pilote
Résumé de l'arrière-plan
Les papillomavirus humains (HPV) sont une grande famille de virus non enveloppés ADN, principalement associée les cancers du col utérin. données épidémiologiques récentes ont suggéré que le VPH peut être un facteur de risque indépendant pour les cancers oropharyngés. Les preuves suggèrent maintenant HPV peut moduler le processus de malignité dans certaines tumeurs de l'oropharynx et au tabac dus à l'alcool, mais pourrait aussi être le facteur oncogène primaire pour induire la cancérogenèse chez certains non-fumeurs. Plus de preuves, cependant, est nécessaire en ce qui concerne la prévalence du VPH orale chez les adultes en bonne santé pour estimer le risque. Le but de cette étude était d'effectuer un dépistage du VPH des adultes normaux en bonne santé pour évaluer la prévalence du VPH par voie orale.
Méthodes
patients adultes en bonne santé à une école dentaire américaine ont été sélectionnés pour participer à cette étude pilote. Résultats de l'ADN a été isolé à partir d'échantillons de salive et criblés pour HPV à haut risque souches HPV16 et HPV18 et traitées en utilisant qPCR pour la quantification et pour confirmer la sensibilité analytique et la spécificité.
analyse du chi carré ont révélé l'échantillon du patient était représentatif de la population de la clinique générale en ce qui concerne le sexe, la race et l'âge (p
& lt; 0,05). Quatre échantillons de patients ont été trouvés pour abriter l'ADN de HPV16, ce qui représente 2,6% du total (n = 151). Trois des quatre échantillons de HPV16-positifs provenaient de patients de moins de 65 ans et tous les quatre étaient des femmes et hispaniques (non-blanc). Aucun échantillon testé positif pour HPV18.
Conclusions
Le recrutement réussi et le dépistage des patients adultes en bonne santé ont révélé HPV16, mais pas HPV18, était présent dans un petit sous-ensemble. Ces résultats fournissent de nouvelles informations sur l'état de HPV par voie orale, ce qui peut aider à contextualiser les résultats d'autres études qui démontrent des taux de cancer de la bouche ont augmenté aux États-Unis chez les femmes et les minorités, et dans certaines zones géographiques qui ne sont pas uniquement expliquées par des taux de tabac et d'alcool utilisation. Les résultats de cette étude peuvent être de grande valeur pour approfondir notre compréhension de la santé bucco-dentaire et le risque de maladie, ainsi que pour aider à concevoir les futures études explorant le rôle des autres facteurs qui influent sur l'exposition au HPV par voie orale, ainsi que le court et long . conséquences à long terme de l'infection par le VPH orale
matériel supplémentaire électronique
La version en ligne de cet article (doi:. 10 1186 /1472-6831-11-28) contient du matériel supplémentaire, qui est disponible pour les utilisateurs autorisés.
Contexte
le virus du papillome humain (VPH) a été impliquée comme la cause de la quasi-totalité des cancers du col utérin dans le monde entier [1-3]. Ceux-ci représentent une grande famille de virus non enveloppés d'ADN qui peuvent être trouvés intégré dans le génome hôte, non-intégrées ou épisomiques, ou comme une combinaison ou un mélange de ces types dans les tissus infectés [4-9]. virus HPV infectent de nombreux types de cellules épithéliales, avec néoplasies intraépithéliales représentant la grande majorité des cancers liés au VPH [5, 10, 11].
données épidémiologiques récentes ont suggéré que le VPH peut également être un facteur de risque indépendant de cancer de l'oropharynx , révélant le VPH en trois fois plus de lésions buccales précancéreuses, et près de cinq fois plus de cancers oropharyngés par rapport à la muqueuse buccale normale [12-14]. De tous les types de VPH, le risque élevé de souches HPV16, et dans une mesure moindre HPV18, sont le plus souvent identifié à partir de biopsies orales [15-21]. Bien que les facteurs de risque traditionnels pour le développement de cancer de l'oropharynx restent l'usage du tabac et la consommation excessive d'alcool, d'autres facteurs de risque, tels que les HPV, peuvent jouer un rôle important pour déterminer si elle se développe et la rapidité avec laquelle il peut progresser [14, 19, 22-28].
