Résumé de l'arrière-plan
Candida albicans
est une levure diploïde que dans certaines circonstances peut causer des infections par voie orale ou de l'oropharynx. Cette enquête visait à étudier la prévalence de Candida spp. et d'analyser les génotypes ABC de 76 isolats cliniques de C. albicans
obtenu à partir de la cavité buccale des patients transplantés rénaux à partir de deux régions géographiques distinctes du Brésil.
Méthodes
Nous avons tapé 48 souches avec ABC génotypage et Microsatelitte à l'aide de l'amorce M13 et testé trois facteurs de virulence in vitro:. Résultats de l'activité de phospholipase, morphogenèse et la capacité de se soustraire à partir de polynucléaires neutrophiles phagocytose
C. albicans
était l'espèce la plus répandue (86,4%), suivis par C. tropicalis
(4,5%). C. albicans
génotype A était la plus fréquente (58 isolats; 76,4%), suivie par le génotype C (15 isolats; 19,7%) et le génotype B (3 isolats; 3,9%). Lorsque la technique des microsatellites avec l'amorce M13 a été appliquée, 80% des isolats du Sud ont été placés dans le même cluster. La majorité des souches Génotype C ont été regroupées au sein de deux groupes différents. Conclusions du Génotype C était considéré comme plus résistant à l'attaque que PMN génotypes A et B. Souches isolées du sud du Brésil ont montré également une meilleure capacité à combattre les PMN phagocytose.
Nous avons trouvé un taux élevé de C. albicans
le génotype C souches isolées de la cavité orale de ce groupe de patients. Les souches de cette étude caractérisée C. albicans orales isolées des receveurs de transplantation rénale et contribueront à une meilleure compréhension de la pathogenèse de la candidose orale.
facteurs Mots clés receveurs de greffe
Candida spp
candidose orale du rein génotypage Virulence matériel électronique supplémentaire
la version en ligne de cet article (doi:. 10 1186 /1472-6831-14-20) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés
Contexte
Malgré le fait. que Candida spp. appartiennent à la microbiote orale normale, vivant sur la langue, les gencives, le palais et la salive des individus en bonne santé que les levures commensales, ils peuvent causer des infections buccales ou oropharyngés [1, 2]. Candida spp. ont été isolés de 40 à 60% de la bouche en bonne santé, alors que la candidose buccale est plus fréquente chez les personnes immunodéficientes, celles souffrant de maladies sous-jacentes graves, et les porteurs de prothèses supérieures [3, 4].
Malgré le fait que d'autres Candida moins virulent
espèces telles que C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei
et C. dubliniensis
ont également été isolé à partir de la salive des patients avec ou sans la candidose orale, C. albicans
est toujours les espèces les plus fréquentes associées à des lésions buccales [5].
Plusieurs facteurs peuvent contribuer à la transition à partir de levures commensales à des formes pathogènes qui sont liés au système immunitaire de l'hôte associé à une altération de la virulence du micro-organisme. Les principaux facteurs de virulence de C. albicans
comprennent bourgeonnent à hyphe transition (également appelé morphogenèse), l'adhérence à l'épithélium humain et les cellules endothéliales, la formation de biofilms, la capacité à sécréter des enzymes hydrolytiques (principalement des protéinases et des phospholipases), le changement phénotypique (transition blanc opaque) ainsi que l'évasion de l'hôte des cellules immunitaires [6, 7].
Certaines études ont évalué C. albicans
ABC génotypes isolés de la cavité buccale de personnes différentes et les résultats semblent être très variable en fonction de la population évaluée. Par exemple, une étude avec 11 patients diabétiques atteints de parodontite a révélé que 51,6% subgingivaux C. albicans
isolats appartenaient au génotype B [8], tandis que d'autres enquêtes a trouvé le génotype A comme prédominant [9].
La prévalence de la candidose buccale chez les transplantés rénaux décrits dans les plages de la littérature de 9,4% à 46,7% [10-12]. Une étude réalisée au Mexique par De La Rosa-Garcia et al [11], rapporte 18,7% des cas de candidose orale dans un total de bénéficiaires transplantés 90 rénaux.
