Résumé de l'arrière-plan
rapide guérison des plaies des tissus mous par voie orale peut réduire la possibilité d'infection et l'inconfort des patients. Des études antérieures ont montré que l'amélioration de l'angiogenèse est un moyen efficace pour accélérer la cicatrisation des plaies. Dans cette étude, pour améliorer l'angiogenèse et la cicatrisation des plaies palatines, dimethyloxalylglycine (DMOG) a été appliquée à un modèle de plaie palatine chez le rat. DMOG est connu pour inhiber la dégradation dépendant de l'oxygène de l'hypoxie inducible factor-1 alpha (HIF-1α), ce qui peut conduire à une régulation à la hausse des marqueurs de l'angiogenèse, ce qui favorise la cicatrisation des plaies. Nous avons également évalué les effets de DMOG sur la migration cellulaire et l'expression de HIF-1α de palatines de rat (RP) cellules. En outre, l'ARNm et l'expression de protéine de facteur de croissance vasculaire endothélial (VEGF) ont été analysées dans des cellules RP DMOG traitées.
Méthodes
cultures primaires de palatine de rat (RP), les cellules ont été obtenues à partir de rats Sprague-Dawley (SD) chez le rat. Effets de DMOG sur la viabilité cellulaire et la migration des cellules de RP ont été évaluées en utilisant un insert de formazan et de la culture, respectivement. ARNm de VEGF a été observée par PCR en temps réel, et des protéines VEGF et HIF-1 ont été détectés par transfert Western. Pour l'étude des animaux, plaies d'excision, de 3 mm de diamètre, ont été faites à la partie centrale du palais des rats SD. DMOG avec une pommade d'acide hyaluronique a été appliqué par voie topique trois fois pendant 1 semaine, et les fermetures puis enroulées ont été quantifiées photographiquement et histologiquement.: Résultats
DMOG était cytotoxique pour les cellules RP à des concentrations supérieures à 2 mM et n'a pas affecté la migration cellulaire au des concentrations non cytotoxiques. ARNm et la protéine expression de VEGF ont été significativement stimulées par traitement DMOG. Le niveau de HIF-1α protéine a également été stabilisée dans les cellules RP par DMOG. Dans l'étude des animaux, des groupes traités avec 1 mg /ml DMOG ont montré une augmentation de palatines de rat contractures de la plaie.
DMOG amélioré plaie la guérison Conclusions du palatin de rat muqueuse, ce qui était probablement due à l'effet angiogénique de l'agent. Dimethyloxalylglycine hypoxie-inducible factor 1 alpha Vascular endothelial growth facteur palatine muqueuse cicatrisation de la plaie Contexte de
Mots-clés
tissus mous oraux sont inévitablement endommagé lors de la greffe autogène gingivale, chirurgie parodontale, ou la chirurgie d'implant dentaire. La récupération des tissus mous des blessures dépend de la taille de la plaie, l'emplacement, l'état de l'hygiène buccale, et le niveau d'immunité. L'administration orale ou par application topique d'antibiotiques est recommandée comme un choix de soins des plaies par voie orale pour prévenir l'infection bactérienne. Dans le cas de grandes dimensions des défauts qui peuvent être causés par des greffes gingivales autogènes, matériel de pansement sont utilisés pour protéger les sites donneurs endommagés et pour aider le processus de guérison de la plaie. Destiné à la cicatrisation rapide permet également de réduire la possibilité d'infection et de l'inconfort des patients. Dans une étude antérieure, l'accélération de la réparation de la muqueuse palatine a été réalisée avec un échafaudage de collagène-gélatine en conservant le facteur basique de croissance des fibroblastes (bFGF), un inducteur puissant de l'angiogenèse [1]. β thymosine
4 (Tβ 4), un oligopeptide qui peuvent séquestrer des monomères G-actine, favorise également la cicatrisation des plaies de la muqueuse de rat [2]. Amélioration de la migration cellulaire et l'angiogenèse est susceptible d'être impliqué dans la cicatrisation des plaies par Tβ 4. Umeki et al. ont montré que la cicatrisation de la plaie de la muqueuse buccale est accélérée par la leptine, une hormone anti-obésité en circulation, par l'intermédiaire de l'amélioration de l'angiogenèse [3]. Ces études impliquent que l'amélioration de l'angiogenèse est un moyen efficace pour accélérer la voie orale réparation de la plaie.
