Résumé
Contexte
inflammation parodontale est caractérisée par des lésions dans les tissus de collagène, épithéliales, os. Les hypothèses à tester étaient relation entre le s100, bcl2 et myéloperoxydase dans les tissus gingivaux (MPO n'affecte le niveau de s100, bcl2). Méthodes de l'objet de cette étude était d'étudier l'expression s100, l'expression de bcl2 et d'expression de la myéloperoxydase dans l'inflammation parodontale.
27 patients (épulis à cellules géantes) et 30 patients (aiguës et les inflammations chroniques) ont été inclus dans l'étude pour l'expression s100, l'expression de bcl2 et d'expression myéloperoxydase par immunohistochimie et hématoxyline -. Résultats de l'éosine
Giant-cellules dans épulis positivité pour myéloperoxydase a été observée dans 100% Cependant, seulement 75,31% des cellules géantes étaient positifs pour bcl2 expression. Aiguë de 98,2%, et chronique 89,28% inflammation était positif et significatif pour la myéloperoxydase. Les résultats immunohistochimiques de s100, bcl 2 et myéloperoxydase dans les couches épithéliales ont montré le résultat de 100%, 82,2%, 100% de cellules positives dans aiguë et 100%, 78,25%, 100% dans le processus chronique de l'inflammation, respectivement.
Conclusion
les résultats indiquent que la pathogenèse de l'inflammation du parodonte peut impliquer l'inhibition de la mort cellulaire, par la surexpression de Bcl-2, en raison de l'identification des facteurs myéloperoxydase (entraînent la détérioration de l'ADN par le produit de la catalyse). Les plus hauts niveaux d'activité s100 ont été trouvés sur les sites avec une inflammation chronique.
Contexte
Les infections bactériennes sont les principaux agents étiologiques impliqués dans la parodontite aiguë et chronique, il est une maladie multifactorielle qui conduit à la destruction du parodonte osseuse [1]. Les cellules inflammatoires infiltration a été entraîné à partir de cellules plasmatiques parodontales: neutrophiles, T- & amp; B- lymphocytes et les macrophages [2]. lésions parodontales ont été caractérisées par une persistance de l'infiltration de cellules inflammatoires, qui peuvent être responsables de l'os collagènes résorcinol. Les recherches menées par Bælum V. & amp; Lopez R. [3] a montré que la maladie parodontale affecte entre 10% et 15% de la population mondiale, étant la principale cause de la perte des dents.
Cellules inflammatoires (cellules plasmatiques) ont exprimé en myéloperoxydase. neutrophiles polynucléaires sont largement exprimés dans la myéloperoxydase cellules plasmatiques [4]. Le gène de la myéloperoxydase est situé sur le chromosome 17 (17q23.1) [5].
Myéloperoxydase (MPO) ont catalysé la synthèse de l'acide hypochloreux microbicide permettant à la défense contre les bactéries [6]. En outre, les cellules plasmatiques synthétisent l'acide hypochloreux de H
2O 2 et NaCl. Le radical hydroxyle (OH) est principalement actif dans les molécules importantes nuisibles telles que les protéines et les lipides ADN [7]. Le peroxyde d'hydrogène (H 2 O 2) étant un puissant agent d'espèces d'oxygène, est capable de traverser la membrane nucléaire et endommageant l'ADN. [8] Il y a un soutien croissant à la demande que l'inflammation provoque des dommages de l'ADN qui conduit à l'apoptose dans les cellules parodontales [9] En outre, les stimuli apoptotiques peuvent déclencher l'apoptose via différents mécanismes, y compris des récepteurs et des ligands de mort cellulaire spécifiques, tels que CD95 [10 ], les signaux de stress, ce qui induit des molécules directement ou indirectement à l'apoptose, par l'intermédiaire de p53. Bcl2 est un membre de protéines anti-apoptotiques familiaux qui peuvent prévenir ou réduire la mort cellulaire induite par une variété de stimuli [11]. Le gène BCL-2 a été identifié dans le chromosome humain t (14; 18) [12]. La voie de la mort intrinsèque est déclenchée par la libération du cytochrome c mitochondrial
, un processus qui est inhibée par les protéines anti-apoptotiques bcl2 [13].