Notre groupe a déjà publié une comparaison de certains facteurs de virulence (biofilm la production, l'adhésion aux cellules épithéliales buccales humaines et de l'activité de proteinase) chez C. albicans
et non-C. Candida albicans
isolats obtenu à partir de la cavité buccale des receveurs de transplantation rénale à partir de Natal, Rio Grande do Norte, Brésil [13]. Cette étude est un suivi de cette publication précédente, y compris d'autres souches appartenant à une autre région géographique du Brésil. En outre, d'autres caractéristiques de virulence ont été étudiés. Par conséquent, les objectifs de la présente étude étaient de déterminer la répartition des espèces de Candida et génotypique caractériser 48 souches
C. albicans isolées à partir de la cavité buccale de 154 transplantés rénaux bénéficiaires de deux régions géographiques différentes du Brésil (Nord-Est et du Sud ). En outre, les souches ont été phénotypiquement caractérisées par la capacité d'exprimer les facteurs suivants de virulence in vitro. La sécrétion de la phospholipase, la transition à partir de cellules de levure à hyphes (morphogenèse) et la capacité de résister à la phagocytose par les polynucléaires neutrophiles
Méthodes
souches sélection
au cours d'un 3 mois de période, 154 patients provenant de deux régions géographiques différentes du Brésil (111 de Natal, Rio Grande do Norte et 43 de Maringa, Paraná) ont été soumis à un examen clinique de la cavité buccale pour le diagnostic de la candidose, selon les critères établis pour les lésions buccales chez les patients VIH recommandées par l'EC-Centre et classifications Organisation mondiale de la santé [14]. Seuls les patients qui ont accepté de prendre part à une étude confidentielle de surveillance, conformément au comité éthique de la recherche locale de l'hôpital universitaire Onofre Lopes, approuvé sous le numéro 152/07, ont été inclus dans cette étude. Souches isole de la colonisation par voie orale (sans symptômes) ou lors d'épisodes de candidose orale ont été évalués dans cette étude. Pour les études de génotypage et de virulence, nous avons choisi au hasard 48 souches cliniques de C. albicans
(38 à partir de Natal, Rio Grande do Norte et 10 de Maringa, Paraná). Tous les isolats sont décrits dans le tableau 1. Les échantillons ont été stockés sur YPD glycérol (10 g /L d'extrait de levure, 20 g /L de peptone, 20 g /L de glucose et 3% de glycerol) à -80 ° C au Laboratorio de Micología Médica e moléculaire, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Brésil. C. albicans
ATCC90028 et SC5314 ont été inclus dans cette étude comme référence strains.Table 1 Les données démographiques des receveurs de transplantation rénale à partir de Natal, RN et Maringa, PR, Brésil, selon le sexe, l'âge, et les variables de la maladie sous-jacente
Natal (n,%)
Maringa (n,%)
total (n,%)
Sex
Homme
64 (73,6)
23 (26,4)
87 (100)
Femme
47 (70,1)
20 (29,9)
67 (100)
Age
12-18 ans
6 (85,7)
1 (14.3)
7 (100)
19-34 ans
44 (81,5)
10 (18,5)
54 (100)
35-64 ans
59 (64,8)
32 (35,5)
91 (100)
65 ans ou plus
2 (100)
0 (0)
2 (100)
maladie sous-jacente
néphropathie diabétique
8 (66,7)
4 (33,3)
12 (100)
hypertension artérielle
47 (85,4)
8 (14,6)
55 (100)
glomérulonéphrite
23 (76,7)
7 (23,3)
30 (100)
maladies rénales polykystiques
6 (66,7)
3 (33,3)
9 (100)
Autre
27 (56.25)
21 (43.75)
48 (100)
échantillons collection et levures identification
échantillons contenant 2 ml de salive ont été prélevés chez tous les patients, par la stimulation précédente avec les gommes à mâcher. Lorsque les lésions étaient présents, un tampon stérile a été frotté sur la surface de la muqueuse de la cavité buccale. Ensuite, 100 ul des suspensions de cellules ont été inoculées sur la surface de la gélose Sabouraud Dextrose (SDA; Oxoid, Royaume-Uni) a été ajouté 300 ug /ml de Chloramphénicol (Park-Davis), en utilisant une boucle Drigalsky. Les plaques ont été incubées à 37 ° C pendant 48 heures. Les colonies de levures ont été étalées sur CHROMagar Candida® (CHROMagar Microbiologie, Paris, France) pour vérifier la pureté et le dépistage des différentes colonies de couleur. L'identification des espèces est basée sur les caractéristiques des cellules observées au microscope après culture sur gélose de semoule de maïs ajouté Tween 80, ainsi que l'assimilation et l'essai de fermentation et ID32C Système (bioMérieux Marcy l'Etoile, France), chaque fois qu'il était nécessaire [15]. Les souches appartenant à l'espèce Candida parapsilosis complexes ont été identifiées précédemment avec des méthodes moléculaires [13]. L'extraction de l'ADN de
C. albicans
cellules de C. albicans ont été cultivées pendant une nuit dans un milieu liquide YPD ( dextrose 20 g /l, peptone 20 g /L, extrait de levure 10 g /L) mis en incubation à 30 ° C en rotation à 200 tours par minute dans un agitateur giratoire (TE-420, Tecnal ® Piracicaba, Brésil). L'ADN a été extrait en utilisant le réactif ultra échantillon PrepMan de préparation (Applied Biosystems, Foster City, CA) selon les instructions du fabricant. concentration d'ADN génomique et la pureté ont été vérifiées avec un instrument de NanoDrop (Thermo Scientific, Amersham Pharmacia Biotech, Wilmington, DE, USA).