Angiogénèse peut être stimulée par divers facteurs de croissance tels que le facteur de croissance des fibroblastes (FGF) [4], facteur de croissance vasculaire endothélial (VEFG) [5] , le facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF) [6, 7], et transformant β du facteur de croissance (TGF-β) [8, 9]. Plusieurs peptides ont également été rapportés pour favoriser l'angiogenèse [10-12]. Compte tenu de l'importance de l'angiogenèse dans la cicatrisation des plaies, on prévoit que l'application des protéines et des peptides angiogéniques sur les plaies pour accélérer la réparation des lésions des tissus par voie orale si les molécules sont convenablement fournis sur les sites de la plaie. Cependant, la stabilité et l'activité des protéines et des peptides ne peuvent pas être assurés dans l'environnement oral où la température et le pH sont variables en raison de manger et de boire. Au lieu de cela, de petites molécules angiogéniques qui sont chimiquement stables peuvent être plus appropriés pour les conditions difficiles de la cavité buccale.
Dimethyloxalylglycine (DMOG), avec un petit poids moléculaire, est un inhibiteur non spécifique cellulaire perméable de hydroxylases prolyle (PHD) [13 ]. Dans des conditions normoxiques, PHD2 est connu pour hydroxyler résidus proline spécifiques dans HIF-1α, ce qui conduit alors à une dégradation de HIF-1α par la voie ubiquitine-protéasome [14-16]. Par conséquent, l'inhibition de PHD2 par DMOG peut empêcher la dégradation de HIF-1α, créant un environnement similaire à celui trouvé dans les cellules hypoxiques. En outre, divers gènes liés à la réparation des tissus tels que l'angiogenèse sont upregulated. Une étude antérieure a montré que DMOG a amélioré la production de VEGF dans des cellules fibroblastiques parodontales [17]. En outre, Botusan et al. a démontré que DMOG stabilise HIF-1α et améliore la cicatrisation des plaies dermiques chez les souris diabétiques [18]. Dans cette étude, l'effet de DMOG sur la cicatrisation de la plaie par voie orale a été étudiée dans un modèle de plaie palatine chez le rat. Nous avons également évalué les effets de DMOG sur la migration cellulaire et l'expression de HIF-1α de palatines de rat (RP) cellules. En outre, l'ARNm et l'expression des protéines du facteur de croissance vasculaire endothéliale (VEGF) ont été analysés dans les cellules RP DMOG-traités.
Méthodes
réactifs chimiques et la culture cellulaire
milieu de culture cellulaire et des antibiotiques ont été achetés auprès de WELGENE Inc. ( Daegu, Corée). sérum bovin fœtal (FBS) a été acheté auprès de Lonza (Bâle, Suisse), et d'autres réactifs expérimentaux ont été obtenus auprès de Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO, USA), sauf indication contraire. cellules RP
ont été isolés à partir de la tissus palatins de 5 semaines vieux mâles Sprague-Dawley (SD) rats. tissus palatines isolés ont été lavés avec du tampon phosphate salin (PBS) (pH 7,4), de manière aseptique haché en petits morceaux, puis on l'immerge dans Eagle modifié du milieu de Dulbecco (DMEM) contenant 10% de FBS et solution d'antibiotiques (100 U /ml de pénicilline G et 100 pg /ml de streptomycine) à 37 ° C dans un incubateur humidifié (5% de CO 2/95% d'air). Après 20 jours de culture avec des changements de milieu à des intervalles de 3 jours, les cellules ont été recueillies RP et sous-cultivées dans les mêmes conditions. Les passages de trois à cinq ont été utilisées pour cette étude. Bien que nous n'avons pas identifié le type de cellules palatines au niveau moléculaire, les caractéristiques morphologiques des cellules isolées sous le microscope indiquent la dominance distincte de cellules de type fibroblaste.