Protéines S100 sont exprimés dans le cytosol de neutrophiles, les monocytes, les macrophages activés, et kératinocytes et libéré lors de l'activation ou de la mort de ces cellules. La famille de gènes S100 comprend au moins 13 membres qui localisent comme un groupe sur le chromosome 1q21 [14]. protéines s100 aussi connu comme antigènes L1, calgranuline A et B, macrophage migration inhibitrice, protéine apparentée facteur (MRP) et de l'antigène de la fibrose kystique, ont plusieurs fonctions dans les réactions inflammatoires [15].
Les résultats de Sun-Hee Heo et . Al. [16] ont montré que les motifs d'expression dans les tissus gingivaux S100A2 lors de la stimulation de lipopolysaccharide bactérien. expression S100A2 a été augmentée par le lipopolysaccharide bactérien.
Nous avons hypothèse affirme qu'il existe la relation entre le s100, bcl2 et myéloperoxydase dans les tissus gingivaux (MPO affecte le niveau de s100, bcl2).
Le but de cette étude est de comparer les niveaux de s100, bcl2 et MPO dans les tissus gingivaux sur les différents stades de la maladie parodontale expression et par rapport aux épulis à cellules géantes.
Méthodes
sélection des patients et des tissus gingivaux collection
les échantillons d'étude ont inclus le parodontale et épulis tissus des patients. Les sujets ont été divisés en deux groupes égaux:
Groupe des patients (groupe 1). Géant des spécimens de granulome de cellules ont été recueillies à partir de 27 personnes qui avaient un diagnostic morphologiquement du géant granulome cellulaire (huit hommes et 14 femmes, tranche d'âge 30 à 70 ans, âge moyen, 47,51 ± 12,37 ans) Groupe de contrôle
. (Groupe 2) se composait de 30 patients qui étaient morts à l'hôpital régional de Sumy. Les patients avaient divers diagnostics somatiques (pas de complications athéroscléreuses) et dentaires - parodontit. 17 hommes et 13 femmes, tranche d'âge 43 à 69 ans, âge moyen, 57,33 ± 8,31 années ont étudié. Les spécimens de gencive envahies ont été recueillies au cours des mâchoires de sciage procédures. Après que les échantillons du groupe 2 de tissus colorés par hématoxyline-éosine Foo, tous les échantillons ont été divisés en deux groupes (aigus et chroniques). Groupe de contrôle a deux sous-groupes. sous-groupes aigus - 13 (5 mâles et 3 femelles, tranche d'âge 43 à 69 ans, âge moyen, 54.38 ± 7,9 ans). sous-groupes chroniques -. 17 (7 hommes et 15 femmes, tranche d'âge 44 à 68 ans, âge moyen, 59,58 ± 8,11 ans)
consentement écrit a été obtenu à partir de tous les sujets de l'étude, conformément aux lignes directrices établies par le Conseil de la santé de l'Ukraine. La présente étude a été approuvé par l'Université d'Etat Sumy (Protocole n ° 5/2012.)
Hématoxyline et éosine (H & amp; E).
Taches ont été utilisés pendant au moins un siècle et sont encore essentielles pour identifier les tissus différents types et le changement morphologique.
immunomarquages
Pour s100, bcl2 et MPO ont été effectués tissus fixés au formol (7,4 pH). coupes de tissus inclus en paraffine ont été traités monoclonal de souris dy anti-s100, anti-bcl2 et anti-myéloperoxydase (Thermo Fisher Scientific UK). En bref, 4 um coupes de tissus épais ont été déparaffinées dans du xylène et ont été placés dans de l'eau à travers des alcools gradués. la récupération de l'antigène a été réalisée par micro-ondes diapositives dans 10 mM de tampon citrate (pH 6,2) pendant 30 min à puissance élevée, selon les instructions du fabricant. Pour supprimer l'activité de peroxydase endogène, les sections ont été traitées avec fraîchement préparé 1,0% de peroxyde d'hydrogène dans l'obscurité pendant 30 min à 37 ° C la température. Anticorps liaison non spécifique a été bloquée par des moyens de blocage sérique. Les coupes ont été mises en incubation pendant 30 min, à la température 37 ° C avec les anticorps primaires contre S100, BCL2 et myéloperoxydase dilué 1: 100 dans du tampon phosphate salin (PBS), pH 7,2, puis un triple lavage avec du PBS suit. Anti- (d'IgG de souris) conjugué à la peroxydase -horseradish (1:40 000 de dilution) a été remplie pour la détection de la S100, Bcl2 et des anticorps primariy MPO, les sections ont été incubées pendant 20 min, à 37 ° C la température. La couleur a été visualisée par DAB.
