Résumé de l'arrière-plan
Les objectifs de cette étude étaient d'étudier la immunolocalisation de l'ezrine et sa relation avec l'expression de podoplanin dans les tumeurs odontogènes keratocystic
. Matériel et méthodes
Les expressions immunohistochimiques de ezrine et podoplanin par un épithélium odontogène ont été évalués dans les tumeurs odontogènes keratocystic utilisant des anticorps monoclonaux.: résultats
Nos résultats ont montré une forte ezrine cytoplasmique et expressions podoplanin membraneuses dans la couche épithéliale basale de tous keratocystic tumeurs odontogènes. Les expressions de Ezrin cytoplasmiques et membranaires ont également été détectées dans les couches épithéliales suprabasales de tumeurs. Différence statistiquement significative entre immunolocalisation cellulaire de ezrine et podoplanin épithélium odontogène ont été trouvés par le test de Wilcoxon (p & lt; 0,05). Aucune corrélation entre les deux protéines dans les tumeurs odontogènes keratocystic a été détectée par test de Spearman.
Conclusions
Ces résultats suggèrent que l'ezrine et podoplanin peuvent contribuer à la croissance expansive et l'invasivité locale des tumeurs odontogènes keratocystic. En outre, comme les deux protéines ont été surexprimés par un épithélium odontogène, leurs rôles possibles doivent être explorées plus avant dans les tumeurs odontogènes bénignes.
Mots-clés
Keratocystic tumeur odontogène Ezrin podoplanin électronique matériel supplémentaire
La version en ligne de cet article (doi :. 10 1186 /1472-6831-14-150) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés
Contexte
expression podoplanin a été détectée dans les cellules épithéliales de développer germe dentaire [1, 2]. et dans l'épithélium odontogène des tumeurs bénignes [3-10].
La présence de podoplanin dans les tissus humains de la dent de germes, des dents adultes et des lésions odontogéniques kystique ont suggéré que cette protéine probablement est impliquée dans les mécanismes de l'adhésion cellulaire, la transition épithéliale-mésenchymateuse et invasion, et la croissance expansive des lésions odontogènes kystiques [5].
des études antérieures réalisées dans notre laboratoire étudié l'association de podoplanin avec une activité proliférative cellulaire, déterminée par Ki-67 anticorps, en améloblastomes [7] et les tumeurs odontogènes keratocystic [9 ]. Nous ne avons trouvé une corrélation statistiquement significative dans améloblastomes, mais cette association n'a été observée dans les tumeurs odontogènes keratocystic. En outre, les deux podoplanin et Ki-67 sont des expressions plus fortes et co-localisés dans les tumeurs odontogéniques keratocystic par rapport aux kystes odontogéniques orthokeratinized, une lésion indolent. Ces fingings ont suggéré que les cellules positives podoplanin sont situés dans le centre de la prolifération cellulaire indiquant un rôle de cette protéine dans le processus d'invasion tumorale [9].
En outre, Friedrich et al. [8] a montré que modèle d'expression de podoplanin est similaire entre keratocyst tumeur odontogène diagnostiquée chez sporadique et dans le syndrome de carcinome baso-cellulaire névoïde et, les auteurs ont renforcé l'association probable de cette protéine avec invasion et locales récurrences de la tumeur.
Résultats récents prouvent que podoplanin est important de conduire la migration cellulaire directionnelle dans les cellules épithéliales et tumorales [11]. Ensuite, la capacité à remodeler podoplanin cytosquelette et former l'extension de la membrane analogue à filipodes [12] a été suggérée comme facteur important dans la circulation des cellules épithéliales odontogéniques [6]. Cette motilité cellulaire induite podoplanin-travers de l'actine cytosquelette réarrangement semble dépendre de l'interaction avec l'ezrine cytoplasmique [13], membre du MCE (ezrine, radixine, moesine) protéine de la famille des protéines [14, 15].