Cellules RP de cytotoxicité incubés jusqu'à 80% de confluence ont été enlevés et la sous-culture à 0,8 x 10 5 cellules par ml dans des plaques à 96 puits et incubées à 37 ° C avec 5% de CO 2 dans l'air pendant 24 h, puis les cellules ont été traitées avec DMOG à diverses concentrations allant de 0,1 à 10 mM. Après traitement pendant 24 h, les viabilités cellulaires ont été quantifiés en utilisant le kit de comptage de cellules 8 (WST-8) (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japon). Les cellules ont été mises en incubation dans 100 pi de solution WST-8 pendant 1 heure à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée (5% de CO 2/95% d'air). L'absorbance a été mesurée à une longueur d'onde de 450 nm en utilisant un lecteur de plaque (Sunrise, TECAN, Salzbourg, Autriche). La densité optique des cellules non traitées a été désignée comme 100% et la viabilité cellulaire des cellules traitées a été exprimée comme le pourcentage de témoin négatif non traité.
Migration cellulaire
dosage in vitro pour la migration des cellules
essai dans une culture insérer (ibidi GmbH, Martinsried, Allemagne) a été utilisé pour créer une plaie dans la culture cellulaire. L'insert de culture a été placée sur une boîte de culture, et 70 ul de suspension cellulaire RP (5 x 10 5 cellules /ml) ont été ajoutés dans deux puits de l'insert. Les cellules de RP ont été incubées à 37 ° C pendant 48 heures et ensuite exposées à DMOG (0, 0,1, 0,5, 1, 2 mM) dans un milieu de culture contenant 2% de SVF pour l'analyse de la migration cellulaire. la fermeture des plaies a été observée et enregistrée à des intervalles sous un microscope à contraste de phase (Olympus, Tokyo, Japon). Pour quantifier la migration cellulaire, la zone découverte où aucune cellule étaient présents a été mesurée en utilisant le programme ImageJ, et le rapport de zone découverte entre le contrôle non traité et les groupes traités ont été obtenus.
Analyse de l'expression de l'ARNm par PCR en temps réel
Le DMOG effet de l'expression de l'ARNm de VEGF a été étudiée en temps réel réaction en chaîne par polymérase (RT-PCR). Après traitement avec DMOG à 0, 0,1, 0,5, 1, et 2 mM pendant 24 heures, l'ARN total a été isolé en utilisant le réactif d'extraction d'ARN (RNA Isolation WelPrep totale de réactif, WELGENE Inc.). De l'ARN total, l'ADNc a été préparé en utilisant un kit de synthèse d'ADNc (Power Kit de synthèse d'ADNc, Intron Biotechnology, Sungnam, Corée) et RT-PCR a été réalisée dans un ABI PRISM 7500 Sequence Detection System cycleur thermique (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) avec des volumes de réaction de 20 ul contenant 10 ul SYBR prémélange Taq Ex (Takara Bio, Otsu, Japon), 0,4 pi ROX Référence Dye II (Takara Bio), l'ADNc, et des amorces. Les amorces pour l'amplification génique ont été les suivants: le sens du VEGF, 5'-GAGTATATCTTCAAGCCGTCCTGT-3 '; VEGF antisens, 5'-ATCTGCATAGTGACGTTGCTCTC-3 '; GAPDH (glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase) sens 5'- TGTGTCCGTCGTGGATCTGA-3 '; GAPDH anti-sens, 5'-CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT-3 '. Les conditions de PCR étaient 95 ° C pendant 30 s, suivie par 40 cycles de dénaturation à 95 ° C pendant 5 s et un annelage à 63 ° C (34 s) pour le VEGF. Toutes les réactions ont été effectuées en triple. L'expression génique a été évaluée sur la base du cycle seuil (valeur CT) et normalisées par rapport à l'expression du gène GAPDH.