La présence relativement faible de HPV à haut risque dans les tissus normaux et la prévalence beaucoup plus élevée dans les lésions oropharyngées pré-cancéreuses et cancéreuses peuvent suggérer que le VPH infecte préférentiellement déjà développer des cancers oropharyngés [12-14]. Bien qu'il soit possible que la faible prévalence chez les individus en bonne santé peut être imputable à d'autres facteurs, y compris le prélèvement d'échantillons impropre ou la sensibilité du dosage, il est également possible que le VPH peut fonctionner pour moduler le processus d'une tumeur maligne dans l'élaboration ou de l'oropharynx établies, comme cela a été observé dans les études de l'infection au VPH dans d'autres cancers en développement [29-39]. Par exemple, des études épidémiologiques et cas-témoins récentes ont démontré que les patients atteints de tumeurs oropharyngés HPV-positives ont considérablement amélioré le taux de survie [12, 40, 41] et les taux de réponse thérapeutique par rapport aux témoins de HPV négatif [42]. Plusieurs in vitro
études ont récemment enquêté sur les mécanismes possibles qui peuvent expliquer ces changements phénotypiques dans les cancers oropharyngés [25-27]. On sait aujourd'hui que l'infection par le VPH de certains cancers oropharyngés en corrélation avec une augmentation des taux de survie et un meilleur pronostic chez certains patients en raison de ces changements dans la réactivité cellulaire [40-45]. Ces études mettent en évidence la nécessité de comprendre non seulement la prévalence de l'infection par le VPH par voie orale, mais aussi la durée et la persistance de ces infections, en raison de leur potentiel d'affecter la progression tumorale oropharyngée.
Il est probable que le VPH peut moduler le processus de malignité certains tabac et l'alcool induit des cancers oropharyngés, mais peuvent aussi être le facteur oncogène primaire pour induire la cancérogenèse dans un sous-ensemble de patients sans ces facteurs de risque traditionnels. Certains éléments de preuve a démontré que la non-tabac et non liés à l'alcool cancers oropharyngés étaient six fois plus susceptibles d'abriter des infections au VPH que les contrôles de cas appariés [46]. Pour évaluer avec précision les risques, plus les estimations de la prévalence du VPH par voie orale chez les adultes en bonne santé sont nécessaires. Des études internationales ont évalué la prévalence du VPH chez les adultes en bonne santé en utilisant des échantillons de biopsie, révélant des taux de prévalence allant de 0 à 15% [20, 47-51]. En outre, d'autres études ont commencé à signaler la salive moins invasive et les méthodes d'essai à base de lavage-oraux pour identifier le VPH chez les échantillons de salive des adultes en bonne santé, révélant des taux de prévalence allant de 2,8 à 25% [15, 52-60].
Certains d'entre eux études de dépistage du VPH par voie orale ont été réalisées aux Etats-Unis, les adultes normaux en bonne santé, en plus de patients atteints de cancer de l'oropharynx [57, 58, 61]. Ces études ont rapporté des taux beaucoup plus faibles, entre 1,3 et 7%, que dans les études internationales antérieures [47, 50, 53]. Sur la base de ces informations, l'objectif de ce projet était d'effectuer un dépistage pour les souches les plus répandues à haut risque HPV, HPV16 et HPV18, chez les adultes normaux en bonne santé. Cette étude pilote a été réalisée dans le Nevada, un état récemment documenté pour avoir des taux croissants de cancer oropharyngé entre 1997 et 2005 - en dépit de la baisse des taux de tabac et d'alcool dans l'État, ainsi que la baisse des taux de cancer de l'oropharynx national [23, 24] . L'objectif à long terme est de fournir des informations plus détaillées sur un risque élevé prévalence du VPH par voie orale pour permettre des estimations plus robustes du risque de cancer de l'oropharynx.