La étude actuellement a été conçu pour analyser le immunolocalisation de l'ezrine et sa relation avec l'expression de podoplanin dans les tumeurs odontogènes keratocystic. Au meilleur de notre connaissance, ce rapport est le premier de l'ezrine immunocoloration dans une tumeur odontogène.
Méthodes
Patients et échantillons tumoraux
Tous les échantillons chirurgicaux de tumeur odontogène keratocystic analysés dans cette étude ont été obtenues auprès du laboratoire de pathologie, Bauru School of Dentistry, Université de São Paulo, entre 2002 et 2010. les critères d'inclusion étaient: i) les patients ayant un diagnostic de tumeur odontogène keratocystic basée sur la classification de l'Organisation mondiale de la santé [16], déterminé par la somme de la clinique, radiographique, et les données microscopiques; ii) la disponibilité du bloc de paraffine avec une quantité suffisante et représentative de la tumeur odontogène pour l'analyse microscopique. En appliquant les critères d'inclusion, 18 tumeurs odontogènes keratocystic ont été sélectionnés pour l'étude des podoplanin et immunocoloration ezrine. Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la recherche de l'École Bauru de dentisterie, Université de São Paulo (processus # 85612/2012).
Immunohistochimie
formaline fixe 3 um sections de tumeurs odontogènes keratocystic ont été obtenus à partir de la pathologie archives pour l'analyse immunohistochimique des Ezrin et podoplanin expressions par l'épithélium odontogène. Après la récupération de l'antigène en utilisant 10 mM de tampon citrate, pH 6,0, dans un autocuiseur domestique (modèle Eterna 4½ L; Nigro, Araraquara, Brésil) pendant 4 min, l'activité peroxydase endogène a été bloquée par incubation dans 3% H
2O 2 pendant 20 minutes. Chaque section a été incubé pendant une nuit à 48 ° C avec l'anticorps primaire monoclonal anti-podoplanin (D2-40 clone, le code # 3619-1; Dako North America, Inc., Carpinteria, CA, USA), dilution 1: 200 ou anti- anticorps ezrine (Dako North America, Inc., CA, USA), dilution 1: 1000, dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec de l'albumine de sérum bovin (. cat # A2153, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) solution pour bloquer une réaction non spécifique. Ensuite, chaque section a été incubé avec Advance Système HRP Link (cat. N 4067, Dako Amérique du Nord, Carpinteria, CA, USA) pendant 30 min à 37 ° C. Les deux anticorps ont été détectés en utilisant 3,30-diaminobenzedine tétrachlorhydrate (DAB, cat. # D-5637, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). sections de tumeur ont été colorées avec l'hématoxyline de Mayer avant d'être déshydraté et le couvercle glissé. amygdales palatines et l'intestin ont été utilisées comme témoin positif pour podoplanin et ezrine, respectivement. Pour un contrôle négatif, l'anticorps primaire a été omis lors de la coloration immunohistochimique. Les Ezrin et podoplanin expressions par l'épithélium odontogène des 18 tumeurs odontogènes keratocystic ont été évaluées dans dix champs microscopiques numériquement capturées à l'aide d'une caméra Axiocam (Axiocam MR3, Zeiss, Jena, Allemagne) attaché à un microscope optique et enregistré par le logiciel Axiovision (Axiovision 4.7; Zeiss). Un score pour Ezrin et podoplanin immunomarquages exprimés par l'épithélium odontogène a été basée sur: a) l'intensité de l'immunomarquage dans les cellules odontogéniques épithéliales (0 = absent, 1 = faible, 2 = modéré, 3 = forte, et 4 = très forte) et (b) le pourcentage de cellules positives (0 odontogéniques = 0% de cellules positives, 1 = & lt; 25% de cellules