analyse par transfert de Western
analyse Western blot a été réalisée pour examiner l'expression de la protéine de HIF-1α et le VEGF en DMOG cellules traitées palatines. Après traitement avec DMOG à diverses concentrations pendant 24 h, les cellules ont été lysées dans un tampon d'extraction contenant 50 mM de Tris base HCl (pH 7,5), NaCl 150 mM, 0,5% de Triton-X 100 et une tablette de cocktail inhibiteur de protease (1 comprimé /10 ml, Roche Applied science, Mannheim, Allemagne) pendant 45 minutes sur la glace. Des extraits contenant des quantités égales de protéines ont été effectuées sur 10% de dodécyle sulfate de sodium, les gels de polyacrylamide et transférées sur des membranes de difluorure de polyvinylidène. Les empreintes ont été mises en incubation avec des anticorps polyclonaux de lapin dirigés contre le VEGF, HIF-1α ou GAPDH dans du PBST (PBS contenant 0,1% de Tween 20) pendant 1,5 h, on l'a lavé trois fois avec PBST, puis sondé avec des anticorps secondaires de chèvre anti-lapin conjugué à du raifort peroxydase. Les bandes de protéines ont été visualisées en utilisant un kit de chimioluminescence (WEST-ZOL, plus système de détection de Western Blot, Intron Biotechnology). La chimioluminescence a été détectée en utilisant le LAS 1000 Plus luminescent Image Analyzer (Fuji Photo Film, Tokyo, Japon). Tous les anticorps ont été achetés auprès de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA).
Rat palatine cicatrisation dosage
Après confirmation de l'effet de l'angiogenèse des DMOG sur les cellules RP, l'effet de DMOG sur la cicatrisation du tissu palatin était effectuée dans un modèle de plaie palatine chez le rat. Tous les rats ont été logés sous (SPF) des conditions exemptes d'agents pathogènes spécifiques à l'animal centre expérimental de l'école dentaire de l'Université nationale de Séoul. Dix-huit de 13 semaines Des rats mâles âgés SD (six rats pour chaque groupe), pesant 300-350 g, ont été utilisés dans la présente étude. Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel des animaux soin et l'utilisation (SNU-130123-8-1) de l'Université nationale de Séoul (Séoul, Corée). Sous anesthésie générale, les blessures de perforation ont été faites sur une zone centrale de palais dur avec un jetable de 3 mm de diamètre biopsie poinçon (Kai Industries Ltd., Gifu, Japon), l'exposition d'une zone circulaire de l'os à nu. L'acide hyaluronique (HA), la pommade (20 mg /ml) contenant 0, 0,5 ou 1 mg /ml (5,7 mM) DMOG a été appliquée à la surface de la plaie. Après la chirurgie, les animaux ont été nourris avec un régime standard de granulés et de l'eau avec l'enrofloxacine. Les agents ont été réappliqués sur les jours 2 et 4 sous anesthésie pour réduire le stress, et les rats ont été sacrifiés au jour 7. Le palais dur a été séparé, et la zone de la plaie a été observée avec un microscope stéréoscopique (Nikon, Tokyo, Japon) et par analyse histologique. La zone de la plaie sur les images microscopiques a été calculé à l'aide CellSense Dimension logiciel 1.6 (Olympus, Tokyo, Japon). les échantillons ont été prélevés pour palatines évaluation histomorphométrique et les échantillons ont été colorés avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H & amp; E), la coloration. Plus de dix diapositives pour chaque échantillon ont été préparés, et nous avons sélectionné une section qui présentait le diamètre le plus large de la plaie pour l'analyse histologique. Les sections ont été examinées sous un microscope optique (Olympus), et la distance des bords enroulés dans chaque section a été mesurée avec un micromètre oculaire calibré.
Analyse statistique
Pour l'analyse statistique, chaque expérience a été réalisée en triple exemplaire, sauf indication contraire . Les données sont exprimées en moyenne ± écart-type. Les analyses statistiques ont été déterminées par une ANOVA pour des études in vivo et détermination de la migration cellulaire. t
-test de Student apparié a été utilisé pour l'autre in vitro
résultats. A P
-value & lt; Résultats de 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.