Méthodes
sujets humains
Le protocole de cette étude intitulée "La prévalence de Oral Virus du papillome humain (VPH) à l'Université du Nevada, Las Vegas - école de médecine dentaire (UNLV-SDM) Clinique population "a été déposée, modifiée, et approuvé par le Bureau UNLV d'intégrité de la recherche - sujets humains (OPRS # 1002 -3361) le 9 Avril 2010. en bref, les sujets dans cet échantillon de commodité ont été recrutés par des membres de la Clinique UNLV-SDM au cours de leur visite chez le dentiste sur l'une des 15 dates de la clinique. Consentement éclairé était nécessaire et a été réalisée sur place. Critères d'inclusion: les sujets devaient être âgés de 18 ans ou plus et doivent accepter de participer. Critères d'exclusion: les sujets de moins de 18 ans, les sujets qui ont refusé de participer, et des sujets avec un diagnostic de cancer de l'oropharynx ont été exclus
Taille de l'échantillon
Pour déterminer la taille appropriée de l'échantillon, des études antérieures qui criblées pour haute. risque HPV par voie orale chez les adultes en bonne santé ont été évalués pour déterminer la gamme de tailles d'échantillons, qui varient grandement de 12 - 1680 [47-62]. Des recherches antérieures à UNLV et la clinique UNLV-SDM ont montré des taux de participation faibles pour, des projections invasives à base de sang [63], mais les taux de participation plus élevés en utilisant biosurveillance non-invasive et les méthodes de dépistage, y compris la collecte de salive (données non publiées). Ces études ont des tailles d'échantillons allant de 16 - 200. Sur la base de ces informations combinées de la taille maximale de l'échantillon a été estimée à 200.
Saliva Collection Protocole
En bref, les adultes en bonne santé qui ont accepté de participer ont reçu un petit, stérile récipient de collecte de salive, un tube en polypropylene stérile de 50 ml de Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ). Les participants ont ensuite été invités à mâcher sur un petit morceau de cire de paraffine pendant une minute, puis à expectorent. Les échantillons ont été stockés sur de la glace jusqu'à ce que le transport vers un laboratoire biomédical pour l'analyse. Chaque échantillon de salive a été attribué un numéro unique, généré aléatoirement pour éviter le biais de la recherche. Les données démographiques concernant l'échantillon a été recueilli en même temps, qui se composait de l'âge, le sexe et l'origine ethnique seulement.
comptage des cellules et l'isolement de l'ADN
Tous les échantillons ont été centrifugés pendant 10 minutes à 2.100 g
(RCF) et le culot on l'a lavé avec une solution saline tamponnée au phosphate 1X (PBS) (Hyclone: Logan, UT) et remises en suspension dans 5 ml de 1 x PBS. Le nombre de cellules a été déterminée en utilisant Bleu Trypan (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) en utilisant un microscope Zeiss Axiovert 40 inversé (Gottingen, Allemagne) et un hématimètre (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ). Pour déterminer si des échantillons hébergeaient le virus HPV, l'ADN a été isolé à partir de l'échantillon de salive en utilisant un minimum de 3,5 x 10