positives, 2 = 25 à 50% de cellules positives, 3 = 50 à 75% de cellules positives, et 4 = & gt; 75% de cellules positives). Le score final immunocoloration a été déterminé par la somme de (a) + (b). Les notes finales allaient de 0 à 8 (0 = absent, 1-4 = faible, et 5-8 = forte). La différence et la corrélation entre l'expression membraneuse ou cytoplasmique de ezrine et podoplanin exprimés dans les tumeurs odontogènes keratocystic ont été déterminées par le test de Wilcoxon et le coefficient de corrélation de Spearman, respectivement. Le niveau de signification a été fixé à 5% pour tous les tests de. Résultats
caractéristiques cliniques
Notre échantillon était composé de seize patients diagnostiqués avec des tumeurs odontogènes keratocystic (neuf d'entre eux étaient des femmes et sept hommes). l'âge du patient variait de 9 à 68 ans (moyenne 28 ans) et ils étaient à prédominance blanche (75%). La plupart des tumeurs étaient situées à la région postérieure de la mandibule (62,5%), suivie par maxillaires (25%), et dans 3 cas la localisation n'a pas été précisée par le chirurgien. Du total de 16 patients atteints de tumeurs odontogènes keratocystic, 4 d'entre eux avaient le syndrome de Gorlin-Goltz et à partir de ceux-ci, 2 avaient des lésions multiples, mais dans différentes sections locales et des périodes.
Expression podoplanin par des tumeurs odontogènes keratocystic
La couche basale de la muqueuse buccale normale présentée positivité membraneuse podoplanin ainsi que les vaisseaux lymphatiques dans le tissu conjonctif sous-jacent, ce qui confirme l'intégrité de la réaction immunohistochimique. L'expression membranaire et cytoplasmique de façon intensive podoplanin a été concentré à la couche basale de l'épithélium dans toutes les tumeurs odontogéniques keratocystic (tableau 1). Les couches supérieures de l'épithélium ont été négatifs pour cette protéine (figure 1) et les cellules périphériques de kystes filles fortement exprimé cette expression de podoplanin cytoplasmique protein.Table 1 membraneuse et dans 18 tumeurs odontogènes keratocystic
podoplanin
membraneuse
cytoplasmique
p *
N
%
N
%
Absent
0
0
0
0
1.000
faible
0
0
1
5,56
fort
18
100
17
94.44
TOTAL
18
100
18
100
Bauru School of Dentistry - Université de São Paulo, São Paulo 2002 à 2010.
* test Wilcoxon; ρ = niveau de signification statistique de 0,05.
Figure 1 Expression de podoplanin dans la tumeur odontogène keratocystic. Positivity limitée à la couche basale (IHQ, 400 ×).
Expression Ezrin par des tumeurs odontogènes keratocystic
Ezrin a été fortement exprimé dans la membrane cytoplasmique de la couche épineuse de la muqueuse buccale normale. La plupart des tumeurs odontogènes keratocyst cellules épithéliales (83,33% des cas) fortement exprimé ezrine cytoplasmique (tableau 2). Le ezrine cytoplasmique a souvent été détectée dans la couche basale de l'épithélium et plus ezrine positivité membraneuse peut être noté dans les couches de l'épithélium supra-basale. L'expression de l'ezrine membraneuse absente ou faible par les cellules épithéliales a été observée chez environ 61% des tumeurs. Les cellules épithéliales odontogènes de kystes filles ont également montré ezrine cytoplasmique et membraneuse (Figure 2) .Table 2 membraneuse et d'expression de l'ezrine cytoplasmique dans 18 tumeurs odontogènes keratocystic
EZRIN
membraneuse
cytoplasmique
p *
N
%
N
%
Absent
10
55.56
2
11.11
0,007
faible
1
5,56
1
5,56
fort
7
38.88
15
83,33
TOTAL
18
100
18
100
Bauru School of Dentistry - Université de São Paulo, São Paulo, 2002 à 2010.
* test Wilcoxon; ρ = niveau de signification statistique de 0,05.