microsatellites tapant PCR et ABC génotypage
microsatellites typage a été réalisée en utilisant le M13 primaire (5 'GAGGGTGGCGGTTCT --3 ') (TID) comme décrit précédemment [16]. ABC génotypage a été réalisée avec les amorces suivantes: CAINT- L (5'-ATAAGGGAAGTCGGCAAAATAGATCCGTAA-3 ') et CA-INT-R (5'-CCTTGGCTGTGGTTTCGCTAGATAGTAGAT-3') [17]. En bref, 1,0 ul d'ADN de 40 ng /ul ont été ajoutés à 29 PCR Master Mix (Promega) dans un volume final de 25 ul. Les échantillons ont été amplifiés dans un thermocycleur (Amplitherm TX96, USA) en utilisant les paramètres de cyclage suivants: un cycle initial de 94 ° C pendant 3 minutes, suivi par 30 cycles de 1 min à 94 ° C, 1 min à 57 ° C, 1 min à 72 ° C et un cycle final de 5 min à 72 ° C. Pour microsatellites frappe, 1,0 ul d'ADN de 40 ng /pl, 2,5 pl de tampon 10X PCR (100 mM de Tris-HCl, pH 8,3, KCl 500 mM, MgCl 3,5
2), 5 ul de dNTPmix (100 mM chaque dNTP), 1,0 pi de chaque amorce (50 pmol /pl) 0,13 pi de tween 20 et 1,0 unité de Taq ADN polymerase ont été ajoutés à un volume final de 25 ul. Quarante-cinq cycles d'amplification ont été réalisées en utilisant les mêmes paramètres de cyclage précédemment décrits, sauf que la température de recuit était de 36 ° C pour le typage des microsatellites. Les produits de PCR sont de taille séparées par électrophorèse sur gel d'agarose et le gel a été coloré dans une /ml de bromure d'éthidium solution tampon 0,5 pg (TAE).
analyse des données microsatellites assistée par ordinateur des images à l'gel ont été analysées avec le GelCompar II logiciel, la version 4.5 et BioNumerics (Applied Maths, Kortrijk, Belgique). Les similitudes entre les profils ont été calculées en utilisant le coefficient Dice pour générer les matrices de coefficients de similarité pour Dendrogramme constructions. Pour le profil clustering, la méthode non pondérée paire-groupe avec des moyennes arithmétiques a été utilisé avec une tolérance de 2%.
Tests pour la formation d'hyphes
Un montant initial de 10 6 cellules /ml dans YPD + 20% de FBS (sérum fœtal bovin, Sigma-Aldrich, Brésil) a été incubé à 37 ° C, avec gyratory agitation à 200 tours par minute. Après 3 heures d'incubation, des échantillons des cultures ont été mélangées avec un volume égal de 10% de formaldéhyde pour arrêter le développement et l'indice moyen de morphologie (IM) a été déterminée [18]. Les valeurs proches de 1 indiquent une population de cellules et des valeurs proches de 4 levure sphéroïdales indiquer une population de véritables cellules hyphes, avec des valeurs comprises entre 1 et 4 indiquant morphologies mixtes ou pseudohyphal.