5 cellules et le kit d'isolement GenomicPrep ADN (Amersham Biosciences Buckinghamshire, Royaume-Uni), en utilisant la procédure recommandée par le fabricant, comme décrit précédemment [26, 27, 32]. la pureté de l'ADN a été calculée en utilisant la mesure du rapport de l'absorbance à 260 et 280 nm (rapport A260 /A280 compris entre 1,7 et 2,0). réactionnel
en chaîne par polymérase (PCR)
ADN de chaque échantillon a ensuite été utilisé pour effectuer la PCR avec le Fisher kit PCR complète exACTGene (Fisher Scientific: Fair Lawn, NJ) et un gradient thermocycleur Mastercycler (Eppendorf: Hambourg, Allemagne) en utilisant les amorces suivantes pour HPV16 [26, 27], HPV18 [27, 32], et glyceraldehyde- 3- phosphate déshydrogénase (GAPDH) [64], synthétisé par SeqWright (Houston, TX):
HPV16 amorce avant, ATGTTTCAGGACCCACAGGA;
HPV16 amorce, CCTCACGTCGCAGTAACTGT inverse;
HPV18 amorce avant, ATGGCGCGCTTTGAGGATCC;
HPV18 amorce inverse , GCATGCGGTATACTGTCTCT;
GAPDH amorce avant, ATCTTCCAGGAGCGAGATCC;
GAPDH amorce inverse, ACCACTGACACGTTGGCAGT;
Un pg d'ADN matrice a été utilisé pour chaque réaction. L'étape initiale de dénaturation a duré trois minutes à 94 ° C. Un total de 30 cycles d'amplification ont été exécutés, constitué de 30 secondes de dénaturation à 94 ° C, 60 secondes de recuit à 58 ° C, et 30 secondes d'extension à 72 ° C. L'extension finale a été effectuée pendant cinq minutes à 72 ° C. Les produits de réaction PCR ont été séparés par électrophorèse sur gel en utilisant 4% NuSieve Reliant ® 3: 1 des gels plus Agarose (Lonza: Rockland, ME). Les bandes ont été visualisées par illumination UV de bromure d'éthidium-gels colorés et capturés à l'aide d'un système Kodak Gel Logic 100 Imagerie et 1D Image Analysis Software (Eastman Kodak: Rochester, NY) PCR quantitative de (qPCR)
échantillons d'ADN. ont ensuite été traitées en utilisant qPCR pour fournir une quantification plus précise et sensible. Amorces et sondes ont été conçues en utilisant la bibliothèque Roche Universal Probe (UPL) logiciel de conception d'essai pour amplifier la région chevauchant E6 et E7 séquence du gène de HPV16 [GenBank: K02718] et le gène de ménage de β-actine humaine [GenBank: M10277]. Toutes les amorces ont été achetés auprès de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO.) Et des sondes achetées auprès de Roche Applied Science (Indianapolis, IN.)
HPV16 E6 /E7 amorce sens 5'-CAACTGATCTCTACTGTTATGAGCAA-3 ', HPV16 E6 /E7 amorce inverse 5'-CCAGCTGGACCATCTATTTCA-3 ', HPV16 E6 /E7 hydrolyse "Taqman" sonde 5' - (fam) -AGGAGGAG- (foncé quencher colorant) -3 '(UPL sonde n ° 63) a été utilisé pour amplifier la paire 73 de base région (pb) entre la position 535 nucelotide (nt) et la position nt 607. β-actine humaine amorce sens 5'-GTGGGGTCCTGTGGTGTG-3 ', β-actine humaine 5'-GAAGGGGACAGGCAGTGA-3', l'hydrolyse de β-actine "Taqman« humain sonde 5 '- (fam) -GGGAGCTG- (foncé quencher colorant) - 3 '(UPL sonde n ° 24) amplifié la région de 61 pb entre 2642 position nt et 2702 position nt.