Figure 2 Expression de l'ezrine dans la tumeur odontogène keratocystic. Remarque positivité cytoplasmique dans basales et supra-basale couches et d'expression membraneuse dans le niveau le plus superficiel de l'épithélium odontogène (IHQ, 400 ×).
Relation entre Ezrin et podoplanin expressions dans les tumeurs odontogènes keratocystic
Le test de Wilcoxon a été utilisé pour comparer l'expression subcellulaire de ezrine et podoplanin dans les tumeurs odontogènes bénignes. Les différences entre ezrine membraneux et membraneux (p = 0,003) ou cytoplasmique (p = 0,003), les expressions podoplanin étaient statistiquement significatives (Tableau 3). En outre, il n'y avait pas de différences statistiquement significatives entre les ezrine cytoplasmique et membraneuse (p = 0,109) ou cytoplasmiques expressions (p = 0,201) podoplanin, comme llustrated dans l'essai Tableau 3. Le Spearman n'a pas démontré une corrélation statistiquement significative entre podoplanin et ezrine membraneuse ou cytoplasmique expressions dans les tumeurs odontogènes keratocystic (tableau 4) .Table 3 Comparaison entre membraneuse et podoplanin cytoplasmique et expression ezrine dans 18 tumeurs odontogènes keratocystic
podoplanin
Ezrin
M (%)
C (%)
M (%)
C (%)
M PO
M PO
C le PO
C PO
X
X
X
X
M EZ
C EZ
M EZ
C EZ
Absent
0
0
55.56
11.11
p = 0,003
p = 0,109
p = 0,003
p = 0,201
faible
0
5,56
5,56
5,56
fort
100
94.44
38.88
83,33
TOTAL
100
100
100
100
Bauru School of Dentistry - Université de São Paulo, São Paulo, 2002 à 2010.
test de Wilcoxon; ρ = niveau de signification statistique de 0,05. PO: podoplanin; EZ: ezrine; M: membraneuse; C:. Cytoplasmique
Tableau 4 membraneuse et la corrélation cytoplasmique entre podoplanin et d'expression ezrine dans 18 tumeurs odontogènes keratocystic
membraneuse
cytoplasmique
podoplanin
podoplanin
membraneuse ezrine
r = 0,000
r = -0,293
p = 1.000
p = 0,293
cytoplasmique ezrine
r = 0,000
r = -0,108
p = 1.000
p = 0,670
Bauru School of Dentistry - Université de São Paulo, São Paulo, 2002 à 2010.
r = coefficient de corrélation de rang de Spearman; ρ = niveau de signification statistique de 0,05. Discussion de la
Ces dernières années, l'intérêt pour l'expression de podoplanin dans les tumeurs odontogènes bénignes a considérablement augmenté [3, 4, 6-10, 17]. Il a été suggéré que cette protéine participe au mouvement des cellules épithéliales à travers le cytosquelette d'actine odontogéniques réarrangement [6, 9]. Bien que la motilité cellulaire odontogène induite par podoplanin peut dépendre de son interaction avec l'ezrine activé, la connexion entre les deux protéines n'a pas encore été étudiée dans les tumeurs odontogènes.
Nos résultats concernant l'immunolocalisation de podoplanin a montré de fortes expressions membraneuses et cytoplasmiques de la protéine détectée principalement dans la couche basale de l'épithélium odontogène, même dans les vésicules filles. Dans la muqueuse buccale normale, l'expression de podoplanin était membraneuse et concentré à la couche épithéliale basale. Nos résultats corroborent ceux des auteurs précédents de la [4, 8-10, 17].