viabilité cellulaire et la migration des cellules palatines de rat DMOG traitées
Pour étudier les effets de DMOG sur la viabilité des cellules, les cellules palatines de rat ont été exposés à DMOG pendant 24 h. La cytotoxicité de DMOG a été démontrée à des concentrations supérieures à 2 mM. La viabilité des cellules a été réduit à 60% à 4 mM, et a été principalement affectée à 8 mM (Fig. 1). La migration cellulaire a été observée dans un milieu de culture contenant 2% de FBS pour atténuer la motilité cellulaire. En l'absence de FBS, les cellules non traitées palatines ne présentait aucun mouvement pendant 48 heures (données non présentées). Dans 2% FBS, un léger mouvement de cellules a été montré à 12 h, et environ la moitié de la zone de vide a été rempli avec des cellules pénétré à 48 h. La migration des cellules pendant 48 heures n'a pas été affectée par DMOG à des concentrations non cytotoxiques (0-2 mM) (Fig. 2). Figure 1 Effet de DMOG sur la viabilité des cellules RP. RP cellules ont été traitées avec DMOG à des concentrations comprises entre 0 et 10 mM pendant 24 heures. Données et les barres d'erreur indiquent la moyenne ± SD de trois expériences indépendantes. * Démontre un (P
& lt; 0,05) différence statistiquement significative entre le contrôle et les cellules traitées
figure de migration 2 cellulaire des cellules RP DMOG traitées. (A) photomicrographies représentatives d'une analyse de migration cellulaire. RP cellules ont été traitées avec DMOG à différentes concentrations dans le milieu de culture contenant 2% de FBS pour la détermination de la migration cellulaire avec un grossissement de 40X. (B) Analyse quantitative de la migration cellulaire. La migration cellulaire a été quantifiée en calculant le rapport entre une zone de libre-cellule et occupé cellulaire dans l'espace de la plaie. Aucune différence statistiquement significative dans tous les groupes sont apparus au même point dans le temps (P
& lt; 0,05)
l'ARNm et l'expression protéique du gène VEGF et les taux de protéine HIF-1 dans l'ARNm et des protéines de cellules traitées DMOG expression de VEGF a été quantifiée pour étudier les effets de DMOG sur l'angiogenèse au niveau moléculaire. Comme on le voit sur la Fig. 3A, DMOG augmentation de l'expression génique de façon dose-dépendante de VEGF dans les cellules RP. Traitement avec DMOG à 0,5 mM a montré une augmentation de la quantité d'ARNm de VEGF était significativement plus élevée que celle du groupe témoin, et 2 mM DMOG a provoqué une augmentation de 2,3 fois des taux d'ARNm (Fig. 3A). L'expression de la protéine VEGF est également régulée à la hausse par DMOG à des concentrations supérieures à 0,5 mM. A la différence du modèle de dose-dépendante de l'expression d'ARNm dans les cellules traitées DMOG un niveau de 3,4 fois plus élevé de protéine a été maintenue à des concentrations DMOG entre 0,5 et 2 mM (Fig. 3B). La figure 3 l'expression de l'ARNm de l'expression du gène VEGF et de la protéine du VEGF et HIF-1α dans les cellules traitées DMOG. RP cellules ont été traitées avec DMOG à des concentrations comprises entre 0 et 2 mM pendant 24 heures. Données et les barres d'erreur indiquent la moyenne ± SD de trois expériences indépendantes. * Montre l'ARNm (A) et la protéine (B) expression des niveaux qui sont significativement différentes de celles des cellules témoins non traitées (P
& lt; 0,05)
La stabilité de la protéine HIF-1α dans les cellules RP a également été affectée par DMOG . De plus grandes quantités de la protéine HIF-1α ont été détectés dans les cellules traitées avec DMOG même à 0,1 mm, ce qui ne provoquent pas un changement dans le taux de VEGF (Fig. 3B) de la protéine. Une augmentation de 2,6 fois des taux de protéine HIF-1α a été montré dans les cellules qui ont été traitées avec 0,5 mM DMOG. Aucune autre augmentation significative des niveaux de protéines a été montré à des concentrations plus élevées, ce qui indique que 0,5 mM de DMOG est suffisante pour stabiliser la totalité du montant de la protéine HIF-1α dans les cellules.