le temps réel a été préparé mélange réactionnel dans un LightCycler ® 480 plaque multipuits 96 contenant 1 × LightCycler ® 480 Sondes Maître (Roche Applied Sciences), 1 uM de chaque ensemble d'amorces respectives (avant et arrière), 0,2 pM de la sonde respective, et 2 pi de matrice d'ADN; dans un volume réactionnel final de 20 ul. Le mélange des sondes maître contenu du tampon de réaction, mélange de dNTP (y compris dUTP à la place de dTTP), 3,2 mM MgCl 2, et Taq
l'ADN polymérase. L'essai de PCR en temps réel a été réalisée sur un système LightCycler 480 (Roche Applied Science) avec les paramètres de cycle suivants: pré-incubation pour l'activation de l'enzyme initiale à 95 ° C pendant 10 minutes, suivi par 45 cycles de 95 ° C pendant 10 secondes (vitesse de rampe à 4,4 ° C /seconde), 60 ° C pendant 30 secondes (vitesse de rampe de 2,2 ° C /seconde) et 72 ° C pendant 1 seconde (vitesse de rampe de 4,4 ° C /seconde). À la suite de la phase d'amplification, une étape de refroidissement a été effectué à 40 ° C pendant 30 secondes (vitesse de 2,2 ° C /seconde rampe). Acquisition du signal de fluorescence a été effectuée en utilisant le réglage (465-510 nm) après la phase de 72 ° C extension de chaque cycle mono Hydrolyse de la sonde. Tous les échantillons ont été réalisées en triple
sensibilité analytique The CaSki (American Type Culture Collection, Manassas, VA). Lignée cellulaire d'adénocarcinome du col utérin a été utilisé pour développer des courbes standard tant pour le HPV16 (600 copies /génome) et β (2 copies /génome) gènes actine. ADN extrait de cellules CaSki a été dilué en série dix fois à partir de 50 ng à 0,0005 ng [65]. Cette étape a permis pour la quantification relative du niveau d'ADN d'entrée et de la quantité finale du nombre de copies virales /génome /cellule. La quantification a été réalisée à l'aide du seuil de cycle (C T) mesurée avec la seconde méthode maximale dérivée (LightCycler version 480 du logiciel 1.5.0.39; Roche Applied Science). échantillons & gt Saliva; 0,001 copie /génome ont été considérés comme positifs pour le VPH. analyse de spécificité a été réalisée sur qPCR test contre HPV18 et jugé spécifique à 100% (données non présentées)
évaluation statistique
sensibilité et la spécificité ont été calculées comme étant la proportion de vrais positifs et vrais négatifs (valeur de coupure & gt;. 0,001 copies /génome), respectivement. Suite à l'acquisition d'échantillons de salive et les résultats de dépistage du VPH, des données démographiques de chaque échantillon a été comparé avec le profil démographique global de la piscine du patient UNLV-SDM (N = 71, 051) en utilisant un (χ2) test du chi-carré, afin de déterminer si toute caractéristique (sexe, la race, l'âge) était différent de celui attendu chez les patients évalués dans cette étude (n = 151). Les échantillons de résultats d'un niveau d'alpha (α) = 0,05 probabilité a été utilisé pour déterminer la signification statistique. de salive ont été prélevés sur 151 patients UNLV-SDM entre le 2 Juin et Octobre 1, 2010. Les patients dont les échantillons ont été collecté et filtré étaient pas statistiquement différents de la population globale de la clinique UNLV-SDM en ce qui concerne le sexe, la race ou l'âge (tableau 1). Plus précisément, le nombre total de femmes et d'hommes dans l'échantillon était à peu près égale (52,3% et 47,7%, respectivement) et non significativement différent de celui de la population de la clinique globale (p = 0,589
). Il y avait des patients un peu plus blanches dans l'échantillon de l'étude (48,3%) que dans la population générale UNLV-SDM (40,8%) (p = 0,133
). En outre, il y avait un peu moins de 18 - 64 ans dans l'échantillon (80,8%) que dans la clinique globale (85,3%) (p = 0,354
) .Table 1 Analyse démographique des participants à l'étude
Variables
UNLV-SDM
Étude échantillon
analyse statistique
Sexe
|
|
Femme
n = 35952 (50,6%)
n = 79 (52,3 %)
χ2 = 0,119, df = 1
Homme
n = 35099 (49,4%)
n = 72 (47,7%)
p = 0,589
Race
|
|
|
Blanc
n = 28989 (40,8%)
n = 73 (48,3%)
χ2 = 1,621, df = 1
non-White