Phospholipase l'activité de phospholipase de test a été estimé par le procédé jaune d'agar-agar d'oeuf [19], avec des inoculums préparés à partir du jour au lendemain NGY (Neopeptone (Difco, Detroit, MI), 1 g /l, du glucose à 4 g /l et extrait de levure 1 g /L) des cultures normalisé à 2 × 10 5 cellules /ml.
Candida albicans tué par des polynucléaires neutrophiles
PMN fraîchement isolés à partir d'échantillons sanguins d'un seul volontaire sain le jour de l'expérience [20] ont été mises en suspension dans un milieu essentiel minimal de Eagle (Gibco) + 20 mM de HEPES, pH 7,2, et normalisé à 8 x 10 5 PMN /ml. C. albicans
cellules cultivées pendant la nuit dans NGY lavées et remises en suspension à 5 x 10 6 levures /ml dans HEPES tamponné milieu essentiel minimal de Eagle contenant un dixième volume de plasma humain frais. Des volumes égaux de PMN et de levure suspensions ont été mélangées et incubées à 37 ° C pendant 3 heures avec rotation à 50 tours par minute. La phagocytose de C. albicans
ont été établies en comptant en triple le nombre de levures intérieur ou attachées dans 100 PMN [21]. L'analyse statistique
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel statistique "GraphPad", version 3.0 . Les résultats ont été présentés en tant que moyenne ± écart-type, et les différences ont été analysées par le test de Mann-Whitney. Résultats de Pour toutes les analyses, P a été considérée comme une valeur par défaut de 0,05 et l'intervalle de confiance de 95%.
patients des données cliniques et démographiques de la patiente de données démographiques sont résumées dans le tableau 1. Pour les deux régions, la la majorité des patients souffraient d'hypertension artérielle que la maladie sous-jacente la plus fréquente. En outre, la classe d'âge le plus fréquent était âgé de 35 à 64 ans (tableau 1).
Microbiologie profilage de Candida spp. dans la candidose orale
Des souches obtenues à partir de Natal, RN (Nord-Est), il était possible d'isoler des levures de 70 sur 111 patients (63,1%), tandis que de Maringa, 12 sur 43 (27,5%) Candida
spp cultures positives ont été obtenues. Répartition des espèces pour les deux régions est décrite dans le Tableau 2. C. albicans
a été l'espèce la plus prédominantes trouvées dans les deux villes, suivie par C. tropicalis
. Dans un seul patient à partir de Maringa, il était possible d'isoler trois souches appartenant à différentes espèces de Candida
(C. albicans
, C. glabrata
, C. tropicalis
) .Table 2 Répartition des espèces de Candida spp. isolé de la cavité buccale des receveurs de transplantation rénale de deux régions différentes géographiques du Brésil: Natal, RN et Maringa, PR
espèces
Natal (n,%)
Maringá (n,% )
total (n,%)
Candida albicans
59 (77,6)
17 (22,4)
76 (100)
Candida dubliniensis
2 (100)
0 (0)
2 (100 )
Candida glabrata
2 (66,7)
1 (33,3)
3 (100)
Candida tropicalis
3 (75)
1 (25)
4 (100)
Candida orthopsilosis
2 (100)
0 (0)
2 (100)
Candida metapsilosis
2 (100)
0 (0)
2 (100)
total
69 (78,4)
19 (21,6)
88 (100)
noter, un seul échantillon de chaque patient a été recueilli, sauf pour trois patients différents de la région sud du Brésil. Du patient 37, la souche 06S a été obtenu à partir de la salive, tandis que la souche 06 L de lésion buccale. Patient 38 avait deux souches
C. albicans collectées à partir de la même lésion, montrant deux phénotypes clairement différentes (10S, lisses et 10R, avec des colonies rugueuses). 40 patients a révélé deux lésions différentes et deux souches ont été obtenues à partir de la une languette et une autre de la gencive (15 T et 15G, respectivement) en plus d'une souche obtenue à partir de la salive (15S).