Les effets de DMOG sur palatine la cicatrisation des plaies chez les rats
dans un modèle de plaie palatine chez le rat, DMOG a été appliquée à deux concentrations: 0,5 et 1 mg /ml. Le groupe DMOG traité n'a pas montré de symptômes d'anomalie physiologique pendant la période expérimentale. Comme on le voit sur la Fig. 4A, la zone de la blessure n'a pas été complètement epithelized à 1 semaine, et a été facilement distingué du tissu intact en bon état qui était de couleur rose pâle. La superficie moyenne de la surface de la plaie dans le groupe de contrôle était de 2,4 mm 2. Dans le groupe d'essai traité avec DMOG à 1 mg /ml, la surface de la plaie a été réduite à 1,8 mm 2, ce qui est modeste, mais encore une diminution statistiquement significative. À 0,5 mg /ml, DMOG n'a pas affecté la fermeture des plaies. Figure 4 Effets de DMOG sur la cicatrisation des plaies palatine. (A) images de microscope stéréoscopiques de blessures palatines 1 semaine après la chirurgie. DMOG a été appliquée par voie topique à des groupes d'essai (b1
-b6
: 0,5 mg /ml, C1 -C6
: 1 mg /ml) et du véhicule (20 mg /ml de HA) a été appliqué aux groupes témoins (a1
-a6
) (barre d'échelle: 1 mm). (B) zone Wound calculée à partir des images de microscope stéréoscopique. * Indique une différence significative dans la zone palatine de la plaie par rapport à celle des groupes témoins non traités (P
& lt; 0,05)
Pour confirmer les résultats présentés sur la Fig. 4A, la distance maximale de la région unepithelized (distance de la bordure de la plaie) a été mesurée dans des coupes histologiques de la zone de la plaie. La distance a également été réduite chez les rats qui ont été traités avec 1 mg /ml DMOG, alors qu'il n'y avait pas de différence statistiquement significative de la distance du bord de la plaie entre le contrôle et 0,5 mg /ml DMOG groupes traités (Fig. 5). Par conséquent, DMOG clairement accéléré la cicatrisation des plaies palatine chez le rat à une certaine concentration. observation Fig 5 histologiques. (A) hématoxyline Représentant et éosine (H & amp; E) coloration photographies (un
: stratum corneum, b
: épithélium, c
: tissu conjonctif, d
: maxillaires) (barre d'échelle: 500 um). (B) Les valeurs moyennes de la largeur maximale de la plaie palatine calculée à partir des sections HE-colorées. * Indique une différence significative dans palatine largeur de la plaie des groupes DMOG-traités par rapport à celui des groupes témoins non traités (P
& lt; 0,05)
Discussion
HIF prolyl hydroxylase inhibiteurs ont été étudiés pour trouver un nouveau médicament pour le traitement de l'anémie, de maladies rénales et l'insuffisance cardiaque [19, 20]. Promotion de l'angiogenèse est un effet thérapeutique des nouveaux médicaments en développement ciblés, parce que l'angiogenèse est une étape nécessaire inévitablement dans la régénération tissulaire ou la cicatrisation des plaies.
Nous avons observé l'effet de DMOG, un inhibiteur de la prolyl hydroxylase HIF-1α, sur la cicatrisation des rat muqueuse palatine. Pour vitro
études dans, la cytotoxicité et la capacité de réguler le VEGF et HIF-1α dans les cellules provenant de tissus palatins de rat ont été étudiés. La cytotoxicité de DMOG contre les cellules palatines de rat est apparu à des concentrations relativement élevées (Fig. 1). Accumulation de la protéine HIF-1α est peu probable que la cause directe de la mort cellulaire parce que le niveau intracellulaire de HIF-1α est déjà saturée à 0,5 mM, et n'a pas été modifié jusqu'à 2,0 mM. Une étude antérieure a rapporté l'arrêt du cycle cellulaire par des inhibiteurs de PHD [21], qui fournit une explication possible pour les effets toxiques de DMOG. Depuis cytotoxicité sans aucun doute peut perturber la réparation des tissus, les concentrations DMOG pour les études in vivo doivent être soigneusement choisis pour obtenir un effet de cicatrisation des plaies. Marchbank et al. a démontré que DMOG stimule la migration de l'estomac humain et des cellules de carcinome du côlon [22]. Cependant, une diminution de la migration cellulaire unique a été observée dans l'état de certaines cellules fibroblastes [23] hypoxie. Par conséquent, l'effet de l'hypoxie ou HIF-1α accumulation sur la migration cellulaire est de type cellulaire spécifique. La motilité des cellules palatines de rat dans cette étude n'a pas été promu par DMOG (Fig. 2), ce qui suggère que la migration des cellules palatines fibroblaste n'a pas été un facteur déterminant dans la cicatrisation des cellules palatines DMOG-traités.