n = 42062 (59,2%)
n = 78 (51,7%)
p
= 0,133
Age
|
|
|
18 - 64 ans
n = 60598 (85,3%)
n = 122 (80,8%)
χ2 = 1,056, df = 1
65 +
n = 10453 (14,7%)
n = 29 (19,2%)
p
= 0,354
Analyse des échantillons de salive a révélé le nombre de cellules variant entre 0,8 à 2,4 x 10 6 cellules /ml (tableau 2). L'ADN a été isolé avec succès de tous les échantillons de salive prélevés, avec des concentrations d'ADN moyennes comprises entre 820-1047 ng /ul. mesures d'absorbance et A260 /A280 analyse du rapport ont confirmé la pureté de l'ADN des isolats, qui était en moyenne entre 1,87 et 2.05.Table 2 Nombre de cellules et l'isolement de l'ADN
Nombre de cellules (cellules /mL)
concentration d'ADN moyenne (ng /ul)
A260 /A280
échantillons (n)
0,8 à 1,2 × 106
915
2,05
31
1.6- 1.9 × 106
820
1,87
94
2,1 à 2,4 × 106
1047
1,95
26
Le l'ADN extrait a ensuite été criblés pour la présence du HPV16 et HPV18 en utilisant une PCR (figure 1). A partir de ce dépistage, quatre échantillons de patients ont été jugées positives HPV, ce qui représente 2,6% du total projeté (n = 4/151). Les quatre échantillons hébergeaient HPV16 ADN et aucun n'a été trouvé positif pour HPV18. Même si un pool d'échantillons positifs de seulement quatre patients ne permet pas des inférences ou des conclusions plus larges, une analyse descriptive préliminaire des données démographiques a révélé ces quatre échantillons provenaient de femmes, qui étaient également minorité (non-blanc, hispanique) (tableau 3). Trois des quatre échantillons provenaient de patients âgés de 18 - 64 ans (2,0%), et un échantillon provenait d'un patient de plus de 65 ans (0,7%). Figure 1 Dépistage des échantillons de patients pour le VPH. PCR en utilisant l'ADN extrait d'échantillons de patients (n = 151) a été criblée en utilisant HPV16- et des amorces spécifiques de HPV18, qui a révélé quatre échantillons hébergeaient HPV16 (2819, 2718, 2527 et 2430). Aucun échantillon n'a été trouvé pour héberger HPV18. ADN extrait précédemment à partir des lignées cellulaires d'adénocarcinome du col de l'utérus, et CaSki GH354, a été utilisé comme HPV16 et HPV18 témoins positifs, respectivement.
Tableau 3 Analyse des HPVscreening
Variables
HPV16-positive
HPV18-positive
HPV-negative
Sexe
|
|
Femme
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 75 (49,7%)
Homme
n = 0
n = 0
n = 72 (47,7%)
Race
|
|
|
Blanc
n = 0
n = 0
n = 73 (48,3%)
non-White
n = 4 (2,6%)
n = 0
n = 74 (49,0%)
Age
|
|
|
18 - le
de 64 années n = 3 (2,0%)
n = 0
n = 119 (78,8%)
65 +
n = 1 (0,7%)
n = 0
n = 28 (18,5 %)
échantillons d'ADN ont ensuite été traitées en utilisant qPCR quantitative pour fournir une évaluation quantitative, ainsi que la mesure de la sensibilité et la spécificité (figure 2). Analyse de la gamme de nombre de copies /génome pour le gène de ménage (β-actine) dans HPV-négatif (plage: 4 - 363 copies /génome) et des échantillons HPV-positif (gamme: 75-1096) étaient similaires et bien au-dessus de la valeur seuil (& gt; 0,1 copies /génome). L'analyse des résultats de qPCR en nombre de copies /génome pour HPV a révélé des différences frappantes dans le nombre de copies entre HPV-négatif (plage: 0,0001 - 0,000004 copies /génome) et HPV-positif (gamme: 70 - 111), qui ont été facilement distingués à l'aide de la coupure valeur (& gt; 0.001 copies /génome). Pas de faux positifs ou de faux négatifs ont été trouvés, ce qui démontre une sensibilité et une spécificité suffisantes pour déterminer le pourcentage de vrais positifs (4/4 ou 100%) et les vrais négatifs (147/151 ou 100%). Figure 2 Analyse graphique des résultats de dépistage HPV qPCR. Traçage du nombre de copies /génome pour gène de ménage (β-actine) était similaire à partir d'échantillons de HPV-positif (gamme: 75-1096) et des échantillons de HPV-négatif (gamme: 4 - 363 copies /génome). Copier /numéro génome en utilisant qPCR était nettement supérieur à la valeur seuil (& gt; 0,1 copies /génome), confirmant les échantillons de HPV-positives ont port HPV16 ADN (plage: 70 - 111 copies /génome), mais pas HPV18. Discussion de, à l'exception de trois échantillons (2867, 2854, 2792) qui étaient en dessous de la limite de détection