ABC typage de Candida albicans
ADN de toutes les 76 souches de C. albicans
et les souches de référence ATCC90028 et SC5314 a été soumis à ABC dactylographie. Génotype A est le plus répandu avec 58 isolats (76,4%), suivie par le génotype C, avec 15 souches (19,27%) et le génotype B, avec 3 isolats (3,9%; tableau 3). La même tendance a été observée lorsque les souches obtenues à partir de chaque région ont été analysées séparément: Dans le nord-est du Brésil, C. albicans
génotype A est le plus répandu, avec 42 isolats (71,2%), suivie par Genotype C (n = 14 isolats, 23,7%) et génotype B, avec 3 souches (5,1%). L'incidence plus élevée du génotype A a également été trouvé dans le Sud du pays avec 16 isolats (94,1%), suivie par le génotype C (n = 1 isolat; 5,9%). C. albicans
génotype B n'a pas été observé pour les isolats obtenus à partir de cette région (tableau 3) .Table 3 Les patients inclus dans cette étude, la région géographique ABC génotypage et la virulence des attributs de Candida albicans
nombre Isoler
état clinique
Procedence
ABC typage
activité phospholipase PZ (cm)
Morphologie Index (MI)
Pas de C. albicans cellules phagocytées par 100 PMN * (%)
1
colonisation
Natal
B
0,6 ± 0,07
2,46 ± 0,70
134 ± 15,3
2
colonisation
Natal
A
0,55 ± 0,04
3,43 ± 0,77
115 ± 14,6
3
colonisation
Natal
A
0,48 ± 0,06
3,22 ± 0,64
66 ± 7,9
5
infection
Natal
C
0,58 ± 0,02
2,23 ± 0,57
98 ± 6,7
6
colonisation
Natal
A
0,53 ± 0,01
2,24 ± 0,51
100 ± 12,5
8
colonisation
Natal
A
0,57 ± 0,04 ± 1,86
0,43
130 ± 19
10
infection
Natal
B
0,56 ± 0,12
2,17 ± 0,62
166 ± 8,4
11
colonisation
Natal
C
0,58 ± 0,08
2,15 ± 0,77
28 ± 3,5
12
infection
Natal
A
0,54 ± 0,02
2,46 ± 0,56
150 ± 11,1
13
colonisation
Natal
C
0,6 ± 0,03
2,17 ± 0,65
126 ± 31,6
17
colonisation
Natal
A
0,52 ± 0,03
3,63 ± 0,63
98 ± 20,2
20
colonisation
Natal
A
0,44 ± 0,01
2,85 ± 0,81
86 ± 21,2
21
colonisation
Natal
A
0,4 ± 0,06
2,78 ± 0,92
114 ± 21,5
23
colonisation
Natal
C
0,53 ± 0,09
2,45 ± 0,67
101 ± 11.4
24
infection
Natal
A
0,51 ± 0,10
3,05 ± 0,74
132 ± 13,9
28
infection
Natal
A
0,55 ± 0,04
2,84 ± 0,80
165 ± 9,5
30
colonisation
Natal
C
0,52 ± 0,04
2,17 ± 0,62
119 ± 20
31
colonisation
Natal
A
0,49 ± 0,03
2,64 ± 0,82
129 ± 15
32
colonisation
Natal
A
0,49 ± 0,12
2,81 ± 0,65
123 ± 13,2
34
colonisation
Natal
A
0,52 ± 0,07
2,36 ± 0,64
156 ± 16,5
37
colonisation
Natal
B
0,57 ± 0,01
3,38 ± 0,80
124 ± 19,1
40
infection
Natal
A
0,51 ± 0,06
3,7 ± 0,56
142 ± 15,9
41
colonisation
Natal
A
0,54 ± 0,03
2,7 ± 0.69
172 ± 21,1
44
infection
Natal
A
0,48 ± 0,03
2,8 ± 0,77
176 ± 11.6
46
colonisation
Natal
A
0,46 ± 0,04
2,81 ± 0,77
172 ± 20,1
50
colonisation
Natal
A
0,54 ± 0,04
3,24 ± 0,88
157 ± 36,6
51
colonisation
Natal
A
0,51 ± 0,02
2 ± 0,43
130 ± 19,5
53
colonisation
Natal
C
0,53 ± 0,09
2,79 ± 0,71
132 ± 15,9