Depuis Okamoto et al [4] ont proposé, pour la première fois un rôle possible du podoplanin dans l'invasivité des tumeurs des tumeurs odontogéniques keratocystic, en outre des enquêtes ont été menées afin de comprendre la fonction exacte de cette protéine dans la pathogenèse et la croissance de ces tumeurs bénignes [5, 8-10, 17]. Tsuneki et al. [17] a vérifié que les cellules positives podoplanin sont situés dans le centre de la prolifération cellulaire des tumeurs odontogéniques keratocystic suggérant que cette protéine agit comme un des régulateurs clés du processus de prolifération de cette tumeur. De même, la participation de podoplanin dans l'invasion locale des tumeurs odontogènes a été renforcée par nos résultats précédents [9]. Nous avons démontré la corrélation entre l'expression podoplanin et l'indice de prolifération cellulaire dans les tumeurs odontogéniques keratocystic [9]. En outre, une étude intéressante de Zhang et al [10] ont montré que dans les tumeurs odontogènes keratocystic, un traitement conservateur par décompression, il y avait une perte ou une réduction de l'expression de podoplanin significative dans l'épithélium odontogène. Dans radiculaires et folliculaire kystes, Zustin et al [5] expression trouvée de podoplanin plus homogène, diffusée au cytoplasme et membrane, basale épithéliale et la couche de parabasale. Comme podoplanin est en corrélation avec d'autres protéines impliquées dans la prolifération cellulaire et l'invasion tumorale [9, 17], la régulation à la baisse peut être due à une activité limitée de l'épithélium odontogène après l'approche chirurgicale [10]. Le plus Malgré le fait que la fonction exacte de podoplanin dans les tumeurs odontogènes est mal comprise et largement inconnu, les résultats de la présente étude, pris ensemble avec notre enquête précédente [9] et ceux d'autres auteurs [5, 17, 8, 10] suggèrent fortement que cette protéine est impliquée dans locale l'invasion et la croissance expansive des tumeurs odontogènes keratocystic, probablement orchestrer l'activité du cytosquelette épithéliale odontogène.
un mécanisme possible suggéré est que podoplanin lie ezrine et, en aval, suit la phosphorylation de GTPase RhoA [7]. Cette voie de signalisation favoriserait le réarrangement du cytosquelette d'actine et induire la formation de projections de filopodes-like, la promotion du mouvement cellulaire [13]. Ainsi, afin de vérifier si podoplanin et ezrine sont co-localisés dans les tumeurs odontogènes keratocystic, nous avons conçu la présente étude.
Ezrin, membre ERM famille de protéines, exerce des fonctions primordiales liées à la régulation du mouvement cellulaire et de la structure par transduction les signaux entre la membrane plasmique et le cytosquelette d'actine [14]. Ezrin est essentiel pour de nombreux processus cellulaires physiologiques, y compris la régulation de cytosquelette d'actine, le maintien de la forme des cellules, l'adhérence, la motilité et la modulation des voies de transduction du signal [14].
Dans la tête et du cou carcinomes épidermoïdes, ezrine a été identifiée comme une molécule clé dans la progression tumorale et le comportement métastatique des cellules néoplasiques, et il a été corrélée à un mauvais pronostic [18-21], de manière similaire à podoplanin [22]. Cependant, au meilleur de notre connaissance, ceci est la première preuve que confirme l'immunoexpression de l'ezrine dans les tumeurs odontogènes keratocystic bénignes.
Les résultats présentés ici ont montré l'absence de l'ezrine membraneuse dans 55,56% des tumeurs odontogènes keratocystic et, lorsqu'il est présent, cette protéine a été observée principalement dans la membrane des couches non proliférante supra-basales (Figure 2). À partir de ce que nous pouvons supposer que l'ezrine peut être promouvoir l'adhésion cellulaire, comme observé de manière similaire dans la non-prolifération des cellules squameuses de la muqueuse buccale humaine normale [18, 20, 21].