L'objectif principal de cette étude était d'effectuer un dépistage oral des adultes normaux en bonne santé dans le Nevada pour HPV à haut risque. Les tentatives précédentes de cette institution et au sein de l'État pour obtenir des échantillons à base de sang pour d'autres types de projections, comme le plomb (Pb) niveaux, ont été largement échoué en raison de l'appréhension du patient et de la peur de la collecte de sang [63]. Pour éviter ces problèmes spécifiques, cette étude a utilisé de manière non invasive la salive recueillie pour effectuer cette analyse. Ces efforts ont finalement permis pour la collecte et le dépistage des dizaines d'échantillons de patients; une amélioration marquée des taux de participation des patients par rapport aux autres précédente, mais semblable, tente de recueillir des échantillons biologiques de la population locale. Les résultats de cette étude fournissent de nouvelles données à partir d'une population de patients testées auparavant et par zone géographique pour compléter le corpus croissant d'informations sur la prévalence du VPH orale chez les adultes en bonne santé.
Ces données ont démontré un taux de risque élevé HPV orale prévalence (2,6 %) pratiquement le même que les plus récentes études multinationales d'adultes en bonne santé, sans cancer (3,1% à 5%) [61, 62]. Au cours des dernières décennies, des études internationales ont évalué la prévalence du VPH chez les adultes en bonne santé en utilisant des échantillons de biopsie, qui ont rapporté largement les taux de prévalence variables variant de 0 à 15% [47-51]. Cependant, d'autres rapports publiés récemment le dépistage de l'infection par le HPV par voie orale chez les adultes en bonne santé en utilisant la salive et les tests de lavage par voie orale ont signalé des taux de prévalence globaux qui étaient également à proximité de cette plage (1,3%, 2,8%, 7%) [52-59].
en outre, bien que les résultats de cette étude ont trouvé une infection au VPH orale seulement chez quatre patients, qui étaient minoritaires et des femmes, la grande majorité des patientes et des minorités dans cette étude avait aucune preuve d'infection par le VPH par voie orale. Comme une étude pilote initiale, ces données suggèrent une analyse plus complète et approfondie de cette population peut être nécessaire, car les études épidémiologiques récentes ont montré que les taux de paradis cancer oropharyngé fortement augmenté chez les femmes de minorités aux États-Unis, en dépit de la baisse globale des taux [ ,,,0],66]. Plus généralement, les taux de cancer de l'oropharynx ont augmenté chez certains sous-groupes minoritaires [67], en dépit d'une baisse globale de la population générale aux États-Unis [23, 24, 68]. Ceci peut être expliqué en partie par des taux plus élevés de tabac et d'alcool, mais peut également être attribuable à d'autres facteurs, y compris l'éducation, le revenu, le stress, l'alimentation, la littératie en santé et de l'exposition à des agents infectieux par voie orale [22, 25]. Cette étude pilote fournit des informations préliminaires sur la prévalence du VPH par voie orale et les résultats suggèrent qu'une enquête plus approfondie peut être justifiée, en particulier à la lumière des disparités en matière de santé auxquels font face les deux femmes et les minorités dans le Nevada et aux États-Unis, en général [23, 24].
Cette étude a également révélé la présence de la souche à haut risque HPV16, mais pas HPV18. Bien que certains rapports ont suggéré que l'infection à HPV par voie orale peut impliquer plusieurs souches de VPH [15-21, 69], ce résultat ne diffère pas des autres résultats qui suggèrent HPV16 peut expliquer la très grande majorité des échantillons oraux HPV-positifs [48, 49, 53, 57, 59]. Il est probable que la poursuite de l'expansion de ce projet pour inclure des échantillons plus importants permettra de découvrir les souches de VPH supplémentaires pour fournir des estimations plus importantes de l'infection à HPV par voie orale au sein de cette population.