54
colonisation
Natal
A
0,47 ± 0,02
1,8 ± 0,40
132 ± 9,2
60
colonisation
Natal
C
0,57 ± 0,03
2,15 ± 0,36
146 ± 9
61
colonisation
Natal
A
0,49 ± 0,01 2,48 ±
0,75
142 ± 9,2
70
colonisation
Natal
C
0,51 ± 0,03
2.99 ± 0.50
140 ± 12.7
72
colonisation
Natal
C
0,46 ± 0,04
2,31 ± 0,61
136 ± 9
82
colonisation
Natal
C
0,55 ± 0,03
3,36 ± 0,93
130 ± 13,2
85
colonisation
Natal
C
0,56 ± 0,04
3,15 ± 0,83
144 ± 9,5
107
colonisation
Natal
C
0,57 ± 0,01
2,39 ± 0,63
156 ± 10,1
06A
colonisation
Maringá
A
0,5 ± 0,02
2,34 ± 0,71
80 ± 17,4
06 L
infection
Maringá
A
0,56 ± 0,07
2,94 ± 0,58
75 ± 8,7
10Li
colonisation
Maringá
A
0,55 ± 0,01
2,42 ± 0,70
176 ± 6,1
10S
colonisation
Maringá
A
0,64 ± 0,01
2,54 ± 0,76
105 ± 14,7
12A
colonisation
Maringá
A
0,49 ± 0,02
3,3 ± 0,79
59 ± 16,8
12 L
infection
Maringá
A
0,51 ± 0,05
3,2 ± 0,68
90 ± 13,2
15A
colonisation
Maringá
A
0,42 ± 0,02
2,96 ± 0,83
116 ± 27,1
infection
15G
Maringá
A
0,42 ± 0,03
3,13 ± 0,81
86 ± 21,9
15 L
infection
Maringá
A
0,47 ± 0,08
2,58 ± 0,68
76 ± 16,5
18A
colonisation
Maringá
C
0,56 ± 0,11
3,05 ± 0,67
102 ± 11,2
111 L
colonisation
Natal
C
0,55 ± 0,03
2,6 ± 0,70
80 ± 17,4
111R
colonisation
Natal
C
0,6 ± 0,15
4 ± 0.00
11 ± 3,2
ATCC90028
référence
A
0,7 ± 0,08
3,82 ± 0,5
158 ± 17,5
SC5314
référence
A
0,52 ± 0,04
3,28 ± 0,81
137 ± 20,6
les isolats ont été obtenus à partir de la cavité buccale des receveurs de transplantation rénale à partir de Natal, RN et Maringa, PR, Brésil.
Candida albicans
microsatellite typage contre ABC génotypage
Nous avons choisi au hasard 48 isolats de C. albicans
dont certaines souches appartenant au génotype A (21 à partir de Natal et 10 de Maringa) un toutes les autres souches appartenant aux génotypes B et C des deux régions et réalisées génotypage microsatellites. L'ADN génomique de la totalité des 48 isolats a été amplifié avec succès avec l'amorce de M13, qui cible les séquences génomiques répétitives. L'amplification d'ADN généré des modèles de bande bien définies, allant de 100 pb à 2 kb. La technique des microsatellites a montré un pouvoir discriminant suffisant pour reconnaître la variation intraspécifique (Figure 1). Comme prévu, les souches de contrôle externe de C. albicans
, SC5314 et ATCC90028, ont été placés dans différents groupes complètement par l'analyse de dendrogramme réalisée en utilisant GelCompar II, ce qui prouve l'efficacité de la technique dans la séparation des souches isolées à partir de différentes zones géographiques. Ces souches témoins ont présenté 75% de similarité et ont été placés ensemble dans un groupe différent de tous les autres isolats cliniques (figure 1). Figure 1 méthode non pondérée paire-groupe avec des moyennes arithmétiques dendrogramme avec 2% de tolérance de 50 souches de Candida albicans isolats cliniques.