En outre, la plupart des tumeurs odontogéniques (83,33% ) ont montré une forte expression de ezrine cytoplasmique en particulier dans la couche basale de l'épithélium odontogène. Fait intéressant, l'ezrine cytoplasmique reflète son actif [18, 20, 21] forme et, dans le cancer par voie orale, ce modèle de ezrine cytoplasmique a été associée à un phénotype invasif et un comportement plus agressif des cellules malignes [18-21]. Ces résultats suggèrent que l'ezrine activé est nécessaire pour la prolifération et /ou l'invasion des cellules odontogéniques une fois sa positivité cytoplasmique a été principalement dans les couches basales de tumeurs odontogènes keratocystic, la région responsable de la croissance de la tumeur.
La distribution de l'ezrine dans tumeurs keratocystic odontogéniques était plus hétérogène que celle de podoplanin (tableaux 1 et 2) et des différences statistiquement significatives ont été observées entre la localisation de l'ezrine membraneuse et podoplanin cytoplasmique ou membraneuse (tableau 3). Il a été précédemment rapporté que l'ezrine est nettement phosphoryle en présence d'une surexpression podoplanin [13]. Cette interaction entre podoplanin et ezrine est responsable de la plupart des effets sur le cytosquelette, ce qui contribue à une augmentation de la motilité cellulaire [13]. En outre, il est prouvé que la fonction de gestion des risques dans l'organisation du cytosquelette est médiée par sa capacité à lier l'actine et de réguler GTPase RhoA phosphorylation [13]. Fait intéressant, les tumeurs ont présenté une forte odontogéniques keratocystic podoplanin membraneux et l'expression de l'ezrine cytoplasmique, qui correspondent aux formes activées des deux protéines. La podoplanin forme activée (membraneuse) a été principalement dans la couche basale, indiquant une co-localisation de ezrine actif et actif-podoplanin dans les zones très actives de tumeurs odontogènes keratocystic. Conclusions de Toutefois, cette corrélation ne soit pas statistiquement significative probablement en raison du faible nombre de tumeurs négatives (0 pour podoplanin membraneuse et 2 pour ezrine cytoplasmique), qui ne permet pas d'établir une relation associative (tableau 4).
en résumé, nous présentons d'abord que ezrine présente une forte expression membraneuse dans la couche supra-basale et une forte expression cytoplasmique dans la couche basale de tumeurs odontogènes keratocystic. Ainsi, notre enquête suggère un rôle pour ezrine et podoplanin dans les tumeurs odontogènes keratocystic et leurs interactions moléculaires doivent être explorées plus avant dans ces types de tumeurs
. Consentement
Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique et de recherche de Bauru School of Dentistry - Université de São Paulo. CAAE:. # 03924312.0.0000.5417
abréviations
ERM:
Ezrin, radixine et moesine
GTP-ase:
Guanosine- triphosphatase.
Déclarations
Remerciements
Nous tenons à remercier la Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (subventions # 2012 /13411-6 et # 2013 /16999-7) et Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico de soutenir cette étude.
auteurs fichiers originaux soumis pour les images
Voici les liens vers les auteurs originaux soumis les fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12903_2014_474_MOESM2_ESM.tif Auteurs '12903_2014_474_MOESM1_ESM.tif Auteurs fichier d'origine pour la figure 2 Intérêts concurrents
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. Les contributions
auteurs
ODT a contribué à la conception et conception de ce projet, l'interprétation critique des données et de la révision critique du manuscrit. RCSD effectué des données d'acquisition, d'analyse et d'interprétation. AA a contribué à l'analyse des données, la rédaction et la soumission du manuscrit. TKC a également conçu le projet, a contribué à l'acquisition, les données d'analyse et la révision du manuscrit. NS a contribué à la conception du projet et aussi avec des profils immunohistochimique pour cette étude. LJRP a contribué à la conception de l'étude, l'analyse critique des statistiques et des données d'interprétation. SFA fourni l'infrastructure auxiliaire nécessaire pour effectuer l'étude et a contribué à la conception et la conception du projet. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