L'apparition des facteurs positifs a été détectée par comptage des semi-quantitative des cellules géantes positives dans le champ visuel.
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel STATISTICA 8.0, la version utilisateur STA862D175437Q. Les résultats ont été présentés sous forme de moyenne ± écart-type. Le test de normaliser ont été utilisés avant l'analyse des données. En outre, la méthode de Student non paramétrique a été appliqué pour effectuer une analyse comparative simple. La valeur de P & lt; Résultats de 0,05 ont été considérées comme une importante.
Les groupes 1 et 2 des hommes et des femmes consistaient principalement en tranche d'âge de 30 à 70 ans. Groupe 1 cellules géantes se sont produites dans la mâchoire inférieure (55%) plus fréquemment que dans la mâchoire supérieure. Dans le groupe 2, les patients ont été divisés en 13 avec aiguë et 17 avec des inflammations chroniques.
Dans Fig. 1a A, nous avons observé de faible taille infiltration de cellules dans l'inflammation aiguë. infiltration de cellules importantes et de l'épithélium proliférant (Fig. 1b) ont semblé être plus intense dans l'inflammation chronique. les cellules inflammatoires aiguës et chroniques sont en circulation des leucocytes, des cellules plasmatiques et les macrophages tissulaires. Figure 1 Les tissus parodontaux hématoxyline et éosine teinté (x100 grossissement) A (a) - pint-size cellules infiltration avec un œdème superposé, B (a) - couches de l'épithélium, C (b) - de grandes cellules d'infiltration avec un œdème superposé, D (a) - prolifération épithéliale, E (c) - zone d'hémorragie, F (c) - des cellules géantes
périphérique épulis à cellules géantes est représenté sur la figure. Examen 1c microscopique a révélé le tissu avec l'abondance de cellules géantes (Fig. 1c F), le tissu conjonctif fibreux, les zones d'hémorragies (Fig. 1c E) et quelques capillaires. Il n'y avait aucun signe de malignité. L'inflammation chronique lorsque les macrophages ne parviennent pas à désintégré diverses particules, fusionnent et forment des cellules géantes multinucléées. En outre, des cellules géantes morphologiquement distinctes apparaissent également dans certaines tumeurs aussi.
S100, Bcl2 et MPO a exprimé dans les cellules géantes. expression S100, expression bcl2 et d'expression de la myéloperoxydase dans les cellules géantes épulis sont présentés sur la Fig. 2. Par immunohistochimie, 100% des cellules géantes est apparu comme positif pour la myéloperoxydase, tandis que 75,31% des cellules géantes étaient positifs pour Bcl-2 (P & lt; 0,05). Par le fait de protéines s100 a exprimé dans 10,72% des cellules géantes. Myéloperoxydase a physiologiquement exprimé dans les cellules plasmatiques de épulis 87,69%. S100 et bcl 2 ont exprimé dans des cellules plasmatiques 24,34% (P & lt; 0,05) et 11,28% respectivement, bcl 2 et myéloperoxydase expression étant faible ou absent dans le tissu conjonctif. Figure 2 Expression de s100, bcl2and myéloperoxydase dans le tissu gingival (x100): A - Les couches de l'épithélium avec l'expression de la myéloperoxydase, B - Les cellules sanguines infiltration avec l'expression de la myéloperoxydase, C - péricellulaire et oedème périvasculaire, D - Les cellules sanguines infiltration avec l'expression de la myéloperoxydase , E - des couches de l'épithélium avec l'expression de la myéloperoxydase et la prolifération, F - les cellules géantes avec expression de myéloperoxydase, G - stroma fibroblastique, H - les cellules sanguines infiltration avec l'expression de la myéloperoxydase, I - oedème péricellulaire et périvasculaire, G - Blood cellules infiltration avec 2expression