Nous ne pouvions pas détecter tout groupe particulier soit colonisant ou d'infecter les souches. En outre, dans les deux cas, des souches présentant 100% de similarité obtenues à partir de patients différents ont été trouvés. En ce qui concerne les comparaisons de parenté génétique dans les deux régions géographiques différentes du Brésil, nous avons pu observer un cluster enrichi pour Maringa (Sud), où 80% des souches ont été placés ensemble. Autre conclusion intéressante de plus, ils allaient de 80% à 93% de similitude entre eux. Est associée à un certain degré de corrélation observée entre le type ABC de C. albicans
et le pourcentage élevé de similitude entre ces isolats quand microsatellites amorce M13 a été utilisé. Dans la plupart des cas, des souches avec un pourcentage identique de similitude déterminée avec l'amorce M13, a également eu le même A ou C de génotype (sauf pour les souches 02 et 85 de Natal, ainsi que 15 T et 18A de Maringa, A et C de génotypes à la fois les cas). En outre, C. albicans
souches de génotype C de Natal ont été placés dans deux groupes séparés bien définis avec une grande connexité éprouvée (plus de 90% de similarité dans le même cluster). En ce qui concerne le génotype B, deux des trois isolats a montré une similarité de 94%, étant placé dans le même groupe (figure 1).
De plus, lorsque différentes souches ont été obtenues à partir de différents échantillons du même patient, ils avaient tous le même génotype ABC (génotype A). Néanmoins, microsatellites en utilisant l'amorce M13 a montré une puissance plus élevée discriminatoire, parce que ces souches ne sont pas considérées comme identiques à la dernière technique, montrant un certain degré de variabilité génétique, lorsque cette méthode a été utilisée. De la Virulence attributs de Candida albicans
A, B et C génotypes
pour tous les facteurs de virulence testés, nous avons seulement effectué une analyse statistique pour les comparaisons entre les souches appartenant aux génotypes A et C, en raison du faible nombre d'isolats appartenant au génotype B trouvé. En ce qui concerne la phospholipase production, toutes les souches étaient capables de produire l'enzyme, peu importe si elles ont été obtenues à partir d'épisodes de colonisation ou d'infection. Pour le génotype A, Pz moyenne de 0,51 ± 0,04 a été obtenu, alors que pour le génotype C, une moyenne de 0,55 ± 0,05, tandis que pour le génotype B, l'Pz moyenne était de 0,57 ± 0,07. Aucune différence statistique n'a été observée lorsque les souches appartenant aux génotypes A et C ont été comparés (tableau 3).
Lorsque l'indice de morphologie (IM) a été utilisé pour marquer des cellules de morphologie, aucune différence n'a pu être clairement observée pour les trois différents A, B ou génotypes C. La capacité des souches à modifier la morphologie des cellules de bourgeon à hyphes lorsqu'elles sont cultivées en présence d'YPD + 20% de FBS a été vérifié pour les souches appartenant aux trois génotypes mentionnés. Les cellules ont été principalement trouvés comme pseudohyphae, avec une moyenne MI allant de 2,66 ± 0,61 (génotype C) à 2,77 ± 0.69 (génotype A). La moyenne MI isole du génotype B était de 2,67 ± 0,71. Aucune différence statistique n'a été observée parmi les isolats (tableau 3).
Nous avons également étudié la capacité des différentes souches à résister à la phagocytose par les PMN. Par conséquent, le nombre de cellules de C. albicans phagocytées par 100 PMN a été déterminée au bout de trois heures de co-incubation des deux cellules. C. albicans
génotype C était plus résistant à la PMN attaque. Les souches appartenant au génotype B avaient une moyenne de 141,33 ± 14,27 cellules phagocytées par 100 PMN. Les souches appartenant au génotype C étaient significativement plus résistant à l'attaque des cellules phagocytaires que les isolats appartenant au génotype A (moyenne de 109,93 ± 12,29 contre 121,67 ± 16,06, respectivement; tableau 3). De la Virulence attributs de Candida albicans
souches obtenues à partir de deux régions géographiques différentes du Brésil (Nord-Est et du Sud).
Lorsque les facteurs de pathogénicité ont été comparés entre toutes les souches obtenues à partir des deux régions géographiques, les souches obtenues à partir de Maringa (Sud) ont exprimé de manière plus efficace de tous les facteurs de virulence évaluée in vitro. Cette différence a été considérée comme statistiquement significative de la résistance à la phagocytose par les PMN (tableau 4). Fait intéressant, 40% des isolats obtenus à partir de Maringa ont été obtenus à partir de lésions, alors que seulement 18,4% des isolats de Natal ont été infectait (tableaux 3 et 4) les attributs .Table 4 Virulence de Candida albicans isolats obtenus à partir de la cavité buccale des patients transplantés rénaux 0,05. [30].
