inférieures de l'échelle. L'analyse a montré aucune relation entre les scores bactériens et l'expérience de la carie pour l'une des bactéries apparentées caries. En outre, aucune association significative n'a été décelée entre les scores bactériens et les D /catégories d chez les mères ou chez leurs enfants plus jeunes ou plus âgés, à l'exception d'une tendance observée par rapport à mutans
Streptococcus comme indiqué dans le tableau 4.Table 4 Distribution de D /d par rapport à S. mutans scores chez les mères, de 4 à 6 ans (C 4-6) et de 12 à 16 ans (C 12-16) les enfants de S. mutans compte
D /d
mères
C4-6
C12-16
Low
Medium
High
Low
Medium
High
Low
Medium
High
(≤1)
(2–5)
(>5)
(≤3)
(4–9)
(>9)
(≤1)
(2–5)
(>5)
1
17
29
31
20
18
30
23
30
27
2
0
2
6
3
4
8
0
2
4
3
0
0
1
0
3
0
-
-
-
The la majorité des études utilisant la technique de l'ADN-ADN hybridation damiers se sont concentrées sur l'étude de la plaque écologie bactérienne par rapport à la parodontopathie [14-17]. Ces études ont révélé une relation directement proportionnelle entre le nombre de bactéries et de la profondeur de poche parodontale. La présente étude n'a pas pu démontrer une relation entre le nombre des bactéries supragingivales et l'expérience de la carie (CAOD /caod). Une relation entre la carie expérience et le nombre de bactéries salivaires liées caries (mutans streptocoques et lactobacilles) évaluée à l'aide de bactéries CRT ® a été trouvé dans le même échantillon d'étude [9]. Dans la présente étude, aucune relation entre les bactéries quantifiées dans les échantillons de plaque mis en commun et l'expérience de la carie a été trouvé. Ceci correspond bien à une étude antérieure où une forte association entre les caries dentaires et les organismes cariogènes analysés par une technique de culture par rapport à la méthode de damier a été trouvée [18]. Un certain nombre de facteurs liés aux caractéristiques de la plaque dentaire, le processus de la maladie carieuse et le choix de la méthode d'échantillonnage, peut expliquer la découverte actuelle. L'interaction bactérienne dans la plaque dentaire pourrait apporter une plus grande contribution au développement des caries que le nombre spécifique de certaines espèces cariogènes. En outre, la communauté plaque microbienne diffère à différents stades de maturation plaque (début plaque par rapport à la plaque
mature). En outre, l'emplacement des sites d'échantillonnage et le nombre de sites sélectionnés peuvent influencer la relation. Le nombre de bactéries de la plaque pourrait également être affectée par un certain nombre de caries liées facteurs autres que les caries réelles d'expérience tels que l'emplacement /profondeur (émail contre
dentine), l'étape (naissante contre
cavitation), le niveau ( aiguë, chronique ou arrêté), et l'activité de la lésion carieuse (active ou inactive
). En outre, la technique d'hybridation ADN-ADN checkerboard a une limite haute de coupure pour la quantification bactérienne rendant la détection de bactéries dans un faible nombre problématiques, ce qui peut être encore compliquée par des réactions croisées [19]. Enfin, la répartition inégale des sujets dans les scores en damier avec une majorité de faible teneur en bactéries dans la présente étude pourrait expliquer le manque de résultats significatifs.
En plus des inconvénients mentionnés précédemment, il existe deux limites de la méthode d'échantillonnage utilisé dans la présente étude. A la différence de la salive, il est difficile d'uniformiser la quantité de bactéries dans un échantillon de plaque. La normalisation peut être facilement réalisé avec de la salive en exprimant la quantité de bactéries dans un échantillon de 1 ml. En outre, la mise en commun de plaque supragingival dans un tube d'essai peut créer des difficultés dans lyser toutes les cellules bactériennes présentes dans une suspension bactérienne très dense [20]. Pour cette raison, l'échantillonnage de la plaque lourde a été minimisée dans la présente étude en prenant seulement une quantité suffisamment visible de la plaque supragingival. Cependant, la question de savoir si trop peu de plaque a été recueillie ne peut être exclue.
Contrairement à la présente étude, Aas et al. a montré que les chiffres plus élevés d'espèces bactériennes spécifiques ont été associés à la santé, la carie initiation et caries progression en utilisant un essai inverse capture [21]. En outre, la présente étude a analysé des échantillons de plaque mis en commun par opposition aux échantillons provenant de différents sites de caries sensibles dans la cavité buccale. En outre, l'index /caod DCAO pourrait être considérée comme une méthode grossière pour décrire l'expérience de la carie individuelle et transmet aucune information sur l'activité des caries. Une relation entre le nombre de bactéries plaque et la carie expérience peut avoir été obtenus si l'enquête avait été réalisée sur un niveau spécifique au site et si liés caries paramètres tels que la profondeur, le stade et l'activité avait été prise en considération. De Conclusions
Contrairement aux échantillons de salive et la méthode au fauteuil Remarques
Anette de, des échantillons de plaque communs interdentaires analysés en utilisant la «technique checkerboard ADN-ADN d'hybridation" n'a pas révélé de relations significatives entre les comptages bactériens et l'expérience de la carie. Carlén, Campus Guglielmo et Peter Lingstrom a contribué également à ce travail.
Déclarations
Remerciements
Nous tenons à remercier Ann-Britt Lundberg (Département de cariologie, Université de Göteborg) et Susanne Blomqvist (Département de microbiologie orale et d'immunologie, Université de Göteborg) pour leur soutien technique. Un merci spécial au Dr Nadia Al-Hazmi, chef de dossiers dentaires et le dépôt, le Dr Sahar Bukhary, chef de la Division de biologie orale, et le Dr Motaz Ghulman, vice-doyen des affaires étudiantes à la faculté de médecine dentaire à UAE, Royaume de Arabie Saoudite. L'étude a été soutenue par le ministère saoudien de l'enseignement supérieur.
Intérêts concurrents
Les auteurs rapportent aucun conflit d'intérêt. Les contributions de
Auteurs
AM a participé à la conception de l'étude, réalisée la collecte de données et d'échantillonnage , a couru l'analyse "Damier ADN-ADN hybridation", effectué une analyse statistique et était responsable de l'écriture manuscrite. AC a participé à la conception de l'étude et a supervisé l'écriture manuscrite. GC a contribué à l'analyse statistique et a contribué à la rédaction du manuscrit. PL a participé à la conception de l'étude et a supervisé l'écriture manuscrite. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