Bcl , K - les couches de l'épithélium avec un haut niveau de bcl 2 expression, l - les couches de l'épithélium avec 2expression bcl, N - stroma fibroblastique, M - les cellules sanguines infiltration avec bcl 2 expression, O - oedème péricellulaire et périvasculaire, P - géant cellules avec bcl 2 expression, Q - les cellules sanguines infiltration avec une faible 2expression bcl, R - Blood cellules infiltration avec l'expression s100, S - péricellulaire et oedème périvasculaire, T - les couches de l'épithélium avec l'expression s100, U - les couches de l'épithélium avec une faible expression s100, V - stroma fibroblastique, W - Les cellules sanguines infiltration avec l'expression s100, X - stroma fibroblastique, Y - Les cellules géantes avec expression s100 "pauvres" The immunoexpression de s100, bcl2 extrémité de MPO (Groupe 2) ont été confirmés par la présence de cytoplasme teinté brun dans l'infiltration de cellules. En général, s100 coloration est plus intense dans les cellules plasmatiques. Dans inflamation aiguë S100 (Fig. 2) seulement 36,2 ± 5,3% des cellules semblait être positif. L'infiltration de cellules, a montré immunoréactivité bcl2 figuré 76,1 ± 3,3% (P & lt; 0,05) dans le processus aiguë (Fig. 2). Myéloperoxydase a exprimé en 98,2 ± 5,9% (P & lt; 0,01). Cellules positives dans l'inflammation aiguë
la figure 2 montre les résultats de l's100, bcl2 et d'expression MPO dans le processus chronique
myéloperoxydase 82,. 28 ± 2,5% P & lt; 0,01 a été exprimée dans l'infiltration de cellules plasmatiques chroniques lors de l'inflammation. Bcl 2 a été exprimé dans les cellules plasmatiques chroniques infiltration 55,67 ± 6,1% P & lt; 0,05. Тhe immunoexpression de S100 dans l'infiltration de cellules a montré le résultat de 95,0 ± 0,31% de cellules positives.
Тhe immunoexpression de s100, bcl2 et MPO dans les couches épithéliales (processus aigu) ont montré le résultat de 100%, 82,2 ± respectivement 2,93% et 100%. En processus chronique de l'inflammation des cellules positives ont demonstratrd s100 - 100%, bcl2 - 78,25 ± 4,23% et myéloperoxydase -. Rapport de 100% respectivement
Cette étude a affirmé que MPO était capable de stimuler plus d'expression bcl2 dans les cellules de l'inflammation au cours du processus chronique et aiguë. activité myéloperoxydase exprimé dans les neutrophiles recrutés sur la gencive après injurieux chimique ou immunologique contribue à la destruction des tissus. Meloperoxidase peut influencer l'étendue et /ou la sévérité des parodontopathies [17]. Le plus haut niveau de la MPO ont été observées dans les cellules géantes. les niveaux d'expression élevés bcl2 peuvent empêcher l'apoptose cellulaire, induisant ainsi des cellules inflammatoires à rester localement dans le tissu périodontique, ce qui provoque par conséquent une sécrétion excessive de cytokines qui conduit à la destruction progressive du parodonte [1]. Myéloperoxydase peut être libéré de neutrophiles activés par dégranulation seulement dans des niveaux modérés [18], et la disponibilité de bcl2 protège les régions. Cytolyse des neutrophiles au cours de la formation de l'inflammation pourrait fournir un mécanisme de libération [18, 19] et d'expliquer les niveaux élevés de myéloperoxydase et S100. Activité de S100A12 et de la protéine C réactive peut être des marqueurs de l'activité inflammatoire dans la parodontite chronique [20]. Des études antérieures ont suggéré que l'apoptose est impliquée dans la pathogenèse de la maladie parodontale inflammatoire [21]. Il a également été démontré que la fréquence plus élevée de l'expression de Bcl-2 se traduit par la destruction progressive du parodonte [22].