Auparavant, il a été démontré que les inhibiteurs de PHD réguler à la hausse l'expression du VEGF dans différents types de cellules, y compris les cellules endothéliales [24], les cellules épithéliales [25], les fibroblastes gingivaux et les ligaments parodontaux [17]. En accord avec les résultats de ces études, la présente étude a également confirmé la capacité de DMOG jusqu'à réguler l'expression de VEGF (Fig. 3) dans les cellules de type fibroblaste palatines de rat. DMOG a également induit une stabilisation de la protéine HIF-1α, et la gamme de concentrations efficaces a été recouverte sauf pour 0,1 mM à laquelle seule protéine HIF-1α mais pas VEGF a été régulée à la hausse. Ceci indique que le VEGF ne peut être induite en l'absence d'une augmentation évidente dans la quantité de HIF-1α. En outre, la stabilisation de HIF-1α est également connue pour induire transporteur de glucose-1 et de la phosphoglycérate kinase-1, ce qui peut améliorer la cicatrisation des plaies en améliorant la réépithélialisation [26].
En raison de l'état humide de la cavité buccale dans l'expérimentation animale, il était nécessaire d'employer un véhicule pour prolonger la durée résiduelle d'un médicament à la surface de la plaie. En tant que véhicule pour la délivrance d'DMOG à la muqueuse buccale dans cette étude, on utilise un hydrogel d'acide hyaluronique en raison de sa viscosité élevée et une excellente biocompatibilité; moins cytotoxique et sans effets inflammatoires ou allergiques. Cependant, l'environnement oral est extrêmement dynamique. Alimentaire, de la salive et de l'eau potable peut supprimer rapidement hydrogels application topique. Dans la présente étude, la structure poreuse de l'hydrogel d'acide hyaluronique n'a pas été observé sur les sections HE colorées, indiquant que l'acide hyaluronique et incorporé DMOG avait été lavé de la surface de la plaie avant le sacrifice au jour 7. Par conséquent, il n'a pas été possible de estimer un montant valide de DMOG pour la cicatrisation des plaies. Dans cette étude, DMOG a été appliquée à raison de 0,5 et 1 mg /ml. Une réduction modeste mais statistiquement significative dans la zone de la plaie et de la distance a eu lieu seulement à 1 mg /ml (Fig. 4 et 5). Un véhicule plus durable et une concentration accrue de DMOG pourrait encore accélérer la cicatrisation de la plaie palatine. Cependant, les résultats de cette étude ont démontré que HIF-1α est une cible puissante de la cicatrisation des plaies dans les tissus oraux.
Conclusions
L'expression de l'ARNm du VEGF dans les cellules RP a été renforcée par DMOG. VEGF et HIF-1α expression de la protéine ont également augmenté de manière significative par le traitement avec DMOG. L'application topique de 1 mg /ml DMOG avec une pommade d'acide hyaluronique considérablement accéléré la cicatrisation des plaies palatine chez le rat. Ces résultats démontrent l'utilité de DMOG pour la promotion de la cicatrisation des tissus mous buccaux
abréviations
DMEM:.
Milieu d'Eagle modifié par Dulbecco
DMOG:
Dimethyloxalylglycine
HA:
acide hyaluronique
HIF-1α:
hypoxie inducible factor-1 alpha
PHD:
prolyl hydroxylases
RP:
Rat palatine
TGF β:
facteur de croissance transformant β
VEGF:
facteur de croissance vasculaire endothéliale
Déclarations Remerciements
Cette étude a été soutenu par une subvention de la Korea Health Technology R & amp; D projet, Ministère de la Santé & amp; Bien-être, République de Corée (HI12C0735).
Intérêts concurrents
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. Les contributions
auteurs
SHY ont contribué à la planification et la conception de l'étude. ZT effectué la majeure partie de l'analyse du travail de laboratoire et des données. SSP et SKM ont participé à l'étude des animaux. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