Cette étude a plusieurs limites qui devraient être considérés. Premièrement, bien que la nature non-invasive de cette étude était suffisante pour le recrutement et la sélection d'un nombre significatif de patients, la taille globale de l'échantillon a été quelque peu limitée par rapport aux études multinationales plus importantes mentionnées précédemment [57, 58, 61]. Le nombre d'adultes en bonne santé de dépistage du VPH par voie orale dans cette étude pilote, cependant, se compare favorablement à un certain nombre d'autres rapports - avec des tailles d'échantillons allant de 12 à 97 [20, 47-53]. Deuxièmement, les données démographiques et comportementales détaillées ne sont pas désignés comme critiques pour les objectifs initiaux de cette étude pilote, cependant, l'inclusion du tabagisme et de la consommation de tabac, ainsi que des informations plus détaillées sur d'autres comportements, le logement, l'éducation, le revenu et d'autres indicateurs socio-économiques , ainsi que les pratiques sexuelles peuvent fournir des indications supplémentaires dans les enquêtes futures [55, 58, 59, 70]. Enfin, le dépistage des souches supplémentaires de HPV à haut risque [71-75] et d'autres agents infectieux par voie orale peut être possible dans les études futures avec plus de ressources et de personnel importants. Des Conclusions
Cette étude a recruté avec succès des patients et des échantillons de salive de dépistage du HPV à haut risque, ce qui confirme HPV16, mais pas HPV18, était présent dans un petit sous-ensemble des patients adultes en bonne santé dans une population de clinique de l'école dentaire américaine. Ces patients étaient des femmes et des minorités. De nombreuses disparités de santé sont confrontés les femmes et les minorités aux États-Unis, et certains éléments de preuve suggérant que le tabagisme et les taux de cancer de l'oropharynx peuvent augmenter dans ces sous-groupes de la population, les résultats de cette étude peuvent être de valeur significative à d'autres soins dentaires, les professionnels médicaux et soins de santé pour favoriser une meilleure compréhension des risques pour la santé et de la maladie orale
abréviations
(HPV):.
papillomavirus humain
(Etats-Unis):
United États
(ADN): acide désoxyribonucléique
(UNLV-SDM):
Université du Nevada, Las Vegas - école de médecine dentaire
(PCR): la réaction en chaîne par polymérase
(GAPDH):
glycéraldéhyde-3- phosphate déshydrogénase
(qPCR):
réaction quantitative en chaîne par polymérase
(pb):
paire de bases
(nt):
nucléotide
(RCF):
la force centrifuge relative
( PBS):
solution saline tamponnée au phosphate
(dNTP):
désoxyribonucléotide triphosphate
(dUTP):
2'-désoxyuridine triphosphate
(dTTP):.
désoxythymidine triphosphate
Déclarations Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier l'Université du Nevada, Reno (UNR) School of Medicine, l'école UNLV des sciences de la santé communautaire et de UNLV-SDM Département des sciences biomédicales et Bureau de la recherche pour fournir les fournitures et réactifs pour cette étude pilote initiale. KK aimerait remercier Laurel Pritchard, Kenneth Fernandez et Chandler Marrs pour leur aide. De dossiers soumis originaux pour les images
Voici les liens pour les auteurs
auteurs originaux soumis fichiers pour les images. de fichier d'origine pour la figure 1 12903_2010_195_MOESM2_ESM.pdf Auteurs '12903_2010_195_MOESM1_ESM.pdf Auteurs fichier d'origine pour la figure 2 Intérêts concurrents
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. Les contributions de
Auteurs
KK, SW, AB et RW conçu, contrôlé et coordonné la conception expérimentale. RB, JC, JF, DM, et JM étaient responsables de recrutement de patients, le consentement éclairé, la collecte d'échantillons et une analyse biomédicale. DT, KK, et SW a procédé à l'extraction d'ADN, l'analyse par PCR et qPCR. KK, SW et DT ont été responsables de l'analyse des données, ainsi que l'écriture et l'édition de ce manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
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