Gamonall et all. [23] n'a pas trouvé de différence statistique dans varions quantité de bcl2 en gencive saine et gingivale des patients atteints de la maladie parodontale. Nos études ont confirmé l'avis de Pandilova [24] et Ellis et tous. [25] que la progression chronique de diminution de l'inflammation exprime bcl-2. Dans les fibroblastes gingivaux humains avec l'activation de l'inflammation des bcl2 n'a pas été observée dans les différents stades de l'infection et à cellules géantes épulis. Sule Bulut et tous. [26] résultats indiquent que la pathogénèse de la cyclosporine A hypertrophie gingivale induite pourrait impliquer l'inhibition de l'apoptose et la surexpression de Bcl-2 dans le cadre d'une grande sérum cyclosporine A. Notre étude a démontré un niveau d'expression élevé bcl2 et l'inhibition de l'apoptose dans les cellules de l'épithélium gingival. Nous pensons que cela est dû aux fonctions de protection de l'épithélium. Dans épithélium gingival S100 est également liée à la phase de différenciation [27]. Ces cellules positives sont connus pour activer les macrophages ou les neutrophiles [28]. Les recherches menées par Saito et al. [29] ont démontré de nombreuses cellules épithéliales bcl-2-positifs dans les biopsies gingivales chez des patients qui prenaient la nifédipine et la phénytoïne, indiquant que cette protéine pourrait être impliqué dans le développement de l'hyperplasie gingivale induite par la nifédipine. Nous croyons que la présence de protéine Bcl-2 est pas un indicateur de cours favorables cellulaires géant.
S100 joue un rôle important dans la réponse immunitaire liée à la parodontite. s100 lie 2 Ca2 + et 2 ions Zn2 +. Si Zn2 + se lie à S100, il diminue son affinité Ca2 +. S100 interagit également avec p53 dans une manière dépendante de Ca2 +, ce qui affecte la stabilité de l'interaction p53-S100 [30] Aforesaid S100-p53 interaction conduit à une inhibition de l'apoptose au cours de l'inflammation. La protéine Bcl-2 est un puissant inhibiteur de la mort cellulaire, alors que la protéine p53 de type sauvage active la voie apoptotique [5]. Le plus p53 mutées perd cette fonction et permet la prolifération de cellules néoplasiques. Bcl-2 module également la fonction de p53 et déclenche la prolifération et la transformation cellulaire [31].
Thr expression de la S100 a été détecté en tant que pro-inflammatoires phagocytes cellules aux sites d'inflammation intestinale [32, 33]. maladies auto-immunes systémiques (de dermatomyosite, le lupus érythémateux disséminé, la maladie de Kawasaki, etc.) ont une association claire avec l'expression S100 dans les macrophages infiltraton à la dégénérescence des tissus [34, 35].
Conclusion de les enquêtes sur le marqueur bcl2 dans les cellules gingivales pendant parodontale inflammation nous suggestion que parodonte tissus, en permanence exposés à des infections bactériennes peuvent contenir des cellules avec un niveau élevé de résultats de myéloperoxydase que les dommages de l'ADN par produit de la catalyse.
Les plus hauts niveaux d'activité s100 ont été trouvés sur les sites avec une inflammation chronique. Nos résultats suggèrent que la faible expression s100 peut jouer un rôle important dans l'activité des cellules géantes dans épulis à cellules géantes. Cela est considéré comme étant les facteurs les plus significatifs de pronostic dans le géant granulome cellulaire. À la suite de nos recherches, nous avons créé un schéma Fig. 3. La figure 3 S100, bcl2 et de l'interaction de la protéine myeloperoxid lors de l'inflammation parodontale
Déclarations de REMERCIEMENTS
Les auteurs tiennent à remercier le laboratoire d'immunologie à l'Université d'Etat Sumy.
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les auteurs déclarent qu'ils ont aucun conflit d'intérêts. FCCP de contributions des auteurs
étaient responsables de la conception de l'étude. SCT analysé et interprété les données. MTX a écrit le rapport. BFPP a fait le travail de laboratoire. RM, a contribué à la rédaction du manuscrit. Tous les auteurs ont lu, commenté et approuvé l'article final.
